UNIDAD ACADÉMICA DE FORMACIÓN DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICAS

Práctica Nº 9
RECUENTO DE MICROORGANISMOS

Estudiante: ______________________________________________________________

DESCRIPCION:
Este tipo de laboratorios virtuales es una actividad basada en la utilización
de las tecnologías de la información y la comunicación (TIC), donde se le
referencia al estudiante un material didáctico interactivo que le permita la
realización de las prácticas de laboratorio de biología debido a la
contingencia de propagación del coronavirus.

Objetivos

 Realizar el método de recuento viable en superficie y profundidad.

 Determinar las UFC (unidades formadoras de colonias), en cada
dilución.
 Calcular el número de unidades formadoras de colonias/mL (UFC/mL
de muestra).

1. Preinforme

● ¿Qué son las UFC en microbiología? ¿Todos los microorganismos pueden

formar UFC?
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● ¿Cuáles son las metodologías utilizadas para el recuento de

microorganismos viables totales? Explique en qué consiste cada una.
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● ¿Cómo se estudia la viabilidad de un microorganismo?

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 ¿Cómo se calcula el número de UFC/mL en una muestra?

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2. Bioconceptos

En estudios microbiológicos de análisis de alimentos, agua, muestras

ambientales entre otras, es importante determinar el número de
microorganismos presentes en la muestra para determinar su calidad.

El número de bacterias puede determinarse directamente por recuento del

número total de células o indirectamente por la estimación del número más
probable, por filtración o por el recuento de células viables en placa (células
capaces de dividirse en un medio de cultivo sólido, también se refieren
como unidades formadoras de colonias, UFCs).

Métodos de recuento de bacterias viables en placa

Estos métodos ofrecen la ventaja de cuantificar solo las bacterias viables

presentes en una muestra. Implican la dilución seriada de la muestra en
agua, caldo o solución salina, la inoculación de la dilución en medio de
cultivo sólido y la incubación durante 24-48 horas a la temperatura
apropiada. Son métodos de estimación de bacterias viables en término de
unidades formadoras de colonias (UFCs). El número de unidades formadoras
de colonias de una suspensión bacteriana puede determinarse mediante
dos técnicas descritas a continuación.

Recuento en placa por siembra en profundidad: consiste en añadir medio

de cultivo fundido y enfriado a 50ºC sobre placa de Petri que contiene una
cantidad determinada de la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota para
mezclar la muestra en el agar. Cuando el agar solidifica se incuban las
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placas. Las colonias se desarrollan tanto dentro del agar como en la

superficie. Es un método generalmente utilizado para el recuento de
microorganismos anaerobios facultativos o microaerofilos.

Recuento en placa por siembra en superficie: consiste en la siembra de un

volumen conocido de la dilución de la muestra sobre la superficie de un
medio de cultivo en placa Petri. En este método todas las colonias crecen
sobre la superficie del medio. Generalmente se utiliza esta técnica para el
recuento de bacterias aerobias.

3. MATERIALES Y METODOS

3.1 Materiales

 Computador (proporcionado por el estudiante)

 Guía de laboratorio (proporcionado por el estudiante)

Observe detenidamente los siguientes videos:

NOMBRE VIDEO DIRECCIÓN DURACIÓN

Métodos de recuento https://www.youtube.co 6´49”
microbiano m/watch?v=oOVcbloehn
8

3.2 METODOLOGÍA

Realice el conteo de las siguientes muestras y exprese el resultado en UFC,

diferenciando los morfo tipos en cada una:

Las siguientes imágenes son de muestras de suelo, por lo cual observaran

que no hay un solo morfo tipo en cada placa, cuando esto ocurre debemos
reportar las UFC de cada uno de ellos, fueron sembradas por superficie.

Exprese el resultado teniendo en cuenta el siguiente ejemplo:

10−𝟒 = 115 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠

(𝑁𝑜. 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠)115 𝑥 (𝑖𝑛𝑣𝑒𝑟𝑠𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛)10000 𝑥 10
𝑈𝐹𝐶 = 115𝑥105 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿
𝑈𝐹𝐶 = 11𝑥106 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿
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Morfotipos de
colonias Observaciones Número
Medio de
Fecha Dilución (Agrupar por macroscópicas por de
cultivo
características morfotipo colonias
morfológicas)*

Morfotipo 1 Forma:
Elevación:
Hongo
10-8 Margen:
Filamentoso Color:
Aspecto:
Morfotipo 2 Forma:
DIA 8 Sangre Elevación:
Margen:
Color:

Morfotipo 3 Forma:
Elevación:
Margen:
Color:
Morfotipo 1 Forma:
10-8 Elevación:
Hongo Margen:
Filamentoso Color:
Aspecto:
DIA 8 MRS
Morfotipo 2 Forma:
Elevación:
Hongo Margen:
Filamentoso Color:
Aspecto:

Forma:
Morfotipo 1 Elevación:
10-8 Margen:
Hongo Color:
Filamentoso Aspecto:

DIA 8 Nutritivo Morfotipo 2 Forma:

Elevación:
Margen:
Color:
Morfotipo 3 Forma:
Elevación:
Margen:
Color:
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Morfotipo 1 Forma:
10-8 Elevación:
Hongo filamentoso
Filamentoso Margen:
Color:
DIA 8 PDA Aspecto:
Morfotipo 2 Forma:
Elevación:
Hongo Margen:
Filamentoso Color:
Aspecto:
Morfotipo 1 Forma:
Elevación:
10-8 Hongo Margen:
Filamentoso Color:
Aspecto:
Morfotipo 2 Forma:
DIA 8 Actinomyces Elevación:
Margen:
Color:
Morfotipo 3 Forma:
Elevación:
Margen:
Color:

Después de terminar la tabla ingrese al siguiente link:

https://virtuallabs.nmsu.edu/equip.php
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Siga el paso a paso que le indica el simulador, tenga en cuenta que estos
conteos a diferencia de los anteriores son realizados en agares selectivos por
lo cual solo encontrara un tipo de colonia.

Conteo 1 Conteo 2
Muestra
ml inoculados
T° de incubación
Tiempo de incubación
Microorganismo
Imagen

4. Preguntas de profundización

 ¿Qué conclusiones parciales se pueden obtener del conteo de

microorganismos en placa?
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 ¿Cuáles son las limitaciones de esta metodología? ¿Cómo se pueden

minimizar los errores aleatorios?
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 Describa cómo obtendría una dilución de 10-5 de una muestra a

analizar, partiendo de una muestra de suelo cuya masa es 10000 mg.

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 ¿Por qué son importantes las diluciones seriadas en los recuentos de

bacterias?
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● Mencione las diferencias más significativas entre la metodología del

conteo en placa y el número más probable (NMP).
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 Realice un diagrama de flujo que explique metodológicamente cómo

se lleva a cabo el conteo de microorganismos en placa.

 Al realizar el conteo de una muestra de agua da como resultado que las

UFC de E. coli son incontables; qué indica este resultado en términos de
calidad del agua, según las NTC (Normas técnicas colombianas).
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 ¿Cuál es el fundamento del agar PCA?
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 ¿Cuáles son los grupos funcionales de microorganismos que se

encuentran en la rizosfera del suelo? Explique la función de cada grupo.
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 ¿Por qué se debe realizar la siembra en profundidad y por superficie para

el recuento de UFC y por qué se debe realizar por duplicado?
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5. Bibliografía consultada

Autor (es) Libro – Revista Páginas Año Editorial