Artículo

Extracción de etanol caliente presurizado de carotenoides de la zanahoria

Subproductos

Arwa Mustafa *, Leire Mijangos Trevino y Charlotta Turner

Resumen: Los carotenoides son conocidos por su actividad antioxidante y sus efectos beneficiosos
para la salud. Una de las fuentes más ricas en carotenoides son las zanahorias. Sin embargo,
alrededor del 25% de los La producción se considera como subproductos debido a las estrictas
políticas de mercado. El objetivo de este estudio era extraer carotenoides de esos subproductos.
La extracción convencional de carotenoides requieren el uso de solventes orgánicos, que son
costosos y peligrosos para el medio ambiente, y requieren procedimientos de eliminación
costosos. La extracción de líquido a presión (PLE) utiliza disolventes convencionales a
temperaturas y presiones elevadas, y requiere menos disolvente y tiempos de extracción más
cortos. El disolvente de extracción elegido en este estudio fue el etanol, que es un disolvente
generalmente reconocido como seguro (GRAS). El procedimiento de extracción fue optimizado
variando el tiempo de extracción (2-10 min) y la temperatura (60-180 °C). β El caroteno se utilizó
como indicador del contenido de carotenoides en las zanahorias. Los resultados mostraron que el
tiempo y las temperaturas de extracción tienen un efecto significativo en el rendimiento de
carotenoides. El aumento del volumen de descarga durante la extracción no mejoró la extraíble de
los carotenoides, lo que indica que el método de extracción fue principalmente desorción/difusión
controlada. El uso de un agente dispersante que absorbe el contenido de humedad era importante
para la eficiencia de la extracción. Analizando el contenido de β-caroteno en él. La diferente
duración de los ciclos de extracción mostró que alrededor del 80% se recuperó después de
alrededor de 20 minutos de extracción.

Palabras clave: extracción acelerada de disolventes; extracción de fluidos a presión; etanol;

zanahorias; β-caroteno.

1. Introducción

Los ingredientes nutracéuticos y los alimentos funcionales son conocidos por mejorar la salud
individual con especial énfasis en la salud de los ancianos, ya que se ha informado que sus
componentes bioactivos mejoran o incluso previenen enfermedades relacionadas con la edad
[1,2]. Los carotenoides son conocidos por su actividad antioxidante y por lo tanto tienen un efecto
neuroprotector. Se sabe que tienen efecto contra el oxígeno singlete, inhiben el colesterol LDL
oxidación, controlar el riesgo de una serie de diferentes cánceres y mejorar el desarrollo cognitivo
[1]. Uno de las fuentes más ricas en carotenoides es la zanahoria; los valores reportados están en
el rango de 16-38 mg/100 g [3-5]. Las zanahorias frescas que se venden en el mercado están
sujetas a estrictas políticas de mercado, es decir, las zanahorias deben cumplir con los valores
establecidos estándares de tamaño y forma, y como resultado de esto, alrededor del 25% de las
zanahorias producidas nunca llegan a el mercado. La naturaleza incontrolable de la producción de
zanahorias hace que un cuarto de la cosecha sea considerado como un subproducto [6].

La extracción de fluidos a presión (PFE) utiliza disolventes convencionales a temperaturas

controladas y presión, requiere menos disolvente y tiempos de extracción más cortos, y la puesta
en marcha de la técnica mantiene muestras en un ambiente libre de oxígeno y luz, lo que hace
preferible su uso en la industria nutracéutica [7-9]. La ventaja de aplicar presión no es sólo que las
temperaturas por encima del punto de ebullición atmosférico de los disolventes pueden ser
utilizado, pero también que obliga al disolvente de extracción en la matriz y por lo tanto puede
mejorar la eficiencia de la extracción [10]. El uso de la presión reduce la tensión superficial del
disolvente, lo que facilita la penetración del disolvente en los poros de la matriz. Esto resulta en de
la matriz y, por lo tanto, mejora la transferencia de masa del analito de la muestra a la solvente. En
resumen, el PFE mejora y por lo tanto resulta en procesos de extracción eficientes. El La extracción
de carotenoides de diferentes matrices de alimentos ha sido revisada recientemente en [11]. En
este artículo, hemos utilizado la PFE por sus méritos reportados.

El objetivo de este estudio fue hacer un uso beneficioso del subproducto de la zanahoria mediante
la extracción de alto valor carotenoides de ellos. Los métodos establecidos para la extracción de
carotenoides requieren el uso de disolventes orgánicos que incluyen n-hexano, propanol, metanol,
tetrahidrofurano o acetato de etilo [12-14]. La extracción líquido-líquido de carotenoides usando
solventes orgánicos se revisa en [15]. Estos orgánicos Los disolventes se consideran costosos,
peligrosos para el medio ambiente y requieren procedimientos de eliminación costosos. Sin
embargo, hay varios estudios que apuntan al uso de dióxido de carbono supercrítico como
extracción disolvente para los carotenoides de las zanahorias [5,7, 15]. En este estudio, el etanol a
temperatura elevada y la presión es, hasta donde sabemos, empleada por primera vez para crear
extractos ricos en carotenoides de un subproducto de la zanahoria. El etanol tiene un impacto
ambiental relativamente bajo y tiene una red positiva equilibrio de energía (NEB) [16,17] y es un
disolvente generalmente reconocido como seguro (GRAS). Sin embargo, el. La sostenibilidad del
etanol depende en gran medida de la fuente de donde se produjo.

2. Resultados y discusión

El objetivo general de este estudio es determinar los factores que afectan a la extracción de
carotenoides en subproductos de la zanahoria usando tecnología de fluidos presurizados. Los
diferentes experimentos fueron diseñados para ser capaz de entender el efecto de los diferentes
parámetros en la eficiencia de extracción de los carotenoides.

El contenido de α, β-carotenos fueron evaluados en dos tipos de subproductos de zanahoria

congelados, soft soggy zanahorias y zanahorias de naranja. Las cantidades de β-carotenos
obtenidas estaban en el rango de 12,3-22,9 mg/100 g y 8,1-19,3 mg/100 g de peso fresco (FW),
respectivamente (Tabla 1).

Tabla 1. Contenido α, β-carotenos en "soggy" suave y "zanahorias de naranja" extraídos a

diferentes tiempos y temperaturas.
En general, la concentración de β-carotenos fue menor en las zanahorias naranjas en comparación
con las empapadas zanahorias. El contenido de α-carotenos en las zanahorias empapadas estaba
en el rango de 2,7-4,1 mg/100 g y en las zanahorias frescas que estaba en el rango de 2,2-4,2
mg/100 g de zanahorias. El rendimiento de la extracción de caroteno de α zanahorias empapadas
se vio significativamente afectada por el tiempo y la temperatura de extracción y la interacción
entre los dos factores. El diseño de la superficie de respuesta muestra que tanto el tiempo y la
temperatura y la interacción entre estos dos factores afecta significativamente el rendimiento de
la extracción de α, β-carotenos, dando valores p de 0,002 y 0,006, respectivamente (Tabla 2). El
modelo ha ajustado el cuadrado R de 0,962, que significa que el modelo explica alrededor del 96%
de la variación. El mayor rendimiento se obtuvo usando condiciones de extracción de 60 C y 10
min de tiempo de extracción (5 ciclos de 2 min cada uno) (Figura 1a, b). De el diseño de la
respuesta de la superficie en la figura 1, se pudo ver que a temperaturas más altas y tiempos más
largos el contenido de α, β-carotenos eran bajos, lo que podría explicarse por la degradación de
los carotenoides que se sabe que son compuestos relativamente sensibles. Se ha informado de
que la pérdida de carotenos es parcialmente debido a la isomerización; sin embargo, la
degradación oxidativa es la reacción más predominante [14]. Se informó en estudios anteriores
que la pérdida de carotenoides debido al tratamiento térmico es del orden de 10–30% [3].
Nuestros resultados para β el contenido de caroteno en las zanahorias (18-23 mg/100 g) coincide
con los resultados anteriores mostrando el contenido de β-caroteno en variedades industriales
que estaban en el rango de 19-24 mg/100 g [3]. Las condiciones experimentales óptimas para la
extracción de carotenoides de las zanahorias fueron, dentro del rango de factores investigados, el
uso de etanol a 60 C, 50 bares, 5 min de precalentamiento más 10 min de extracción (5 × 2 min).
Con este método, se utilizaron alrededor de 20 mL de etanol al 99% por cada 2,8 g del material de
partida.

Tabla 2. Valores P del efecto del tiempo y la temperatura de la extracción y su interacción en el

rendimiento α, β-carotenos de la regresión de la superficie de respuesta.

Figura 1. Gráfico de superficie que muestra el efecto del tiempo y la temperatura de la extracción
en el rendimiento de α y β-caroteno (mg/100 g FW). 1 ciclo = 2 min de extracción.
En el PFE usando un Dionex ASE-200®, el volumen de disolvente fresco introducido en la celda de
extracción en el comienzo de cada ciclo de extracción ha variado entre 16-22 mL cuando se utiliza
un volumen de descarga del 60% y el 100%, respectivamente. El objetivo de esta prueba era
mostrar cuánto contenido del extraíble Los carotenoides varían con el volumen de descarga. Los
resultados muestran que el aumento de la cantidad de descarga del 60% al 100% en cada ciclo de
extracción bajo las mismas condiciones de extracción (10 min y 60 C) no tenía un efecto
significativo en el rendimiento de los carotenoides (Figura 2). Esto podría indicar que la naturaleza
de la extracción en esta etapa se controla por desorción/difusión, en lugar de controlar la
solubilidad.

Figura 2. La variación en el rendimiento de los carotenoides en diferentes momentos de la

extracción y el lavado por ciento. Zanahorias de tipo I (obtenidas en fresco), n = 3.
2.2. Efecto del agente dispersante en el rendimiento de los carotenoides

El objetivo de esta prueba era determinar si, y en qué medida, la adición de dispersión o secado
podría afectar el rendimiento de los carotenoides. Es crucial saber si el uso de la Hidromatriz
mejora sustancialmente el rendimiento de los carotenoides, ya que su uso afecta directamente a
la economía y también tiene efectos ambientales, especialmente en un proceso de mayor escala.
No obstante, el uso de agente secante de importancia en el proceso de extracción, ya que la
presencia de agua dificulta la eficiencia de la extracción. La principal observación de estos
experimentos es que para secar la muestra bastaba con usar 1 g de la Hidromatriz en comparación
con los 2,8 g de los experimentos anteriores. Esto se debió probablemente al hecho de que esas
zanahorias fueron usadas frescas y no congeladas y descongeladas como en los experimentos
anteriores. En comparación con las pruebas de control en las que no se utilizó ningún agente
dispersante, la Hydromatrix mejoró la extracción de β-caroteno ligeramente, mientras que cuando
se utilizaron cuentas de vidrio, la eficiencia de la extracción no se vio casi afectada (Tabla 3). Una
prueba de ANOVA para los diferentes tratamientos mostró que hay no había ninguna diferencia
estadística entre el rendimiento en los diferentes tratamientos, valor p = 0,053. Esto podría
indican que el uso de agentes de dispersión en muestras de zanahoria fresca no mejora
significativamente el rendimiento de carotenoides. No se puede llegar a la misma conclusión en lo
que respecta a las muestras almacenadas en congelador, ya que al descongelarse se liberaría más
agua que podría afectar a la extracción de carotenoides. Cantidades más grandes de la Hidromatriz
se necesitaría entonces para crear un polvo seco y de flujo libre, como se ha mencionado
anteriormente.

Tabla 3. Efecto de la utilización de diferentes tipos de agentes de dispersión/secado en el

rendimiento de β carotenos en zanahorias de naranja fresca. Las muestras se extrajeron con
etanol a 60 C para 5 veces 2 min (10 min en total).

2.3. Rendimiento de la extracción durante los ciclos de extracción

El rendimiento total de β-caroteno después de nueve series de ciclos de extracción (3 × 2 min más
3 × 5 min más 3 × 15 min) a 60 C es de entre 0,5-6,2 mg/100 g, basado en los valores medios de las
zanahorias frescas. El objetivo de esta prueba era mostrar cuántos carotenoides son extraíbles en
cada conjunto de ciclos de extracción y a partir de la curva de extracción es posible evaluar el
rendimiento de la extracción en función de la extracción tiempo. También es factible evaluar
cuándo la extracción se convierte principalmente en difusión controlada con el Suponiendo que la
extracción es de solubilidad controlada para empezar (Figura 3a). La figura muestra que el 78% del
total de caroteno extraíble β se obtuvo en 19 min y un total del 89% se obtuvo en 24 minutos. Se
ha demostrado que el rendimiento de los carotenoides comienza a nivelarse después de 24 min de
extracción, después de que lo más probable es que la extracción esté principalmente controlada
por desorción/difusión. La figura 3b podría utilizarse como una ilustración de un exhaustivo
proceso de extracción de los carotenoides extraíbles, donde en el último conjunto de los ciclos se
obtuvieron menos de 1 mg/100 g de zanahorias frescas. En este experimento, diferentes
longitudes de se utilizaron ciclos de extracción para aumentar la eficiencia de la extracción, es
decir, durante la parte de solubilidad controlada de la extracción, los ciclos eran más cortos,
mientras que durante la parte final de desorción/difusión de la extracción, se emplearon ciclos
más largos. La concentración total acumulada de β-carotenos después de 69 min de extracción (3
× 2 min más 3 × 5 min más 3 × 15 min) es del orden de 28,4 mg/100 g de fresco zanahorias. El
rendimiento de β-carotenos en este experimento es sustancialmente diferente de lo que se ha
demostrado en experimentos anteriores debido a que en este estudio se utilizaron diferentes
tipos de zanahorias y ella extracción se hizo de una manera diferente. La cantidad total de etanol
utilizada en este método está en el orden de 170 mL con una concentración total de β-carotenos
del orden de 15,5 mg/mL.

Debe tenerse en cuenta que las condiciones óptimas de extracción no pueden considerarse
totalmente exhaustivo, lo que podría explicarse en parte por el hecho de tener algunos
carotenoides extraíbles durante mucho más tiempo tiempos de extracción (Figura 3). Sin embargo,
un tiempo de extracción demasiado largo puede causar la degradación de la carotenoides si la
extracción se realiza en un solo paso. Los diferentes niveles de carotenoides producen que se
encuentran en este documento pueden explicarse por los diferentes procedimientos de
extracción, la zanahoria diferente variedades que se han utilizado, además de la inevitable
variación dentro de un solo lote de zanahorias. Sin embargo, dentro de un conjunto de
experimentos, tales errores deben ser pequeños.

Figura 3. Rendimiento de la extracción de β-carotenos de zanahorias frescas en función de la

extracción tiempo; (A) rendimiento después de cada ciclo (3 × 2 min. más 3 × 5 min. más 3 × 15
min.); (B) extracción curva que muestra las concentraciones acumuladas. Las barras muestran la
variación de las réplicas, n = 3. Las muestras fueron extraídas a 60 C.
3. Experimental

3.1. Materiales y muestras de pre-tratamiento

Se hizo una selección sistemática de diferentes fuentes de zanahorias suecas; de una granja de
zanahorias (I), alimentos procesador (II) y zanahorias comercializables compradas en las tiendas de
comestibles locales (III) que cubren todo él desde la producción hasta las zanahorias
comercializables. Los subproductos de la zanahoria son cualquier tipo de zanahoria que no
cumplen con la especificación estándar del mercado y por lo tanto no llega al mercado. Los
diferentes tipos utilizadas en nuestro estudio; zanahorias suaves y empapadas hervidas (II);
zanahorias anaranjadas enteras sin clasificar (II); enteras sin clasificar subproductos de las
zanahorias naranjas (I); y zanahorias frescas (III). Las muestras congeladas fueron descongeladas,
molidas y homogeneizado utilizando un procesador de alimentos (MCM2054 Bosh, 240W).
Además, las zanahorias frescas fueron compradas en un supermercado en Uppsala, Suecia, y
utilizado en algunos de los experimentos. Cerca de 2 g de las muestras molidas se usaron para la
extracción. Cuando se utilizaron agentes dispersantes, se mezclaron junto con las muestras
pesadas antes de transferir toda la mezcla a la célula de extracción. La Hydromatrix, una tierra
diatomácea inerte, se utilizó como medio de dispersión, que se obtuvo de Varian, (Palo Alto, CA
USA). Las cuentas de vidrio de tamaño 2 mm fueron compradas a VWR, Estocolmo, Suecia.
Carotenoides, mezcla de isómeros de zanahorias, mínimo 95% HPLC, ~2:1 β: α y β-caroteno,
mínimo el 95% de la HPLC se obtuvo de Sigma Aldrich (Steinheim, Alemania).

3.2. Análisis

Los métodos de HPLC utilizados para el análisis de carotenoides se hicieron utilizando dos sistemas
diferentes y métodos, HPLC-DAD y HPLC-UV y serán referidos como método A y B,
respectivamente. El cambio de los sistemas se debió al traslado del laboratorio de investigación de
Uppsala a la Universidad de Lund. Dado que el β-caroteno es la forma más abundante de
carotenoides en las zanahorias (60-80%) [18,19], este isómero se utilizó como indicador del
contenido de carotenoides en los subproductos de la zanahoria.

Método A de HPLC: Este método fue llevado a cabo por HPLC-DAD (Dionex UltiMate 3000,
Germering, Alemania) utilizando una columna analítica YMC C-30 (150 × 2,1 mm id). Se empleó la
elución de gradiente, utilizando una fase móvil que consiste en (A) metanol-agua (90:10; v/v) y (B)
MTBE-metanol-agua (90:6:4; v/v/v). Los cromatogramas fueron monitoreados a una longitud de
onda de 450 nm.
Método B de HPLC: Este método fue llevado a cabo por HPLC-UV (Agilent 1100, Waldbronn,
Alemania) usando una columna analítica YMC C-30 (150 × 2.1 mm id). Se empleó la elución
isocrática, usando una fase móvil que consiste en metanol-agua-MTBE 45:5:50 (vol%). Los
cromatogramas fueron monitoreados a una longitud de onda de 450 nm (Figura 4).

Figura 4. Cromatograma HPLC-UV del extracto de zanahoria utilizando PFE, λ = 450.

3.3. Extracción de fluido presurizado -común para todos los experimentos

Todos los experimentos de extracción se realizaron utilizando una extracción acelerada de

solventes (ASE-200™) equipo de Dionex Corp. (Salt Lake City, UT, USA), con los siguientes
parámetros mantenidas constantes: presión (50 bares); tiempo de calentamiento (5 min); volumen
de descarga (60%); y tiempo de purga (30 s). El disolvente de extracción utilizado en todos los
experimentos fue etanol (99%), desgasificado durante 30 min por ultrasonido usando un Sonorex
Super 10 p, Labassco, Bandelin.

3.4. Extracción de fluido presurizado - Efecto del tiempo, temperatura y volumen de descarga

El efecto de la variación de los parámetros de extracción en el rendimiento de los carotenoides fue

probado por una factorial completo diseño usando zanahorias (II). Los factores estudiados fueron
el tiempo (1-5 ciclos, 2 min por ciclo) y la temperatura (60-180 C) de la extracción. El análisis de los
carotenoides en estos experimentos se hizo usando método A. El efecto de variar el porcentaje de
descarga en el rendimiento de los carotenoides se probó comparando el rendimiento del modelo
de condiciones optimizadas de tiempo-temperatura que utiliza una descarga del 60% al 100%
usando el mismo tiempo. En este experimento la temperatura de extracción se mantuvo a 60 C y
la duración por ciclo se mantuvo a 2 min. Las zanahorias utilizadas en esta prueba se obtuvieron
de la industria B. El análisis de la de los carotenoides se hizo con el método B.

3.5. Extracción de fluido presurizado - Efecto del agente dispersante/secador

El efecto de la adición de un agente dispersante en el rendimiento de la extracción se llevó a cabo

en un tiempo fijo y temperatura de la extracción (60 C y 5 ciclos, 2 min por ciclo) con Hydromatrix,
cuentas de vidrio y no hay agente dispersante como control. Se compararon los rendimientos de
las diferentes carreras. Las zanahorias usadas en este de prueba fueron comprados frescos. Los
experimentos se hicieron por triplicado. El análisis de los carotenoides en estos los experimentos
se hicieron con el método A.

3.6. Rendimiento de la extracción durante los ciclos de extracción

El rendimiento de la extracción de β-caroteno durante el curso de la extracción se obtuvo

mediante la recolección de muestras después de cada ciclo de 2 minutos. Cada ciclo tenía un
volumen de descarga del 100% y un tiempo de purga de 30 s. El primer conjunto de ciclos fue de 3
× 2 min, el segundo conjunto fue de 3 × 5 min y el tercero de 3 × 15 min. Extractos de cada
conjunto de ciclos se recogieron en frascos de recolección separados (nueve en total) que fueron
analizados por separado. Las zanahorias utilizadas en este ensayo se obtuvieron de I. Los
experimentos se hicieron por triplicado. El análisis de los carotenoides en estos experimentos se
hizo con el método B.

4. Conclusiones

El tiempo y la temperatura de la extracción tienen un efecto significativo en el rendimiento de los

carotenoides. Soggy Las zanahorias tienen un mayor contenido de β-carotenos en comparación
con las zanahorias naranjas, mientras que el contenido de α-carotenos parece ser comparable en
ambos tipos de zanahorias. Las condiciones optimizadas para la extracción se encuentran en 60 C,
50 bares, 5 min de precalentamiento más 10 min de extracción (5 × 2 min). La primera etapa de la
extracción es una solubilidad controlada y la etapa final fue controlada por desorción/difusión.
Aumentando la cantidad del disolvente no mejora la extractabilidad de los carotenoides. El uso de
agentes dispersantes/secantes es importante de la eficiencia de la extracción. El método
presentado en este estudio tiene sus méritos sobre los métodos tradicionales para ha sido más
corto en el tiempo y utiliza solventes de extracción se consideran solventes "verdes".