04/05/2020

VACUNOLOGIA

MILTON J. CROSBY GANADOS

Profesor Asociado
DEPARTAMENTO DE FARMACIA

MAYO, 2020

CELULAS DEL SISTEMA INMUNE

1
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INMUNIDAD INNATA Y ADAPTATIVA

Respuesta primaria Respuesta secundaria

IL-18 + IL-12+IL-2+FNT-α +INF-γ IL-10 + IL-4+IL-5+ IL-6 + IL-8

IL-13 + IL-23 + TGF-β
IL-1 + FNT-α +INF-γ + PCR
Anticuerpos Fase lag Histamina + serotonina + Prostaglandinas
µg.mL-1/ suero Respuesta al
antígeno A

Respuesta al
antígeno A

Respuesta al
antígeno B

2 4 6 8 10 20 25 30
Antígeno A Antígeno A + B Días

SISTEMA INMUNE

ADQUIRIDA INNATA

Inmunidad – LT Inmunidad – LB Resistencia Sanguínea Barreras físicas

(inmunidad celular) (Inmunidad humoral)

Cascada de Complemento Fagocitos

LT
totales producidos Exposición al 1 .Neutrofilos 1 .Piel
Antígeno 2. Macrofagos 2. Mucosas
Ruta alternativa
3. Basofilos 3. Saliva
Linfoblasto 4. Eosinofilos 4. pH acido
LT LT LT 5. NK 5. Secreciones
Supresores Ayudadores Citotóxicos

Plasmocitos Clones de LB Muerte de organismos

peligrosos
Retardan proceso de
Muerte de células Anticuerpos Memoria de LB infección
infectadas por virus Muerte directa de
o dañados por bacterias
cualquier factor Cascada del
complemento

Ruta clásica 4

2
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Macrofagos Células
dendríticas
Mastocitos

Monocitos Linfocito B

Neutrofilos Linfocito T

Inmunidad Innata Acción del sistema Inmunidad Adaptativa

Opsonización Eliminación de ↑ Respuesta de anticuerpos

complejos inmunes y
Lisis de Patógenos células apoptoticas ↑ Promoción de respuesta
por LT
Quimio taxis
↑ Eliminación de LB auto
Inflamación reactivos

Activación celular ↑ Memoria inmunológica

5

RESPUESTA INMUNE
Antígeno
CPA

IL-1

LTh1 LTh0 LTh2 Respuesta humoral

Respuesta celular

IL-3

IL-10 IL-4
IL-2 IFN-γ IL-6
IL-5

IL-12 IL-8

NK Eosinófilo
Macrófago Polimorfonuclear LB
IL-6
IL-12 TNF-α
ROI IgM IgA
IgG IgE
RNI
NK Activada LTc Activado
Eosinófilo Activado 6

3
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ANTIGENOS:
INDUCCION DE RESPUESTA CELULAR
Fagocito

Bacteria / Presentación de antígenos

Antígeno Formación del CMH tipo II
fagolisosoma

Linfocito Th
Célula
Presentadora
de antígeno
LTh
activo Linfocito T
de memoria
Secreción de ILs
Lisis celular
Linfocito T
citotóxico

Identificación de células 7
infectadas

ANTIGENOS:
INDUCCION DE RESPUETA ANTICUERPOS
Antígeno Señal co-
estimuladora
IL-12
Activación LTh

Célula Linfocito Th
Linfocito Th
Presentadora Efector
de antígeno

IL-4-IL-5

Antígeno

Linfocito B
IL-10

Anticuerpos

Linfocito B de LB Plasmático Neutralización del

Memoria (Plasmocito) agente infeccioso

4
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SINTESIS DE ANTICUERPOS
CELULAS PLASMATICAS

PROLIFERACION DE LB
(CENTROCITOS)
IgG2a
IgG3
INF-γ

IgA
TGF-β IgG2b

IL-2
IL-4
IL-5 IgE
IL-4 IgG1
LINFOCITOS B ACTIVADOS
(CENTROBLASTOS)

IL-2
IL-4
IL-5 IgM
CITOKINAS PROLIFERATIVAS CITOKINAS DE
IL-2, IL-4, IL-5 DIFERENCIACION
IL-2, IL-4, IL-5, INF-γ, TGF-β
9

FASES DE LA RESPUESTA INMUNE

Inmediata Temprana Tardía

0-4 horas 4- 96 horas > 96 horas

Tipo Innata Innata inducible Especifica

Moléculas Complemento Complemento, IL-12, IL-12, IL-4, IL-2,

importantes Histamina IL-1, TNF-α, INF-α/β, TNF-α, INF-γ,
Serotonina PCR IgM, IgG
Complemento

Células Macrófagos Macrófagos Macrófagos

importantes Mastocitos Neutrófilos LT
Neutrófilos Células NK LB

10

5
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EFECTOS FISIOLOGICOS DE
IL-1, IL-6 Y TNF-α
Efecto IL-1 TNF-α IL-6

Pirogenico + + +
Síntesis de proteína de fase aguda + + +
↑ Permeabilidad vascular + + +
↑ Moléculas de adhesión celular + + −
↑ Proliferación de fibbroblastos + + −
Producción de plaquetas + − −
Inducción de citokinas (IL-8) + + −
Producción de IL-6 + + −
Activación de LT + + +
Activación de LB + + +
↑ Síntesis de gammaglobulinas − − +
11

VARIACION DE LA CINETICA DE
RESPUESTA INMUNE CONTRA
DIVERSOS ANTIGENOS

12

6
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CINETICA DE LA RESPUESTA INMUNE

Incremento en Concentración de Anticuerpos

Respuesta Secundaria
104
Anticuerpos contra IgG ↑ Producción de anticuerpos
Antígeno A
103

102 Respuesta inmediata

Respuesta de larga duración
Respuesta Primaria
101 IgG
IgM

100
0 7 14 21 28 35 42 49 56 Días

Reto inicial
Reto secundario
con antígeno A
con antígeno A

13

RESPUESTA INMUNE INNATA

Y ADAPTATIVA EN INFECCCION VIRAL
INMUNIDAD INNATA INMUNIDAD ADAPTATIVA

INF-α + INF-β LTc Virus Especifico

NK
Intensidad de la Respuesta Inmune

Anticuerpo

Titulo Virus

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Días

14

7
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RESPUESTA DE ANTICUERPOS vs
TRASMISON
IgG
Concentración de Anticuerpos

PERIODO DE ENFERMEDAD
en Suero

IgG
IgM IgM

10 días 20 días 10 días 20 días

Exposición Primaria Respuesta Inmune Exposición Secundaria Respuesta Inmune

al Virus Primaria al Virus Secundaria

Riesgo de Trasmisión NO ALTO MODERADO BAJO

15

ESTADIOS DE INFECION POR

VIRUS DEL SARAMPION

Rash
Viremía
Anticuerpos
Concentración Relativa

RNA viral

IL-17 + LT

RNA viral en
Nodo Linfático

5 10 2 4 6 8 10 12 14
Días Semanas

16

8
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RESPUESTA INMUNE:
INFECCION POR VIRUS DE INFLUENZA
Infección Tracto Respiratorio Superior
Infección Tracto Respiratorio Inferior
Fiebre
Infección Tracto Respiratorio Superior

Virus
Anticuerpos Séricos
Titulo

Anticuerpos en Mucosa
LT CD8+

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Tiempo (días)

Reinfección
Infección Primaria

17

RESPUESTA INMUNE CONTRA

VIRUS DE LA REBEOLA
Virus presente Sangre
Garganta
Titulo de Anticuerpos →

IgG

Rash

IgM

Días -14 -7 0 7 14 1 2 1 2 3

18

9
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RESPUESTA INMUNE A VACUNA

CONTRA EL POLIO
Vacuna Salk PDV Vacuna Sabin PLV
Reciproco del titulo de anticuerpos virales

512
IgG serica IgG serica

128

32
IgM serica IgM serica
IgA Nasal
IgA serica
8 IgA serica

2
IgA Duodenal
IgA nasal y duodenal
1
48 96 48 96
Vacunación Vacunación
Días
19

MARCADORES PLASMATICOS PARA

INFECCION POR VIRUS DE LA HEPATITIS
ESTADO DE CONVALECENCIA
Intervalo
Preliminar Infección Oculta por HBV
Detección de HBsAg DNA-HBV

32.5 días Anti-HBc Total

Intervalo sAg-HB
Preliminar DNA Anti-HBs
Amplificación
15 días

Eclipse Meses Años

ESTADO DE INFECCION CRONICA

Intervalo
Preliminar
Detección de HBsAg Infección Oculta por HBV

DNA-HBV
32.5 días Anti-HBc Total

Intervalo
Preliminar DNA
Amplificación HBsAg
15 días

20
Eclipse Meses Años

10
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INFECCIÓN AGUDA VS PERSITENTE

Infección aguda
Patógeno elminado (p.e. influenza)

Infección persistente
Intensidad del efecto

Patógeno presente pero infección no aparente

(p.e. EBV)

Infección persistente con reactivación

Latente (p.e.HSV)

Persistente (infección lenta)

Latente (p.e.HIV)

Tiempo
21

COMPONENTES DE VACUNAS

Principales componentes

• Antígeno contra el cual se desea inducir respuesta inmune adaptativa.

• Agentes inmuno-moduladores, para estimular sistema inmune innato.
• Sistema de entrega para asegurar que el antígeno sea entregado de forma correcta.

Antígenos

• Organismos inactivados o atenuados, mezcla de varias cepas o fracciones subcelulares.

• Proteínas aisladas y purificadas, glicoproteínas y polisacaridos
• Proteínas recombinantes y glicoproteínas

22

11
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TERMINOLOGIA BASICA
Vacuna: Preparación de microorganismos inactivados, atenuados, o fracciones subcelulares, que al ser
inoculada en un animal no desarrolla infección pero induce estimulación del sistema inmune.

Antígeno: Cualquier molécula que al ser inoculada a un animal induce proliferación de células del
sistema inmune y formación de anticuerpos.

Anticuerpo: Glicoproteína especifica producida por linfocitos B ante la estimulación del sistema inmune
inducida por una infección o un vacuna.

Adyuvante: Sustancia inmunoestinulante que ejerce efecto sinérgico sobre un antígeno para estimular
eficientemente al sistema inmune.

Endotoxina: Componente estructural de un microorganismo que tiene la habilidad de inducir un efecto

inmunotoxico induciendo colapso fisiológico en un animal.

Interferón: Polipéptido producido por células en respuesta a la infección viral y que actúa previniendo la
replicación viral y estimulando la respuesta inmune.

Inmunidad activa: Inducción de proliferación y diferenciación celular inducida por un antígeno o vacuna
y que induce respuesta protectora frente a la infección.

Inmunidad pasiva: Conferida por la transferencia de anticuerpos que confiere protección temporal
frente a una infección o un antígeno
23

FACTORES QUE AFECTAN

LA INMUNOGENICIDAD
INTRINSECOS - PROPIOS DEL ANTÍGENO

Tamaño molecular

Distancia filogenética

Inmunogenicidad
Composición

Complejidad estructural

Susceptibilidad a ser procesado y presentado por
una molécula de MHC.

24

12
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FACTORES QUE AFECTAN

LA INMUNOGENICIDAD

COMPOSICIÓN

Las proteínas son los inmunógenos más potentes

seguido por los polisacaridos

En contraste los lípidos y ácidos nucleicos de una

agente infeccioso casi nunca sirve como inmunógeno a
menos de que forme complejos con proteínas o
polisacáridos.

25

FACTORES QUE AFECTAN

LA INMUNOGENICIDAD
Tamaño molecular

Las sustancias con menos de 10Kd son malos inmunógenos.

Inmunogenos mas activos poseen una peso molecular mayor de 10 Kd.

Distancia filogenetica

Cuanto mayor es la distancia filogenética entre dos especies, mas grande

es la disparidad estructural y por tanto la inmunogenicidad.

26

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FACTORES QUE AFECTAN

LA INMUNOGENICIDAD
La complejidad estructural contribuye a la inmunogenicidad.

La organización de la proteínas: primario,

secundario, terciario y cuaternario participan
en la complejidad de la estructura y por tanto
en la inmunogenicidad.

Los copolímeros compuestos de diferentes

a.a. o azucares suelen ser más inmunogé-
nicos que los homopolímeros.

27

FACTORES QUE AFECTAN

LA INMUNOGENICIDAD
La intensidad de la reacción esta afectada por:
Dosis y vía de administración
Dosis baja o muy alta pueden inducir una tolerancia.
Suministro. Una sola dosis no activa una respuesta potente. Repetidas dosis
durante un periodo de semanas, aumenta la proliferación clonal de linfocitos B y T.
Vía de administración: intravenosa
intradérmica
Subcutánea
Intramuscular
Intraperitoneal

28

14
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EPITOPE

Epítopes o determinantes antigénicos:

Los linfocitos pueden interactuar en varios niveles de la

estructura del antígeno.

Un epitope puede incluir elementos de estructura

primaria, secundaria, terciaria e incluso cuaternaria de
la proteína.

Antígeno Anticuerpo
29

PRODUCCION DE VACUNAS:
SELECCIÓN DE ANTIGENOS

30

15
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POSTULADOS DE KOCH

 El organismo debe aislarse de cada paciente con la enfermedad.

 El organismo debe aislarse libre de todos los demás organismos y crecer

en cultivo puro in vitro y ser caracterizado.

 El organismo puro al ser inoculado en un animal sano y susceptible debe

causar la enfermedad .

 El organismo causante de la enfermedad debe recuperarse del animal

inoculado.

31

VIGILANCIA DE VACUNAS PARA

ENFERMEDADES PREVENIBLES

 Administración de la vacuna
 Efectividad de la vacuna
 Inmuno-vigilancia – serología
 Eventos adversos
 Conocimiento y aproximación
 Alcance de la vacunación
 Incidencia de la enfermedad

32

16
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OBJETO DEL PROGRAMA DE

INMUNOVIGILANCIA
 Pre – implementación

- Estimación de brote epidémico

- Diseñar la estrategia de vacunación

 Post – implementación

- Monitoreo del impacto y la efectividad

 Limite de control del brote epidémico

- Identificación de focos de diseminación

- Certificación del proceso de vacunación

33

INCIDENCIA DE LA ENFERMEDAD

 Origen confiable de los datos

- Notificación obligatoria
- Reporte de laboratorios
- Registro de morbi – mortalidad

 Otro origen de información

- Episodios hospitalarios
- Reporte de grupo centinela
- Vigilancia pediátrica

 Casos sospechosos
 Casos probables
 Casos confirmados

34

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DESARROLLO DE VACUNAS

 Reconocer la enfermedad como unidad distinguible.

 Identificación del agente etiológico.
 Aislamiento y crecimiento del agente etiológico.
 Establecimiento de un modelo animal para la enfermedad.
 Identificación de un marcador inmunológico para la enfermedad – Anticuerpos.
 Inactivar o atenuar al agente etiológico / selección de un antígeno.
 Preparación de un candidato a vacuna siguiendo GMP.
 Evaluar el candidato a vacuna en la capacidad para proteger animales.
 Preparación de protocolos para estudio en humanos.
 Presentar aplicación para investigación de nuevas drogas.
 Estudio de fase I – Ensayo en humanos; Seguridad, inmunogenicidad y dosis.
 Estudio de fase II – Ensayo de seguridad e inmunogenicidad.
 Estudio de fase III – Ensayos de eficacia.

35

DESARROLLO DE VACUNAS

 Presentación de la solicitud de aprobación de la licencia del producto.

 Revisión documentación por el comité y elaboración de recomendaciones.

 Vigilancia de comercialización post-aprobación para seguridad y eficacia (Fase IV).

36

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EFICACIA, EFECTIVIDAD, IMPACTO E

INMUNIDAD DE REBAÑO

 Eficacia – es la protección directa de un individuo vacunado en concordancia con

los estudios clínicos de fase III.

 Efectividad – es un estimativo de la protección directa en un estudio de campo

post-licenciamiento. (Fase IV).

 Inmunidad de rebaño – es un efecto indirecto de la vacunación relacionado con

la reducción de la diseminación.

 Impacto – es la medida del efecto del programa de vacunación en la población.

Dependiente de la cobertura, inmunidad de rebaño y efectividad.

37

ESTANDARES DE INMUNIZACION

 Manejo de la vacuna.
 Consentimiento informado.
 Administración de la vacuna.
 Documentación.
 Protocolo para manejo de la anafilaxis.
 Reporte de reacciones adversas.

38

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PRODUCCION DE VACUNAS:
REQUERIMIENTOS ESTANDAR
 Célula de referencia y requerimientos de producción
- Cepa de patógeno
- Sustrato de producción

 Requerimientos generales
- Test para antígeno vacunal no purificado.
- Contenido en la mezcla.
- Homogeneidad.
- Cepa vacunal / serotipo.
- Marcas e instrucción del inserto.
- Lote de la cepa de producción
- Establecimiento de `producción
- Test de potencia
- Dosis minima protectora.

39

PRODUCCION DE VACUNAS:
REQUERIMIENTOS ESTANDAR

 Requerimiento de control de calidad

- Test de esterilidad
- Test de identificación
- Test de seguridad
- Test de Potencia

40

20
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VACUNAS:
SEGURIDAD Y EFICACIA
 Inocuidad – definición de las propiedades biológicas de la vacuna (composición y método
de preparación). Modelos animales y humanos, vacuna utilizada debe ser obtenida de
diferentes lotes y el producto terminado debe poseer propiedades idénticas.

 Ensayos de laboratorio – vacuna debe ser utilizada bajo condiciones de uso y

condiciones anormales, para determinar efectos no observables inicialmente.

 Evaluación de la inocuidad – observación de animales para detección de signos y

reacciones locales. Observación microscópica y microscópica de biopsias.

 Estudio de efectos sobre la función reproductora – observación del efecto

teratogénico, abortivo y sobre el recién nacido.

 Difusibilidad de la cepa vacunal – diseminación de individuos vacunados a no

vacunados.

 Diseminación dentro del animal vacunado.

 Reversión de la atenuación.

 Eficacia. Test de reto post-vacunación

41

EXPERTICIA DEL COMITÉ PARA

REGISTRO DE BIOLOGICOS

 Practica clínica
 Microbiología e inmunología
 Parasitología
 Farmacología
 Nutrición
 Fisiología reproductiva y endocrinología
 Manufactura de medicamentos farmacéuticos y biológicos.

42

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 04/05/2020

VACUNAS:
CLASIFICACION Y COMPOSICION

43

VACUNAS VIRALES
Enfermedad Tipo de virus Tipo de antígeno Eficacia

Viruela Virus de la variola Virus de la vaccinia 100

Polio Picornavirus Oral: Vivo atenuado >95
Parenteral: Inactivado >95
Hepatitis A Picornavirus Virus inactivado >90
Hepatitis B Hepadnavirus Proteína recombinante >80
Influenza Ortomixovirus Virus inactivado 50-70
Sarampión Paramixovirus Virus vivo atenuado >95
Parera Paramixovirus Virus vivo atenuado >90
Rubéola Togavirus Virus vivo atenuado >95
Varicela zoster Varicela zoster Virus vivo atenuado >80
Rabia Lissavirus Virus inactivado 100
Fiebre Amarilla Flavivirus Virus vivo atenuado >90
Encefalitis japonesa Flavivirus Virus inactivado >90

44

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VACUNAS BACTERIANAS
Enfermedad Organismo Tipo de antígeno Eficacia

Difteria C. Diphtheriae Exotoxina inactivada >95

Tetanos C. Tetani Exotoxina inactivada >95
Meningitis N. Meningitidis Conjugado proteína
>90
polisacárido/polisacárido

Pneumonia S. Penumoniae Conjugado proteína 60

polisacárido/polisacárido
Tosferina B. Pertussis
Toxina inactivada, 80-90
fimbria, componente
acelular
Anthrax B. Anthraxis Bacteria inactivada ND
Plaga Y. Pestis Bacteria inactivada ND
Tuberculosis M. tuberculosis M. Bovis ND
Cholera V. Cholerae Bacteria inactivada 50
Meninigitis/otitis H. influenzae Conjugado proteína 90
polisacárido

45

COMPONENTES DE VACUNAS
Inmunopotenciadores

Productos celulares
• Toxinas y lípidos
• Ácidos nucleicos
• Peptidoglicanos
• Carbohidratos y péptidos
• Citokinas y hormonas
• Moléculas pequeñas

Sistemas de entrega

• Sales minerales
• Agentes con actividad superficial
• Micro-partículas sintéticas
• Emulsiones O/W
• Liposomas

46

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VACUNAS BASADAS EN
ANTÍGENO PURIFICADO
CARACTERISTICAS
o Vacunas preparadas a partir de moléculas purificadas de un patógeno y
llamadas fracciones subcelulares.

oMoléculas identificadas que inducen protección en animal. (p.e exotoxinas,

polisacaridos, glicoproteínas).

o Composición química fácilmente de caracterizar.

o No riesgo de multiplicación del patógeno.

o Purificación de la molécula incrementa el costo

o Por lo general requieren de adyuvantes para inducir respuesta inmune.

o Para exotoxinas el proceso de inactivación induce perdida de epítopes

47

VACUNAS BASADAS EN
ANTÍGENO PURIFICADO
Vacunas que contienen antígenos purificado

o Vacuna contra meningitis bacteriana (2 serotipos)

o Vacuna contra Streptococcus neumonía (23 serotipos diferentes)

o Vacuna Hib, polisacarido conjugado a toxina diftérica o titánica

o Vacuna contra tosferina

o Vacunas con toxoide temático, botulínico y diftérico

48

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SUB UNIDADES ANTIGENICAS

VACUNALES RECOMBINANTES

Vacuna recombinante Características sobresalientes

Inmunogeno recombinante o Composición definida, seguros, inducen inmunidad humoral,

Vector viral vivo
Vector bacteriano vivo
Ácidos nucleicos – DNA
Ácidos nucleicos RNA
requieren adyuvantes, costo relacionado con sistema de
producción.
o Inducen respuesta inmune humoral y celular,, pueden ser
utilizadas para inmunogenos grandes o múltiples inmunogenos,
pueden revertir virulencia.
o Patógenos atenuados o bacterias comensales grado alimento,
vacunas orales, respuesta inmune humoral y celular, expresión en
superficie de determinantes antigénicos.
o Producción costo eficiente, estimula respuesta celular y humoral,
riesgo de integración en genoma humano, entrega por vector
bacteriano, expresión en sistema in-vivo.
o Inestable, riesgo de integración bajo, sistema de amplificación in-
vivo.

49

VACUNAS RECOMBINANTES
CARACTERISTICAS

1. Proteínas inmunogenicas obtenidas por técnicas de DNAr y

expresadas por bacterias, levaduras, virus o células animales.

2. El antígeno puede ser obtenido en grandes cantidades.

3. Método útil para obtener antígenos inactivados por mutación de

toxinas, o mejorar la inmunogenicidad de antígenos.

4. La inmunidad conferida es de tipo humoral. El antígeno es

presentado principalmente vía receptores MHC-II

50

25
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VACUNAS CON ANTIGENOS

SINTETICOS

Características

Pépticos sintéticos, polinucleotidos, pueden ser sintetizados

automáticamente en fase sólida.

El antígeno escogido debe ser seleccionado con base en la estructura

del epítope que estimula al LB y la longitud de la secuencia presentada
por el MHC.

Antígenos químicamente definidos, fáciles de purificar y almacenar.

Los pépticos sintéticos son pobres o débiles inmunogenos, deben ser

inoculados con la ayuda e adyuvantes, o polimerizados

51

VACUNAS:
INACTIVADAS Y TOXOIDES

Ventajas
• Disponibles para un amplio numero de
enfermedades.
• NO procede reversión a la forma virulencia.
• NO existe riesgo de diseminación del agente
vacunal.
• Bajo riesgo de inducción de toxicidad reproductiva.
• Mayor estabilidad frente al almacenamiento.
• Excelentes para inducción de formación de
anticuerpos.
Desventajas
• Inducción de reacción adversa frecuentes y
lesiones.
• Debe existir un tiempo adecuado entre la
primera y segunda inmunización.
• Lento desarrollo de inmunidad.
• No estimulan inmunidad muy fuerte y a largo
plazo.
• Puede no producir anticuerpos contra todos
los antígenos microbianos.
• Requieren uso de adyuvantes.

52

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VACUNAS VIVAS ATENUADAS

Ventajas Desventajas
• Usualmente una dosis induce buena protección. • Alto potencial de inducción de infección .
• Protección mas rápida que con antígenos inactivados. • Desarrollo de infección paciente inmuno-
• Inducen amplio rango de protección. comprometido.
• Bajo riesgo de inducción de reacción adversa. • Potencial para desarrollo de inmunidad
• Menor costo. exacerbada.
• Excelente desarrollo de inmunidad a largo plazo. • Pueden inducir toxicidad reproductiva.
• Manipuladas con normas de control.
• Menor estabilidad.

53

TIPOS DE ADYUVANTE Y SISTEMAS

DE ENTREGA
Sales minerales Sales de calcio y aluminio Autorizadas para uso humano,
antígenos virales y bacterianos
adsorbidos a sobre sales de
Aluminio y calcio

Emulsiones y formulaciones MF59, Montanide, ISA-5, Emulsiones con detergente

con propiedad tensioactiva ISA-720 y QS21 microflidizadas y tensioactivos
de origen natural

Sistema de entrega Microparticulas, ISCOM, Antígeno y adyuvantes pueden

particulados liposoma, virosoma, VLP estas atrapados dentro o sobre
la superficie

Derivados microbianos Monofosforil Lípido A, Productos bacterianos son potentes

CpG oligonucleotidos, estimuladores de inmunidad innata.
Lipoprotínas y entero Señalización a través de TLR.
toxinas de E. coli

54

27
 04/05/2020

POLIO VIRUS

• Picorna virus
• Virus tipo RNA
• Tres serotipos con composición antigénica sin reactividad cruzada:
Tipo I – “León” causante común de epidemias.
Tipo II – “Berlinhide” prevalente en áreas endémicas
Tipo III – “Lansing” causa epidemias ocasionalmente
• Relativamente resistente al medio ambiente.
• Sensible al calor y a los liberadores de cloro.
• Hombre es único reservorio. En áreas endémicas el portador crónico
es el agente transmisor.

55

POLIO VIRUS:
FOCO DE INFECCION
• Intestinal y Faringe
• Formas de transmisión:
- Infección oral – oral
- Infección fecal – oral
* Infección mano a boca
• Alto riesgo al contacto directo con pacientes infectados entre 7- 10 días.
• Infección de laringe aproximadamente de una semana.
• Infección intestinal de 6 – 8 semanas.
• Periodo de incubación de 7 -1 4 días.
• Inmunidad maternal disminuye a partir del sexto mes; inmunidad post
infección duradera pero no protege contra otros tipos de virus.

56

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POLIO VIRUS: PREVENCION

• Inmunización activa:

- Vacuna Salk – vacuna trivalente inactivada, vía intramuscular.

- Contiene las tres cepas
- Crecida en células Vero (células de mono)
- Inactivada con formaldehído
- 2-fenoxietanol, neomicina, streptomicina y polimixina B

- Induce fuerte inmunidad contra el virus del polio

- > 90% después de dos dosis y > 99% después de tres dosis
- Duración de la inmunidad no determinada

57

POLIO VIRUS: PREVENCION

• Inmunización activa:

- Vacuna Sabin – vacuna trivalente atenuada, vía oral.

- Contiene las tres cepas
- Crecida en células Vero (células de mono)
- Neomicina, streptomicina.
- Excretada en materia fecal por 6 semanas

- Altamente efectiva en inducción de inmunidad

- Alrededor del 50% después de la primera dosis
- > 99% después de tres dosis
- Duración de inmunidad de por vida

58

29
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COMPARACION ENTRE VACUNAS

PARA POLIO: SAVIN vs. SALK
IPV (Salk) OPV (Savin)

-Subcutánea o intramuscular. - Vía Oral.

-Induce anticuerpos circulantes pero no - Induce rápida sistémica e intestinal.

locales.
- Previene parálisis y reinfección.
-Previene parálisis pero no reinfección.
- Puede ser efectiva en control de
- NO útil en control de epidemias. epidemias.

- Mayor costo y difícil de producir. - Fácil de manufacturar y económica.

- NO requiere condiciones estrictas de - Requiere condicione estrictas e

almacenamiento y transporte. transporte y almacenamiento

59

INMUNOGENICIDAD Y EFICACIA DE
VACUNAS CONJUGADAS

Proteína
Organismo transportado Inmunogenicida Eficacia
ra d
Haemophilus Toxoide Diftérico Altamente inmunogenico 95-100% efectiva en
influenzae tipo b y tetánico en niños e eliminación de infección por
modificados inmunocomprometidos Hib

Streptoccocus Similar a Hib Altamente inmunogenico 94-97% protectora contra

pneumoniae en niños e infección invasiva; 57%
inmunocomprometidos efectiva contra otitis media;
poca protección contra
serotipo 19F
Neisseria meningitidis Toxoide tetánico Altamente inmunogenico 92% protectora en neonatos
y Diftérico desde la infancia y 97% en adolecentes.
modificados

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ANNALS OF ALLERGY, ASTHMA & IMMUNOLOGY VOLUME 103, OCTOBER, 2009

NIVEL DE ANTICUERPOS ASOCAIDO CON

PROTECCION PARA ENFERMEDADES PREVENIBLES

Vacuna Nivel protector de IgG mínimo

Difteria 0.1 IU/mL

Haemophilus influenzae tipo b 0.15 µg/mL
Hepatitis A 10 mIU/mL
Hepatitis B 10 mIU/mL
Sarampión Rubéola 120 mIU/mL (reducción en formación de placa)
Polio (inactivada) 1:8 titulo de anticuerpos neutralizantes
Rabia 0.5 IU/mL (neutralización de antígeno)
Rubéola 10 IU/mL
Tétanos 0.1 IU/mL
Fiebre amarilla 0.7 IU/mL

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VACUNAS:FORMULACION

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ANNALS OF ALLERGY, ASTHMA & IMMUNOLOGY VOLUME 103, OCTOBER, 2009

CONTENIDO DE GELATINA EN VACUNAS

Vacuna Concentración

DTaP (Sanofi Pasteur, Swiftwater) 28 µg / 0.5 mL

Influenza (Fluzone; Sanofi Pasteur) 250 µg / 0.5 mL
Influenzae (FluMist; Medimmune Vaccines) 2.000 µg / 0.2 mL
Encefalitis japonesa (JE-VAX; Sanofi Pasteur) 500 µg / 1.0 mL
Sarampión, Rubéola, Paperas (ATTENUVAX, MERIVAXII Meck) 14.500 µg / 0.5 mL
Sarampión, Rubéola, Paperas, Varicela (ProQuad; Merck) 11.000 µg / 0.5 mL
Rabia (RabVert; Novartis) 12.000 µg / 1.0 mL
Varicela (VARIVAX; Oka/Merck) 12.500 µg / 0.5 mL
Fiebre Amarilla (YF-VAX; Sanofi Pasteur) 7.500 µg / 0.5 mL
Zoster (ZOSTAVAX; Oka/Merck) 15.580 µg / 0.65 mL

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ANNALS OF ALLERGY, ASTHMA & IMMUNOLOGY VOLUME 103, OCTOBER, 2009

VACUNA EXIPIENTES

Anthrax (BioThrax) Hidróxido de Aluminio, aminoácidos, Cloruro de benzetonio, formaldehído, sales inorgánicas,
azucares y vitaminas.
BCG (Tice) Asparagina, acido cítrico, lactosa, glicerina, citrato ferrico amonico, sulfato de magnesio,
fosfato de potasio.
DTaP (Daptacel) Fosfato de Aluminio, Sulfato de Amonio, Casminoacidos, Dimetil-βciclodextrina,
formadehido,glutaraldehido, 2-fenoxietanol.
DTaP (Infanrix) Fosfato de Aluminio y Potasio, Extracto bovino, Formaldehído, glutaraldehido, 2-fenoxietanol,
polisorbato 80.

DTaP (Tripedia) Fosfato de Aluminio y Potasio, sulfato de amonio, extracto bovino, Formaldehído, gelatina,
polisorbato 80, fosfato de sodio, timerosal.

DTaP/Hib (TriHIBit) Fosfatos de Aluminio y Potasio, sulfato de amonio, extracto bovino, Formaldehído, gelatina,
polisorbato 80, sacarosa, timerosal.

DTaP-IPV (Kinrix) Hidróxido de Aluminio, extracto bovino, Formaldehído, lactoalbumina hidrolizada, tejido de riñón
de chimpancé, sulfato de neomicina, polisorbato 80.

DTaP-HepB-IPV Hidróxido de Aluminio, fosfato de Aluminio, proteína bovina, lactoalbumina hidrolizada,

(Pediarix) formaldehído, formalina o gluraldehido tejido de riñón de chimpancé, 2-fenoxietanol, polimixina
B, polisorbato 80, extracto de levadura.
DTaP-IPV/Hib Fosfato de Aluminio, albúmina serica bovina, formaldehído, formalina o gluraldehido, proteína y
(Pentacel) DNA de MRC-5, neomicina, sulfato de polimixina B, polisorbato 80, 2-fenoxietanol.

DT (Sanofi) Fosfato de Aluminio y potasio, extracto bovino, formaldehído, formalina, timerosal.

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ANNALS OF ALLERGY, ASTHMA & IMMUNOLOGY VOLUME 103, OCTOBER, 2009

VACUNA EXIPIENTES

DT (Massachusetts) Hidróxido de Aluminio, formaldehído o formalina

Hib (ACTHib) Sulfato de Amonio, formaldehído o formalina, sacarosa

Hib (PedvaxHib) Hidroxifosfato sulfato de Aluminio

Hib/HepB (Comvax) Aminoácidos, hidroxifosfato sulfato de aluminio, dextrosa, formaldehído o formalina, sales
minerales, borato de sodio, peptona de soya, proteína de levadura

65

VACUNAS APROVADAS POR FDA

Vacuna Indicación Reacción adversa

Toxoide Diftérico y Inmunización primaria en Dolor, enrojecimiento,

Tetánico UPS niños de 6 semanas a 7 malestar, fiebre
adsorbidos. Uso años artralgia
pediátrico (DT)
Toxoide Diftérico Inmunización primaria en Dolor, enrojecimiento,
Tetánico y Pertussis niños de 6 semanas a 7 malestar, fiebre,
acelular adsorbidos. años disminución de la
(DTaP); Daptacel, actividad, estrés
Infanrix, Tripedia

Toxoide Diftérico Tetánico Inmumizacion primaria Dolor, enrojecimiento,

y Pertussis acelular contra DTP, HBV y malestar, fiebre,
adsorbidos, Hepatitis B pilomelitis en niños de 6 disminución de la
recombinante y Poliovirus. semanas a 7 años actividad, estrés
(DTaP / IPV HBV)
Pediarix.

Toxoide Diftérico Tetánico Inmunización activa en Dolor, enrojecimiento,

y Pertussis acelular
adsorbidos, vacuna
conjugada Haemophilus
influenzae b (DTaP/Hib),
TriHIBit
niños de 15 a 18 meses, malestar, inflamación,
inmunizados con DPT y dolor de cabeza, fatiga
Hib ≤ 3 dosis.
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VACUNAS APROVADAS POR FDA

Vacuna Indicación Reacción adversa

Vacuna contra Inmunización activa en Dolor, enrojecimiento,

hepatitis A inactivada niños mayores de 12 malestar, fiebre, dolor
(HepA);Havrix, Vaqta meses de cabeza y fatiga

Vacuna contra Inmunización contra Dolor, enrojecimiento,

hepatitis B infección causada por malestar, fiebre, fatiga
recombinante (HepB); todos los subtipos de y dolor de cabeza
Engerix-B; HBV
Recombivaz HB

Vacuna Haemophilis B Vacunación contra Dolor, enrojecimiento,

conjugada (conjugada a infección invasiva malestar, fiebre,
antígeno de causada por Hiby todos irritabilidad y estrés
meningococco) y hepatitis los subtipos de HBV en
B (HepB/Hib); Comvax pacientes de 6 semana a
15 meses

Vacuna Haemophilis B ActHIB, inmunización Dolor, enrojecimiento,

conjugada (Hib); ActHIB activa en pacientes de 1- malestar, inflamación,
(conjugada a toxoide 18 meses y prevención irritabilidad y letargia
tetatico) HibTITER de infección invasiva por
(Conjugada a toxoide Hib. HibTITER,
Difterico) inmunización en
pacientes de 2-71 meses 67

VACUNAS:PRODUCCION

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VACUNAS:
HISTORIA DEL ESARROLLO

• Tifoidea (1896) – Wright (Inglaterra) y otros; ensayo en India

• Cholera (1896) – Haffkine, Nueva Delhi & Calcuta

• Plaga (1897) – Haffkine – Hong-Kong

• Difteria (1923) – Ramón (Francia) (primera antitoxina)

• TB (BCG) (1927) – Francia, basada en los trabajos realizados en Saigón

• Tétanos (1927) – Ramón (Francia)

• Pertussis (1933) – Dinamarca & USA

• Fiebre amarilla (1935) – RF (Lagos & Nueva York); Pasteur (Dakar); ensayos en
Brasil

69

VACUNAS:
METODOS APLICADOS EN PRODUCCION

 Cultivo en embriones de pollo (huevos embrionados) - Goodpasture, Walter Reed,

1931

 Cultivo de tejidos - Enders, 1949

 Producción de antígeno especifico por Biotecnología -1980s

 Vacunas Conjugadas - 1980 – 1995

 Mejores métodos de separación y ensayos de análisis.

70

35
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PRODUCCION DE HUEVOS
EMBRIONADOS

Materia Prima en Producción de Vacunas

71

SELECCIÓN DE HUEVOS EMBRIONADOS

72

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INOCULACION DE HUEVOS
EMBRIONADOS

73

INCUBACION DE
HUEVO EMBRIONADO

74

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SELECCIÓN Y PROCESAMIENTO

75

INOCULACION DE VIRUS EN
EMBRION DE POLLO
Herpes virus simplex
Poxvirus
Virus del sarcoma de Rous
Virus de influenza
Virus de la papera
Virus de Newcastle
Adenovirus aviar

Virus de fiebre amarilla

Virus de influenza Herpes virus simplex

Virus de la papera Virus de la Rabia
Virus de fiebre amarilla

76

38
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VACUNAS:
PROCESO DE PRODUCCIÓN
CROMATOGRAFÍA
FERMENTADOR DE EXCLUSIÓN

COSECHA
ULTRAFILTRO 1 INACTIVACION
FORMULACION

FILTRACION TANGENCIAL
ULTRAFILTRO 2

EXCIPIENTES
ULTRAFILTRO 2
COLUMNAS DE
CROMATOGRAFIA

PRODUCTO

77

Cultivo en
Semilla Infectividad viral
substrato celular
cepa viral Contenido viral (UFP)
Esterilidad
Presencia de micoplasma

Inoculación del
virus
Inactivación
Concentración de proteína
Control de Calidad Concentración viral (UFP)
Cultivo del virus
Esterilidad
Caracterización inoculo viral
Albúmina residula
Concentración viral (UFP) Suero bovino residual
Inactivación
Análisis de pureza inoculo

Análisis presencia Micoplasma

Concentración
Análisis virus adventicios Esterilidad
Control de pH
Prueba de inmunogenicidad
Análisis secuencial

Aspecto
Preparación a
Identidad
granel
Potencia
Termoestabilidad
pH
Preparación Contenido de formaldehido libre
producto final Contenido de hidroxido de aluminio
Determinación de endotoxina
Determinació e antibiotico residual
Esterilidad
78
Toxicidad (múltiples dosis / máxima)

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VACUNAS:
VALORACION DE ANTIGENOS

79

TITULACION VIRAL

80

40
 04/05/2020

DETERMINACION DE UNIDADES
FORMADORAS DE PLACA

Virus

Dilución seriada

Dispensar 0.1 mL
Calculo de PFU/mL
PFU/mL = · de placas x 10 x Factor de
dilucion Platos

Titulo = 10 placas x 10 x 106 = 108 PFU/mL

81

DETERMINACION DE PLACAS DE
LISIS CON COLORACION VITAL

82

41
 04/05/2020

DETERMINACION DEL TITULO DE

NEUTRALIZACION

83

DETERMINACION DEL TITULO DE

NEUTRALIZACION

84

42
 04/05/2020

VACUNAS:
VALORACION DE ANTICUERPOS

85

DETERMINACIÓN DE LA PUREZA Y
CUANTIFIACIÓN DE ANTICUERPOS
Doble Inmuno difusión Ouchterlony

Inmuno - electroforesis

86

43
 04/05/2020

WESTERNBLOT:
ELECTROTRANSFERENCIA

Solución Bloqueadora

Solución de anticuerpos

Anticuerpo trazador

87

WESTERNBLOT:
ELECTROTRANSFERENCIA

Substrato

88

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 04/05/2020

ANTÍGENOS RECONOCIDOS POR

SUEROS DE ANIMALES INFECTADOS
Nine Mile Cb-O1 Cb-184 kDa

150
100
75
50

35

25

15

89

INMUNOPRECIPITACION
Pre - Zona Zona Post-Zona

Anticuerpo en exceso Antígeno en exceso

Precipitado

Zona de equivalencia

Concentración de Antígeno 90

45
 04/05/2020

INMUNO DIFUSION
INMUNODIFUSION RADIAL
Difusión de antígeno

Anticuerpo incorporado
al Gel Antígeno

Zona de precipitación

DOBLEDIFUSION
Anticuerpo Antígeno

Matriz de agar Zona de precipitación 91

INMUNO DIFUSION:
INMUNOELECTROFORESIS

92

46
 04/05/2020

METODOLOGIA FORMATO ELISA

Antígeno Agente bloqueador Anticuerpo primario

1 2 3
Anticuerpo trazador Adición de sustrato Reacción enzima-
E marcado con enzima sustrato cambio de
color

E E E E E E

4 5 6
93

METODO DE HEMAGLUTINACION
PASIVA

94

47
 04/05/2020

AGLUTINACION PARA TITULO DE ANTICUERPOS

CONTRA VIRUS DE LA INFLUENZA

DILUCION
MUESTRA

95

96

48
 04/05/2020

INMUNOFLUORESCENCIA

Ag sobre membrana celular

Directa

Anticuerpo
primario

(a) Inmunofluorescencia directa utilizando un Mac

marcado

97

VACUNAS:
RECCIONES ADVERSAS

98

49
 04/05/2020

Lymphangitis following smallpox

vaccination.
99

Satellite lesions.

100

50
 04/05/2020

Allergic reaction to tape

101

Robust take with lymphangitis.

102

51
 04/05/2020

Secondary bacterial infection of vaccination site.

103

Erythema multiforme following smallpox vaccination.

104

52
 04/05/2020

Erythema Multiforme.

105

106

53