Efectos de la luz LED verde y tres tensiones sobre la biomasa y la

acumulación de lípidos con el cultivo de microalgas en dos fases.

Jang-Hyun Junga, 1, Phunlap Sirisukd, 1, Chae Hun Rab, 1, Jong-Myung Kimc,
Gwi-Taek Jeongd, Sung-Koo Kimd, ⁎
Resumen
Se evaluaron los efectos de las longitudes de onda del diodo emisor de luz (LED),
la concentración de nitrato y la concentración de sal para el cultivo en dos fases de
las especies de microalgas Phaeodactylum tricornutum, Dunaliella tertiolecta e
Isochrysis galbana sobre el crecimiento celular y la producción de lípidos. Los LED
azules produjeron la mayor biomasa de P. tricornutum a una concentración de
nitrato de 8 mg / L, alcanzando 0.97 g dcw / L con una tasa de crecimiento
específica (μ) de 0.047 h − 1, seguido de I. galbana con 0.79 g dcw / L y μ = 0.040
h − 1 y D. tertiolecta con 0.55 g dcw / L y μ = 0.028 h − 1. De las tres microalgas,
P. tricornutum tuvo la tasa de crecimiento específico más alta de μmáx = 0.070 h −
1 y la constante de saturación más baja de Ks = 4.18 mg / L, lo que resultó en un
rápido crecimiento celular. La mayor producción de lípidos se obtuvo bajo tensión
de longitud de onda LED verde en el día 14, alcanzando el 60,6% (p / p) del peso
de la célula seca entre las tres microalgas. Los principales ácidos grasos
producidos por las tres microalgas fueron el ácido mirístico (C14: 0), el ácido
palmítico (C16: 0), el ácido oleico (C18: 1) y el ácido araquídico (C20: 0), que
comprendieron 72.68% –84.16% (p / p) del contenido total de ácidos grasos bajo
tres tensiones.
1. Introducción
Las microalgas son posibles alternativas sostenibles a los combustibles fósiles
[1,2]. Sin embargo, la producción comercial de biocombustibles derivados de
microalgas se ha visto obstaculizada por muchos obstáculos, incluido el alto
consumo de energía y la complejidad de los procesos posteriores. La baja
productividad de biomasa por microalgas ricas en lípidos es uno de los principales
cuellos de botella para la utilización generalizada de biocombustibles [3].
Entre las microalgas, Phaeodactylum tricornutum, Dunaliella tertiolecta e
Isochrysis galbana tienen méritos deseables para contribuir a cuestiones
ambientales y económicas como su fijación de carbono, alta productividad de
biomasa y síntesis de lípidos [4–6]. Además, estas microalgas han demostrado ser
una buena fuente de compuestos bioactivos, como la reducción de enfermedades
inflamatorias y cáncer de colon y piel [4,7].
Para lograr el máximo crecimiento, las microalgas requieren condiciones óptimas
de luz dentro de una banda espectral estrecha. Los diodos emisores de luz (LED)
pueden reducir el consumo de energía al producir luz a longitudes de onda azules
(450–475 nm) o rojas (630–675 nm) para el cultivo de microalgas [8,9]; Estos
promueven la fotosíntesis y el crecimiento de microalgas mejor que otras
longitudes de onda. Las longitudes de onda azul y roja son las principales bandas
de absorción de todas las clorofilas [10].
En la mayoría de las microalgas, el contenido de lípidos se puede aumentar
mediante el uso de tensiones físicas o químicas para inhibir el crecimiento en el
cultivo celular [11-13]. Sin embargo, esos estudios se centraron en la inanición de
nutrientes en el cultivo de microalgas, lo que resultó en una mayor acumulación de
lípidos en una amplia variedad de especies de microalgas. Otros estreses como la
sal, la temperatura y la intensidad de la luz también afectan la acumulación de
lípidos en las microalgas debido a la tasa reducida de metabolismo bajo estrés.
Bajo estas condiciones de estrés, el exceso de carbono generado se canaliza
hacia moléculas de almacenamiento, predominantemente triacilglicerol (TAG) o
almidón, dependiendo de la especie de microalgas [14]. En particular, un problema
importante que enfrentan las aplicaciones de estrés es la necesidad de un sistema
de cultivo complejo e inconveniente para la producción de biomasa y lípidos de
microalgas utilizando dos fotobiorreactores. Por lo tanto, este estudio evaluó la
integración de cultivos de dos fases para el crecimiento celular y el estrés
utilizando el agotamiento de nitrato, la sal y las longitudes de onda LED en tres
especies de microalgas. El objetivo final era demostrar que el estrés de la longitud
de onda del LED verde inducía la producción de lípidos microalgales y mejoraba la
composición de ácidos grasos en comparación con otras aplicaciones de estrés.
Este estudio evaluó los efectos de la concentración de nitrato, diversos factores de
estrés y un proceso de cultivo en dos fases sobre el crecimiento y la acumulación
de lípidos en las microalgas Phaeodactylum tricornutum, Dunaliella tertiolecta e
Isochrysis galbana.
2. Materiales y métodos

2.1. Cepas de microalgas y condiciones de cultivo.

Las microalgas P. tricornutum, D. tertiolecta e I. galbana se obtuvieron del Centro
de Cultivo de Microalgas Marinas de Corea (KMCC, Busan, Corea). Pertenecen a
las clases Diatomophyceae, Chlorophyceae y Prymnesiophyceae,
respectivamente; Estas cepas se utilizan comúnmente en la producción de lípidos
porque generan altos niveles de biomasa y producción de lípidos [4–6].
Las especies de microalgas se cultivaron en agua de mar esterilizada con medio
f / 2 [15]. Primero, se inocularon 1,5 l de medio en un matraz de 2 l con 1 x 10 5
células de microalgas / ml de un cultivo de semillas con un volumen de trabajo de
700 ml en un matraz de 1 l. Se inocularon tres microalgas a una concentración
celular final de 1 x 105 células / ml. Esto se cultivó a 20 ± 1 ° C bajo una intensidad
de luz de 100 μmol / m2 / s con LED azul (465 nm), LED verde (520 nm) y luz
fluorescente. La aireación con aire filtrado se proporcionó a través de una piedra
de aire a una velocidad de 2,5 l / min. Cada uno de los matraces se expuso a la
luz de un LED azul (465 nm) o una luz fluorescente en un ciclo de 12 h: 12 h de
luz y oscuridad durante 15 días. Los efectos del contenido de nitrato en la
producción de biomasa y lípidos se realizaron con concentraciones de nitrato de 8,
12, 16, 20 y 24 mg / L.
2.2. Diseño y configuración de fuentes de luz LED.
Las luces de panel LED cuadradas (28.5 × 38.6 × 4.4 cm; Luxpia, Suwon, Corea)
se usaron como fuente de luz para el crecimiento fotoautotrófico de las microalgas,
como se muestra en la figura 1A. Cada tira de LED constaba de 20 diodos
espaciados a intervalos de 1 cm vertical y horizontalmente. Se evaluaron los
efectos de los paneles LED cuadrados que contienen tiras LED que emiten luz
azul (465 nm), verde (520 nm) y roja (660 nm) sobre la tasa de crecimiento de
algas.
Como se muestra en la Fig. 1B, las luces LED del panel cuadrado se colocaron en
paralelo para iluminar el cultivo del matraz de 2 L a una distancia de 15 cm y se
separaron de otras fuentes de iluminación. La intensidad de la luz se midió con un
sensor de luz (TES-1339; UINS, Busan, Corea) como el flujo de fotones en la línea
central de un matraz lleno de medio de cultivo. Se realizó un experimento de
control bajo luz fluorescente de la misma intensidad de luz y condiciones de
funcionamiento durante 15 días.

Fig. 1. Imagen de (A) la configuración de luces LED y (B) el cultivo de algas en los
instrumentos.
2.3. Estrategia de cultivo con tres aplicaciones de estrés para la
acumulación de lípidos.
Cuando están estresadas, muchas especies de microalgas acumulan cantidades
considerables de lípidos, lo que conduce a altos rendimientos de aceite. Sin
embargo, el mayor contenido de lípidos con la aplicación de estrés se acompaña
de tasas de crecimiento más bajas, lo que conduce a una disminución en la
biomasa y la productividad de los lípidos [3]. Por lo tanto, se usó un proceso de
cultivo de dos fases para dilucidar el vínculo entre la producción de biomasa y tres
tensiones para la acumulación de lípidos como producto secundario de
almacenamiento de energía. Con esta estrategia, la primera fase sin aplicación de
estrés permitió una alta producción de biomasa utilizando un LED azul (465 nm)
durante 12 días. Cuando la biomasa de microalgas alcanzó la fase estacionaria,
se inició la segunda fase, que comprende un control sin estrés y tres esfuerzos:
agotamiento de nitrato, sal y longitud de onda del LED. Para el control sin estrés,
las células se transfirieron a medio f / 2 nuevo y luego se incubaron en el mismo
entorno que el cultivo de la primera fase. Para el agotamiento de nitrato y las
tensiones de sal, el medio f / 2 se reemplazó con condiciones libres de nitrato o
NaCl 0,5 M, respectivamente. Para la tensión de longitud de onda del LED, el LED
azul (465 nm) se reemplazó por un LED verde (520 nm). Estas tres tensiones se
realizaron bajo las mismas condiciones de cultivo y ambiente.
2.4. Análisis
La densidad celular inicial se determinó usando la curva estándar de OD680
versus peso de células secas (DCW) usando un espectrofotómetro ultravioleta
(UV) (Ultrospec 6300 Pro; Biochrom, Cambridge, Reino Unido). Según esta curva
estándar, una unidad de OD680 corresponde a 0,42, 0,34 y 0,42 g dcw / L de P.
tricornutum, D. tertiolecta e I. galbana, respectivamente. La tasa de crecimiento
específico (μ) de las microalgas y la cinética de crecimiento de las tres microalgas
se determinaron de acuerdo con los métodos descritos por estudios previos
[16,17].
La concentración de nitrato se determinó de acuerdo con métodos estándar
utilizando un espectrofotómetro UV [18]. Las concentraciones de clorofila ayb (Chl
a, Chl b) y carotenoides totales (TC) se calcularon utilizando las siguientes
ecuaciones [19]:
Chl a (μg/mL) = 11.24 × OD662 – 2.04 × OD645(1)
Chl b (μg/mL) = 20.13 × OD645 – 4.19 × OD662(2)
TC (μg/mL) = (1000 × OD470 – 1.90 × Chl a – 6.31 × Chl b)/214 (3)
2.5. Extracción de lípidos y transesterificación.
Después del cultivo, las células de microalgas suspendidas se cosecharon por
centrifugación (994 × g, 10 min) y se liofilizaron en un liofilizador (SFDSM-24 L;
Samwon Industry, Seúl, Corea). Los lípidos totales se extrajeron con cloroformo /
metanol (2: 1, v / v) y se cuantificaron gravimétricamente [20]. El contenido de
lípidos en peso seco se calculó usando la ecuación.
Contenido de lípidos (% de DCW) = (4)
donde el contenido de lípidos es el contenido de lípidos celulares de las
microalgas (% de DCW), W1 (g) es el peso del tubo de vidrio vacío de 20 ml, W2
(g) es el peso del vidrio de 20 ml que extrae lípidos tubo, y DCW (g) es el peso
celular seco de las microalgas.
La composición lipídica se determinó como ésteres metílicos de ácidos grasos
(FAMEs) mediante el método de transesterificación directa informado por Dhup et
al. [21] El perfil FAME se realizó mediante cromatografía de gases (GC; YL 6100;
YoungLin, Anyang, Corea) con un detector de ionización de llama (FID) y una
columna capilar de sílice (HP-INNOWax; 30 m × 0.32 mm × 0.5 μm; Agilent
Technologies, Santa Clara, CA, EE. UU.). La temperatura de la columna se
mantuvo a 140 ° C durante 5 min, aumentó a 240 ° C a una velocidad de 5 ° C /
min, y luego se mantuvo a 240 ° C durante 5 min. Tanto la temperatura del
inyector como la del detector FID se ajustaron a 250 ° C. Los FAME se
identificaron comparando sus tiempos de retención con los de los estándares
auténticos.

Fig. 2. Efectos de diferentes fuentes de luz de LED azul (465 nm) y luz
fluorescente sobre el crecimiento de tres microalgas, (A) P. tricornutum, (B) D.
tertiolecta y (C) I. galbana.
(D) Producción de biomasa y tasa de crecimiento específico de tres microalgas a
partir de los datos del experimento que se muestran en la Fig. 2 (A – C).
Los datos que se muestran son la media ± DE, n = 3. Las letras diferentes indican
diferencias significativas en el contenido de lípidos (P <0.05, prueba de Duncan).
2.6. Análisis estadístico
Todos los experimentos se llevaron a cabo por triplicado. En las figuras, los
valores son la media ± DE (desviación estándar) de tres mediciones
independientes. En las tablas, los datos fueron el valor promedio de tres pruebas
independientes. La importancia estadística del contenido de biomasa y lípidos se
evaluó mediante un análisis de varianza unidireccional (ANOVA) y la prueba de
rango múltiple de Duncan (P <0.05) utilizando SPSS versión 23 (SPSS, Cary, NC,
EE. UU.).

3. Resultados y discusión
3.1. Efecto del LED azul en la producción de biomasa por las tres microalgas
Se evaluó la influencia del LED azul (465 nm) y la luz fluorescente en el
crecimiento de las tres microalgas. P. tricornutum, D. tertiolecta e I. galbana se
cultivaron en matraces de 2 L con un volumen de trabajo de 1.5 L a 20 ° C ± 1 ° C,
una tasa de aireación de 2.5 L / min, concentración de nitrato de 8 mg / L, y un
ciclo de luz / oscuridad de 12/12 h bajo una intensidad de luz de 100 μmol / m2 / s
durante 15 días. Se realizó un experimento de control utilizando luz fluorescente
con la misma intensidad de luz y con las mismas condiciones de funcionamiento
durante 15 días. El informe anterior mostró que el crecimiento y la acumulación de
lípidos de las microalgas se pueden mejorar utilizando 100 μmol / m2 / s de luces
azul y verde, respectivamente [16]. Por lo tanto, se eligieron 100 μmol / m2 / s de
LED azul y verde como la longitud de onda para la producción de biomasa y la
acumulación de lípidos en el cultivo de dos fases.
La figura 2 muestra el crecimiento logarítmico y las fases estacionarias de las tres
microalgas. P. tricornutum (Fig. 2A), D. tertiolecta (Fig. 2B) e I. galbana (Fig. 2C)
produjeron más biomasa bajo el LED azul que bajo luz fluorescente durante 15
días. Estos resultados indicaron que el uso de un LED azul debería mejorar
significativamente la producción de biomasa de microalgas. Korbee y col. [22]
informaron que el crecimiento de las microalgas se puede mejorar utilizando LED
azules o rojos. Por lo tanto, se usó LED azul como la longitud de onda para la
producción de biomasa en el cultivo de la primera fase. En todas las microalgas, el
crecimiento tendió a disminuir y permanecer estacionario después del día 12.
Roopnarain et al. [23] informó un resultado similar; sugirieron que la productividad
de la biomasa era proporcional a la concentración de nitrato utilizada en el medio y
las concentraciones más bajas de nitrato resultaron en una reducción de la
productividad de biomasa. Por lo tanto, la baja concentración de nitrato en el
medio de crecimiento redujo la tasa de crecimiento celular y otros factores
influyeron en la tasa de crecimiento celular, como el fosfato, la temperatura y la
intensidad de la luz [24].
La figura 2D resume la producción de biomasa y la tasa de crecimiento específico
de las tres microalgas a partir de los datos experimentales que se muestran en la
figura 2A-C. El LED azul produjo la mayor biomasa de P. tricornutum a una
concentración de nitrato de 8 mg / L, alcanzando 0.97 g dcw / L con μ = 0.047 h −
1, seguido de I. galbana (0.79 g dcw / L, μ = 0.040 h − 1) y D. tertiolecta (0.55 g
dcw / L, μ = 0.028 h − 1). El LED azul resultó en una mayor producción de
biomasa de las tres microalgas en comparación con la luz fluorescente en nuestro
estudio. Estos resultados fueron similares a los estudios anteriores [16, 25].
Informamos que las microalgas crecen bien bajo la longitud de onda del LED azul,
porque la luz azul era una de las principales bandas de absorción para la
fotosíntesis.

Fig. 3. Perfiles temporales de producción de biomasa de (A) P. tricornutum, (B) D.

tertiolecta y (C) I. galbana a diferentes concentraciones iniciales de nitrato. (D)
Gráfico doble recíproco de la ecuación de Monod (Ec. 3) para la determinación de
tres parámetros de crecimiento de microalgas de μmax y Ks a partir de un gráfico
de 1 / μ versus 1 / [s].
Los datos que se muestran son la media ± DE, n = 3.
3.2. Efecto de la concentración de nitrato en la cinética del crecimiento.
Se evaluó el efecto de la concentración de nitrato en la producción de biomasa de
microalgas para las tres microalgas. En este estudio, se usaron diferentes
concentraciones de NaNO3 para determinar la concentración óptima de nitrato
para el crecimiento celular y los parámetros del modelo cinético μmax y Ks
utilizando la ecuación de Monod. Se prepararon concentraciones de nitrato de 8.0,
12.0, 16.0, 20.0 y 24.0 mg / L en cultivos con una intensidad de luz LED azul de
100 μmol / m2 / s, como se muestra en la Fig. 3. La Fig. 3A muestra que el
crecimiento de P El tricornutum con una concentración de nitrato de 20.0 mg / L
resultó en una producción máxima de biomasa de 1.30 g dcw / L y alcanzó la fase
estacionaria a los 12 días. D. tertiolecta con 12.0 mg / L de nitrato tuvo una
producción máxima de biomasa de 0.58 g dcw / L y alcanzó la fase estacionaria a
los 12 días (Fig. 3B). La I. galbana cultivada a una concentración de nitrato de
16.0 mg / L tuvo una producción máxima de biomasa de 1.43 g dcw / L y alcanzó
la fase estacionaria a los 12 días (Fig. 3C). Un aumento adicional en la
concentración de nitrato sobre 24.0 mg / L resultó en una disminución en la
producción de biomasa. Como lo indican estos resultados, las altas
concentraciones de nitrato tienen un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de
algas [26].
Como se muestra en la Fig. 3D, los parámetros μmáx y Ks se calcularon a partir
del crecimiento de algas a concentraciones de nitrato de 8.0, 12.0, 16.0, 20.0 y
24.0 mg / L utilizando la ecuación de Monod. Los datos experimentales mostrados
en la figura 3A – C se usaron para determinar los parámetros del modelo cinético
utilizando la ecuación de Monod. Los valores respectivos de μmáx y Ks para P.
tricornutum, D. tertiolecta e I. galbana fueron 0.070 h − 1 y 4.18 mg / L (R2 = 0.93),
0.034 h − 1 y 4.50 mg / L (R2 = 0.91) y 0.059 h − 1 y 4.27 mg / L (R2 = 0.93).
Estos resultados indicaron que la relación entre la tasa de crecimiento específica y
la concentración de nitrato asume la forma de cinética de saturación. Ks
corresponde a la concentración de nitrato, dando el μmax semi-máximo. De las
tres microalgas, P. tricornutum tuvo la tasa de crecimiento específica máxima
(μmáx = 0.070 h − 1) y la constante de saturación más baja (Ks = 4.18 mg / L), lo
que indica un rápido crecimiento celular. El bajo valor de Ks sugiere que las algas
tienen una alta absorción de nitrato para el crecimiento celular.
3.3. Efecto de tres tensiones sobre la acumulación de lípidos utilizando un
proceso de cultivo de dos fases.
La figura 4 muestra el proceso de cultivo en dos fases bajo una intensidad de luz
LED azul de 100 μmol / m2 / s, con tres tensiones: agotamiento de nitrato, tensión
salina y tensión de longitud de onda LED verde. Como se muestra en la Fig. 4A, el
crecimiento de P. tricornutum, D. tertiolecta e I. galbana alcanzó la fase
estacionaria (primera fase) a los 12 días con una producción de biomasa de 1.30,
0.58 y 1.43 g dcw / L, respectivamente. Luego, se llevaron a cabo cultivos de
segunda fase con las tres tensiones durante 3 días para encontrar el tiempo de
cultivo óptimo para acumular un alto contenido de lípidos, como se muestra en la
figura 4B-D. Las barras blancas muestran el contenido de lípidos después del día
12 del cultivo de la primera fase. La Fig. 4B muestra la acumulación de lípidos de
P. tricornutum en diferentes condiciones: un control sin estrés, y tensiones de
nitrato, sal y longitud de onda LED verde. De las tres tensiones, la longitud de
onda del LED verde produjo el mayor contenido de lípidos, alcanzando el 60,6% (p
/ p) en el día 14, seguido de sal del 57,1% (p / p), agotamiento de nitrato del 50,1%
(p / p), y el control del 43,5% (p / p), como se muestra en la Fig. 4B. Estos
resultados indican que el uso del estrés de longitud de onda LED verde puede
mejorar la acumulación de lípidos por P. tricornutum. Además, D. tertiolecta (Fig.
4C) e I. galbana (Fig. 4D) lograron una mayor acumulación de lípidos de 47.1%
(p / p) y 52.5% (p / p) bajo tensión de longitud de onda LED verde en comparación
con las otras tensiones. Por lo tanto, el estrés de la longitud de onda del LED
verde es más adecuado para la producción de lípidos que los otros esfuerzos en la
segunda fase del proceso de cultivo de dos fases. P. tricornutum alcanzó la mayor
producción de lípidos con un 60,6% (p / p), que fue superior a los valores
publicados del 18% al 28% [27,28].

Fig. 4. Perfiles de curso temporal de (A) cultivo de primera y segunda fase. La

línea vertical en (A) indica el inicio de la segunda fase en cultivos. Acumulaciones
de lípidos de (B) P. tricornutum, (C) D. tertiolecta y (D) I. galbana después de la
fase estacionaria utilizando tres tensiones diferentes. Los datos que se muestran
son la media ± DE, n = 3. Las letras diferentes indican diferencias significativas en
el contenido de lípidos (P <0.05, prueba de Duncan).
Tabla 1
Comparación de la acumulación de lípidos y el contenido de pigmentos de tres
microalgas cosechadas en la segunda fase de 12-15 días bajo tres tensiones.

(Chl a - clorofila a, Chl b - clorofila b, TC - carotenoides totales).

Los números en negrita y asterisco (*) indican el mayor contenido de lípidos de las
microalgas.
Estos datos fueron el valor promedio de tres pruebas independientes.
Tabla 2
Perfil FAME de P. tricornutum, D. tertiolecta e I. galbana en la segunda fase bajo
tres tensiones.

SFA = ácidos grasos saturados (14: 0, 16: 0, 18: 0, 20: 0, 22: 0); UFA = ácidos
grasos insaturados (16: 1, 18: 1, 18: 2, 18: 3, 20: 5, 22: 6).
 -, sin detectar.
Estos datos fueron el valor promedio de tres pruebas independientes.
* Los números indican los mayores contenidos de UFA de microalgas.
Estos resultados indican que los efectos de diferentes longitudes de onda LED en
la biomasa y la producción de lípidos de las tres especies de microalgas. La
utilización de longitudes de onda adecuadas de LED azul (465 nm) y verde (520
nm) es una estrategia eficaz que puede usarse para mejorar el crecimiento de
células microalgales y la acumulación de lípidos, respectivamente. Las reacciones
dependientes de la luz implican la captura de energía luminosa y su posterior
conversión en portadores de energía como NADPH y ATP [29]. El oxígeno,
liberado como subproducto de la fotólisis, proporciona los electrones necesarios
necesarios durante la reacción a la luz. Los electrones se transfieren a dos
grandes complejos de proteínas llamados fotosistemas I (Psi) y PSII. Las
reacciones a la luz ocurren en dos tipos de unidades fotosintéticas. Estos dos
fotosistemas trabajan juntos en la translocación de electrones a través de la
membrana tilacoidea formando una cadena de transporte de electrones (ETC). La
luz roja mejora la capacidad de absorción de luz del fotosistema II, mientras que la
luz azul mejora la del fotosistema I [30]. Por lo tanto, las longitudes de onda LED
azules y rojas son apropiadas para el cultivo de microalgas. Sin embargo, la
longitud de onda del LED verde puede disminuir drásticamente la productividad
fotosintética de las microalgas. Por esta razón, la longitud de onda del LED verde
no fue absorbida sino reflejada. Se obtuvieron resultados similares para
Nannochloropsis sp. [9] También se observó que las especies de microalgas
verdes no crecían bien con LED verdes. Esto significa que la tensión de longitud
de onda LED verde se puede utilizar como un método de acumulación de lípidos
simple y conveniente sin cambiar el medio.
Para comprender la relación entre el contenido de pigmento y la acumulación de
lípidos con tres tensiones diferentes en la segunda fase, los contenidos de lípidos
y pigmentos (Chl a, Chl b y carotenoides) en los días 12-15 de todos los cultivos
se resumen en la Tabla 1. Como se observó Con las tres tensiones, la tensión de
la longitud de onda del LED verde resultó en una mayor acumulación de lípidos
que la ausencia de estrés, estrés por agotamiento de nitrato y estrés por sal. Sin
embargo, los pigmentos fotosintéticos Chl a y Chl b, y el contenido de
carotenoides totales de las tres microalgas disminuyeron a medida que los lípidos
se acumulaban con los tres estreses diferentes. Se obtuvieron resultados similares
para cultivos de Scenedesmus quadricauda [31]. El estrés desencadena muchas
respuestas metabólicas en las microalgas, como la degradación de compuestos
intracelulares como las proteínas, la clorofila y el ADN, y la acumulación de
compuestos ricos en energía como los lípidos y los carbohidratos. Sin embargo, la
relación Chl a / b aumentó en los cultivos bajo las tres tensiones (Tabla 1). El
aumento de la proporción Chl a / b bajo las tres tensiones cumple una función
protectora contra la tensión oxidativa inducida por la producción de lípidos en las
microalgas [32]. Se ha sugerido que las microalgas mantienen un equilibrio entre
los pigmentos para la utilización eficiente del carbono y la energía. Por lo tanto, el
tiempo de cultivo es esencial para obtener el mayor contenido de lípidos de las
microalgas en el proceso de cultivo de dos fases.
3.4. Composición de ácidos grasos
La Tabla 2 presenta la composición de éster metílico de ácido graso (FAME) de P.
tricornutum, D. tertiolecta e I. galbana cultivadas bajo tres tensiones. Las tres
especies de microalgas produjeron FAME en el rango de C14-C22. Las FAME
abundantes en las tres microalgas fueron ácido mirístico (C14: 0), ácido palmítico
(C16: 0), ácido oleico (C18: 1) y ácido araquídico (C20: 0), que comprendieron
72.68% –84.16% (w / w) del contenido total de FAME bajo las tres tensiones. El
ácido palmítico fue la forma predominante que se acumuló en las tres microalgas
de 22.95% –31.67% (p / p) (C16: 0). Se descubrió que el ácido palmítico (C16: 0),
un precursor de la síntesis de ácidos grasos, es un componente principal de tres
lípidos microalgales [25]. Estos resultados están respaldados por datos de
Chlorella sp., En los que el ácido palmítico (C16: 0) comprendía el 25,7% –32,7%
(p / p) del FAME total [33]. El estrés durante el cultivo de las tres microalgas indujo
una cascada de reacciones, lo que condujo a la formación de acetil-CoA, que
indujo una mayor síntesis de ácido palmítico (C16: 0). Como se muestra en la
Tabla 2, el componente de ácido graso insaturado (UFA) aumentó de 48.87% a
54.54% (p / p) para P. tricornutum, 21.12% a 23.57% (p / p) para D. tertiolecta y
12.14% a 13.89% (p / p) para I. galbana. Mientras tanto, el nivel de ácido graso
saturado (SFA) como el ácido palmítico (C16: 0) disminuyó de 26.09% a 22.95%
(p / p) para P. tricornutum, 30.07% a 27.82% (p / p) para D. tertiolecta , y 31.67% a
24.64% (p / p) para I. galbana. Este fenómeno se produjo a través de la reacción
de desaturación y alargamiento en la vía de la lipogénesis [34]. Después de inducir
el estrés de la longitud de onda verde durante la segunda fase, la cantidad de
SFA, como el ácido palmítico, disminuyó. Por el contrario, se observó un aumento
en los ácidos grasos de cadena más larga y los UFA. Eloka-Eboka y col. [35]
también informó un resultado similar; sugirieron una composición satisfactoria de
ácidos grasos para todas las cepas en la producción final de lípidos con un alto
nivel de ácidos grasos insaturados (UFA) de 49.1, 34.94, 35.67 y 51.57% para
Chlorella, Dunaliella, Senedesmus y Synechococcus, respectivamente. Estos
resultados sugieren que el estrés de la longitud de onda del LED verde fue mejor
que otras condiciones de estrés en la promoción de la acumulación de UFA. Por lo
tanto, la longitud de la cadena, el grado de insaturación y la proporción de lípidos
que comprenden triglicéridos son características importantes del aceite de
microalgas para la producción de biodiesel y compuestos bioactivos.
4. Conclusión
El proceso de cultivo de dos fases que combina una fase de producción de
biomasa seguida de una fase de acumulación de lípidos dio como resultado una
mejora en la producción de biomasa en P. tricornutum, D. tertiolecta e I. galbana.
El uso de un LED azul y el contenido óptimo de nitrato en la primera fase estimuló
la producción de biomasa. Tres tensiones aplicadas al final de la fase exponencial
aumentaron la acumulación de lípidos. De estas tres tensiones, la tensión de la
longitud de onda del LED verde fue óptima para la producción de lípidos debido a
una mayor acumulación de lípidos y propiedades favorables de biodiesel. La mejor
especie fue P. tricornutum, con la mayor tasa de crecimiento específico y afinidad
por el nitrato, producción de lípidos del 60,6% (p / p) y un contenido favorable de
UFA del 54,54% (p / p) (C16: 1, C18: 1,2,3 y C20: 5).