Extracción del

ADN
Y S U uso en la genética molecular .

Duban Amador Castilla

Genética molecular
Facultad de ingeniería – Programa de Agronomía
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 INDICE

1. INTRODUCCIÓN.........................................................................................1
2. OBJETIVOS................................................................................................2
2.1 Taxonomía............................................................................................2
2.2. Caracteristicas biológicas................................................................2
2.2.1. Generalidades.....................................................................2
2.2.2. Morfología............................................................................3
2.2.3. Caracteristicas culturales..................................................3
2.2.4. Pruebas bioquímicas.........................................................4
2.3. Sintomas................................................................................................5
2.4. Ciclo infectivo.......................................................................................6
2.5. Especies de importancia para la agricultura de Colombia.....................6
2.5.1. La bacteriosis vascular de la yuca....................................6
2.5.2. Cáncer de los cítricos.............................................................6
2.5.3 Otras de gran importancia...................................................6
3. CONCLUSION...............................................................................................7
4. BIBLIOGRAFÍA.............................................................................................8
 1. INTRODUCCIÓN

Etimológicamente Xanthomonas según (Shi-Qi An et al, 2020) esta descrito como:

Xanthomonas (del griego: xanthos – “amarillo”; monas – “entidad”) es un género de
proteobacterias, muchas de las cuales causan enfermedades de las plantas
causando manchas bacterianas y tizones de hojas y tallos en una gran variedad de
especies de plantas (Shi-Qi An et al, 2020).

Esta bacteria posee diversas especies las cuales son causantes de graves
enfermedades en plantas de utilidad agrícola y comercial. Ejemplo claro es el ataque
a cultivos como el arroz y algodón; también ataca cultivos hortícolas como tomate o
pimiento, cítricos y árboles frutales debido su variedad de especies, además son
responsable también de enfermedades en plantas ornamentales (Cubero et al,
2015). Es un género que se localiza en regiones tropicales y subtropicales debido a
que estas regiones poseen unas temperaturas óptimas para el desarrollo de este en
diversa variedad de plantas; las infecta por medio de aberturas naturales como los
estomas o heridas causadas a las plantas a través de insectos y labores culturales
(Anónimo, 2016).

Es importante mencionar lo vital que son los estudios realizados a este género
mediante la microbiología agrícola, todo con el principal objetivo de mejorar su
manejo y control a la hora de establecer un tratamiento en diversos cultivos que se
ven afectados por este fitopatógeno. El objetivo de este trabajo de revisión
bibliográfica del género Xanthomonas es obtener un conocimiento a fondo de sus
síntomas y demás maneras de detectarlo; y que a través de su taxonomía y ciclo
infectivo logremos interpretar cual es el tiempo o etapa donde se requiera un rápido
control para evitar su progresiva evolución.

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 2. GÉNERO Xantomonas

2.1 Taxonomía

Xanthomonas (del griego: xanthos “amarillo”; monas – “entidad”) es un género que

ha sido objeto de diversos estudios taxonómicos y filogenéticos, en primer lugar, fue
decrito como Bacterium vesicatorium como patogeno del pimiento y el tomate en
1921. (Doidge, 1921). Dowson reclasifico la bacteria como Xanthomonas campestris
y propuso el género Xanthomonas, esta describiéndose como un género monotipico.
El manual de bacteriología sistemática de Bergey’s (Saddler y Bradbury, 2005) ubica
a este agente de la siguiente manera:

Dominio: Bacteria

Filo: Proteobacteria

Clase: Gammaproteobacteria

Orden: Xanthomonadales

Familia: Xanthomonadaceae
Figura 1: colonias amarillas de las
Género: Xanthomonas
Xanthomonas en medios de cultivos.

Las bacterias del género Xanthomonas incluyen más de 100 especies de

fitopatógenos y patovares pertenecientes a la subdivisión de las proteobacterias.
Las especies y patovares de dos Xanthomonas fueron clasificados
taxonómicamente de acuerdo a su capacidad de infectar diferentes tipos de cultivos
vegetales. Como ejemplos pueden citarse: X. campestris pv. Vesicatoria en
Pimentón, X. hortorum pv. Pelargonii en Geranio, X. campestris pv. Phaseoli en
Frijol, entre otras (Swings, 1993)

La clasificación y las relaciones filogenéticas del género son aún objeto de debate
activo. Algunas de las relaciones entre patovares y especies no se han aclarado a
fondo, con viejos patovares convirtiéndose en nuevas especies (Rodriguez, 2005)

2.2 Caracteristicas biológicas

2.2.1. Generalidades

El género Xanthomonas son aerobios obligados y requieren un rango de

temperatura: 4 a 37 ° C, crecimiento óptimo 25-30 ° C. Utiliza polisacáridos de
superficie, proteínas de adhesión y pili de tipo IV para adherirse a la
superficie y puede formar biopelículas para soportar tensiones abióticas (UV,
sequía, etc.). La respuesta a la luz es importante en la patogenicidad de estas
bacterias y regula la unión a la superficie y la producción de biopelículas. Las
bacterias del género Xanthomonas
causan grandes pérdidas en agricultura debido a su hábitat en las plantas. Puede
vivir en el suelo durante un año y extenderse a través del agua de riego (Fernandez
S et al, 2004).

2.2.2. Morfología

Xanthomonas son bacterias Gramnegativas, con forma de bastones, cuyo tamaño

aproximado va de 0.4-1.5 μm de ancho por 1.2-4.0 μm de largo, móviles por medio
de un flagelo polar, células a veces ligeramente curvadas con extremos
redondeados; principalmente se observan solas o en parejas, pero también se
producen cadenas y filamentos; la longitud celular es variable, incluso dentro de la

misma cepa.
Figura 2: Bacterias del género Xanthomonas. A, Microscopía electrónica de un bacilo de
Xanthomonas oryzae (http://sian.inia.gob.ve/). B Microscopía electrónica de un bacilo de
Xhantomonas campestris pv. Vesicatoria (http://sian.inia.gob.ve/). C. Placa de Xanthomonas
campestris pv. Campestris (http://archive.bio.ed.ac.uk).

2.2.3. Caracteristicas Culturales

cuando se cultivan en medios sólidos comunes como el extracto de levadura,
carbonato de calcio (GYCA), Levadura- Peptona-Glucosa-Agar (LPGA) y el agar
nutritivo (AN). La mayoría de las Xanthomonas producen el pigmento
xanthomonadina, el cual se observa en forma de manchas amarillas, insoluble en
agua. Los tonos varían de muy amarillo pálido a amarillo profundo. Los cambios de
intensidad de color se dan durante el envejecimiento. Dicho pigmento amarillo se
encuentra, probablemente, unido a la membrana celular (Dianese J.C Y Schaad
N.W, 1982).
El crecimiento y las características de la bacteria en los Medio Luria Bertoni (LB) van
desde amarillas claras, amarillas y blancas, o y Carbonato de Calcio, dextrosa,
extracto de levadura (YDC) se pueden dar colores crema, anaranjada y blancas y en
cuanto a la intensidad del pigmento, la velocidad de crecimiento y la mucosidad de
la bacteria debido a la composición de cada reactivo.

Figura 3: Morfología de las cepas bacterianas en agar Figura 4: Tinción de Gram bacterias
 2.2.4. Pruebas bioquímicas
En el caso del género Xanthomonas las pruebas básicas para su identificación una
vez realizada la tinción Gram, son:

Tabla 1: pruebas bioquímicas genero Xanthomonas

Prueba Reacción Prueba Reaccion
Prueba de KOH Gram Tincion rojo congo Bastones
negativa cortos
Produccion de + Prueba oxidasa -
H2S
Fermentación + Prueba catalasa +
carbohidrato
anaerobico - Hidrólisis de almidon +
Hidrólisis - Licuefacción +
esculina gelatina
Aereobiosis + urea +
sa
Estas pruebas permiten constatar que son pertenecientes al genero de las Xanthomonas o
alguna de sus especies.

Al aplicar el KOH al 3% produce el vaciado del interior de la célula hacia fuera,

dando como resultado la formación de un hilo, afirmando asi que es una bacteria
bacteria Gram- (forma mucílago) y la prueba de tinción muestra la estructura o forma
de la bacteria al teñir el medio donde se encuentra y no a la célula como tal.

Figura 5: A: Tinción de rojo 4idro, forma y tamaño de la bacteria. B: Prueba del KOH, formación del
hilo característico.

En la producción de H2S Se obtuvo una reacción positiva, ya que la bacteria es

capaz de producir acido sulfhídrico a partir de la cisteína, produciendo una
coloración oscura en el papel de acetato de plomo. El crecimiento anaerobiotico de
esta prueba resulta negativa al no producir ningún cambio en el medio donde es
colocada.
La prueba de aerobiosis muestra crecimiento en la parte superior del liquido lo que
indica la necesidad de oxigeno, por tanto, es una bacteria aerobia. Ya en la prueba
Prueba de la catalasa resulta ser positiva, por lo que genero una reacción con el
peróxido de hidrógeno. La prueba de la oxidasa es negativa, debido a que no se
desarrollo una coloración violeta después de 60 seg.
Hidrólisis del almidón La reacción resulta ser positiva porque esta desdoblo el
almidón a maltosa. Prueba de licuefacción de la gelatina es positiva debido a que se
observo que la gelatina estaba en un estado líquido, lo que significa que hidrolizo la
gelatina. Prueba de la ureasa La prueba resulto positiva ya que esta hidroliza la urea
a amoníaco, arrojando el cambio de color de amarrillo a rojo. La hidrólisis de la
esculina resulto ser negativa, debido no se 4idroliza la esculina y no hay ningún
cambio de color (Anónimo, 2013)
 2.3 Sintomas

Las bacterias que pertenecen al género Xanthomonas causan una variedad de

síntomas, incluyendo la necrosis, gomosis y/o enfermedades vasculares o
parenquimatosas en las hojas, tallos o frutos de muchas plantas .
Tabla 2: síntomas de las Xanthomonas

Generalmente después del periodo de incubación aproximadamente de cinco días,

se empieza a presentar una clorosis pronunciada. A los 17 días el tejido llega a su
máximo de carga bacteriana, y empieza la dispersión del microorganismo a otros
tejidos, observándose síntomas en hojas adyacentes al tejido donde inicialmente
ingreso la fitobacteria; también en tallos y zarcillos, indicando el movimiento del
patógeno a través de los haces vasculares.
Según (Benitez. Carvajal. Castillo y Farfán, 2011) en una investigación hecha a “la
mancha de aceite causada por Xanthomonas axonopodis en gulupa (Passiflora
edulis sims)” De acuerdo con la evaluación de la progresión de síntomas y al
análisis de la progresión de la enfermedad, se alcanzaron porcentajes de severidad
de hasta el 85% luego de 20 (d.p.i.) días pos-inoculacion. A partir de los 30 d.p.i se
presentaron lesiones aceitosas en tallos, estos síntomas se extienden hasta las
hojas sanas de la misma planta; 45 d.p.i. aumenta la presencia de síntomas en
hojas nuevas (Benitez et al, 2011). Lo anterior también ha sido propuesto y
caracterizado por (Goncalves E.R, 2000), quien desarrolló una investigación en esta
enfermedad en zonas productoras de maracuyá en Brasil.

Figura 6: Estados visuales síntomas causados por aislamiento X. axonopodis FAB145 por
inoculaciones con infiltración del envés.

Figura 7: A. mancha bacteriana del geranio Xanthomonas pelargonii, B. Tizón foliar de arroz
Xanthomonas oryzae pv oryza.
 2.4 Ciclo infectivo

2.4 Especies de importancia para la agricultura en colombia

2.5.1. La bacteriosis vascular de la yuca

El agente responsable de la bacteriosis vascular es la bacteria Xanthomonas

axonopodis pv. Manihotis (Xam). Xam es una bacteria gram negativa, provista de un
flagelo. Es responsable de grandes pérdidas en la producción de yuca. Si las
condiciones del medio son favorables para su desarrollo y si no se adoptan prácticas
agronómicas y fitosanitarias adecuadas para su control, las pérdidas pueden llegar
hasta el 100% (Lopez c et al, 2006).

2.5.2. El cáncer de los cítricos

cáncer de los cítricos causado por la bacteria Xanthomonas axonopodis pv. Citri, es
una enfermedad que ataca a todas las variedades de todas las especies del género
Citrus, es una gran limitante para la citricultura mundial y es por ello que es
clasificada como una plaga cuarentenaria en los listados de la Organización
Europea para la protección de las Plantas (EPPO), de la Comunidad Andina de las
Naciones (CAN) y la Organización Norteamericana de Protección a las plantas
(NAPPO). (ICA, 2005)

2.5.3. Otras de gran importancia

Pudrición negra de la col causada por Xanthomonas campestris pv. Rayas

bacterianas de las hojas de arroz causadas por Xanthomonas oryzae pv. Tizón
bacteriano del arroz causado por Xanthomonas oryzae pv. (Shi-Qi An et al, 2020).
 3. CONCLUSIÓN

Luego de hacer una revisión bibliográfica de forma veraz acerca del tema y posterior
a ello realizar un análisis exhaustivo de toda la información obtenida, se puede
concluir que es de vital importancia tener conocimientos acerca de este
fitopatogeno, puesto que, si no es detectado a tiempo, puede llegar a afectar en
gran manera una extensa variedad de cultivos.

Para esto es necesario el estudio comparativo de las especies o taxón de las

enfermedades, es por eso que debe tener en cuenta todas las características y
sintomatologías que este género presenta en las plantas, teniendo como objetivo
principal la optimización del control y manejo, a la hora de implementar tratamientos
para combatirlo.
El género Xanthomonas comprende un grupo de bacterias fitopatogenas Gran
negativas, del cual sus especies son típicamente de forma de vacilo con un solo
flagelo polar, así mismo son aeróbicos obligados, algunos de los síntomas más
comunes son: gomosis, amarilamiento, escalados y estrías pálidas de las hojas,
entre otros.
Conociendo asi que este genero es el causal de grandes enfermedades a nivel
mundial y nacional puesto que tiene la capacidad de propagarse rápidamente y
ocacionar grandes perdidas, es necesario el conocimiento previo relacionados a
este genero y a demás realizar las diferentes pruebas bioquímicas para asi
considerar que es pertenecientes al género y algunas de sus especies.

4. Bibliografía
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pdf: First edition.