RESUMEN

REVISION DE ARTICULO EN SESION DE CLASE DE MICROBIOLOGÍA

JUEVES 16 DE MAYO DEL 2019

En contraste con las elaboradas máquinas citoesqueléticas que albergan las

células eucarióticas, como los husos mitóticos, las estructuras citoesqueléticas
detectables por microscopía electrónica típica de tinción negativa generalmente
están ausentes de las células bacterianas. Las revoluciones en genómica y
microscopía de fluorescencia han confirmado la existencia no solo de estructuras
citoesqueléticas a pequeña escala en bacterias, sino también de homólogos
funcionales generalizados de proteínas citoesqueléticas eucarióticas.
En bacterias comoEscherichia coli , los homólogos de la tubulina y la actina
interactúan directamente entre sí y son cruciales para coordinar el crecimiento y la
división celular. La función y las interacciones directas entre estas proteínas serán
el foco de esta revisión.
La división celular es un proceso fundamental compartido entre todos los dominios
de la vida. Muchas especies procarióticas se dividen por algún tipo de fisión
binaria, convirtiendo una célula madre en un punto específico de su ciclo celular
en dos células hijas genéticamente idénticas.
En algunas especies, estas células hijas no son física ni químicamente idénticas,
lo que conduce a destinos celulares asimétricos. Para evitar la división prematura
de la célula madre, la fisión binaria debe coordinarse adecuadamente con el
crecimiento de la pared celular, la replicación de cromosomas y la segregación de
cromosomas, la citocinesis bacteriana implica la colocación, el ensamblaje y la
actividad adecuados de un orgánulo especializado, el "divisoma"
El divisoma está organizado por un homólogo de tubulina polimerizante, y su
colocación a menudo está dirigida por un gradiente de proteínas en toda la
célula. Las bacterias también utilizan proteínas polimerizantes para otros procesos
a gran escala, como el crecimiento de la pared celular, la segregación
cromosómica y el ensamblaje de orgánulos
FtsZ, un homólogo de la tubulina polimerizante para la citocinesis
La primera proteína bacteriana con la hipótesis de ser un elemento citoesquelético
fue FtsZ, un componente esencial de la maquinaria de división celular en casi
todas las bacterias. Al agotarse el FtsZ, las células deEscherichia coli continúan
creciendo y duplicando sus cromosomas a lo largo de muchas generaciones,
formando filamentos largos y lisos ( Figura 1 ). Muchas otras bacterias también se
agrandan en células multinucleadas si hay un problema con la división celular (en
lugar de detener el crecimiento), quizás porque pueden surgir muchas células
viables si el problema puede repararse y el filamento puede dividirse en células
normalizadas.
La primera sugerencia de que FtsZ era una proteína citoesquelética provino de
una microscopía inmunoelectrónica que mostró una localización en forma de anillo
de FtsZ que rodea el punto medio de las células de E. coli. Los anillos de FtsZ
("anillos Z") se compararon inicialmente con los anillos de actina-miosina que se
forman en las células eucariotas durante la citocinesis. Sin embargo, estudios
posteriores sugirieron que FtsZ era un homólogo de tubulina, citando la presencia
de una secuencia de aminoácidos distintiva de tubulina y la capacidad de FtsZ
para unirse e hidrolizar GTP
Aunque FtsZ y tubulina deben unirse a GTP para polimerizar en protofilamentos
de cabeza a cola ( Figura 2 ), los protofilamentos de FtsZ in vitro no se organizan
en estructuras de microtúbulos huecos, en forma de tubo, formados por
tubulina. En su lugar, los protofilamentos FtsZ se agrupan en otras
configuraciones in vitro , incluidas las hojas. La base molecular para las
interacciones laterales entre protofilamentos individuales aún no está clara, pero
estas interacciones son fuertemente promovidas por otras proteínas, incluida la
proteína esencial ZipA (Fts Z - i que interactúa con la proteína A ) y varias Zap no
esenciales (Fts Z - a ssociadas p roteins) proteínas en E. coli , y proteínas como
FzlA y SepF en otras especies.
ZapA, es un elemento citoesquelético conservado en varias especies bacterianas,
forma un tetrámero que reticula protofilamentos FtsZ in vitro, y es importante para
agrupar protofilamentos FtsZ in vivo.Este agrupamiento de protofilamentos FtsZ
parece ser importante para la función del anillo Z debido a que la inactivación de
las proteínas Zap o la porción de ZipA que interactúa con FtsZ produce
importantes defectos de división celular.
EXPLICACION FIGURA 2 : “Roles de tubulina bacteriana (FtsZ) y actina
(FtsA) en el ensamblaje del anillo citocinético en E. coli .
FtsZ consiste en un gran dominio del núcleo globular requerido para la
unión a GTP y la polimerización de la cabeza a la cola, junto con un
enlazador flexible y un núcleo de terminal carboxi corto conservado, que
sirve como un centro para la unión de ZipA (no se muestra) y FtsA. Al unirse
a GTP, los monómeros de FtsZ forman polímeros de cabeza a cola que
pueden hidrolizar GTP. Los monómeros FtsZ resultantes del desmontaje del
polímero se reciclan rápidamente y se vuelven a unir GTP para continuar el
ciclo. FtsA consta de 4 subdominios (1A, 1C, 2A y 2B, que se muestran en
diferentes colores) y una hélice anfipática carboxi-terminal que sirve como
anclaje de membrana Aunque no está tan bien caracterizada, la unión de
ATP parece ser necesaria para la formación de polímeros de cabeza a cola
de FtsA, que luego pueden interactuar con los polímeros de FtsZ en la
membrana como se muestra. Además, los paquetes de polímeros FtsZ
pueden interactuar con los paquetes de polímeros FtsA.”

Modelos para la división celular dependiente de FtsZ

Una función atribuida al anillo Z es el establecimiento de un andamio para un
mayor ensamblaje de la división. La evidencia de esta función es fuerte: muchas
otras proteínas del divisoma requieren absolutamente el anillo Z para su
reclutamiento en el sitio de la división, y si el anillo Z se ensambla en el lugar
equivocado, como el polo celular, el resto del divisoma es construido allí en su
lugar, formando minicélulas ( Figura 1 ). El extremo extremo carboxilo de FtsZ, un
segmento relativamente corto que contiene un dominio central altamente
conservado, ( Figura 2 ) está involucrado en el reclutamiento de las proteínas de
división celular ZipA y FtsA (ver más abajo). Tanto ZipA como FtsA se unen a la
membrana citoplasmática, a diferencia de FtsZ. Estas proteínas son intermediarios
clave para reclutar los componentes divisomas restantes, que abarcan la
membrana citoplásmica y ayudan a sintetizar el tabique de división.
Otra función postulada del anillo Z es proporcionar la fuerza para impulsar la
constricción de la membrana interna durante las etapas posteriores de la división
celular. Aunque las bacterias no contienen homólogos evidentes de proteínas
motoras eucariotas, los experimentos in vitro con liposomas sugieren que la
dinámica de polimerización y despolimerización de FtsZ, junto con la unión a la
membrana, son suficientes para generar una fuerza de pellizco en la
membrana. En apoyo de FtsZ actuando solo, los polímeros FtsZ unidos a los
liposomas a través de una membrana artificial que se dirige a la hélice o a través
de una interacción natural con FtsA pueden pellizcar los liposomas hacia adentro
cuando la GTP está presente para estimular el ensamblaje de FtsZ, es importante
describir varias propiedades clave de la proteína y los polímeros de FtsZ.  La
actividad de FtsZ GTPasa es bastante alta, con un rango de una a diez moléculas
de GTP hidrolizadas por minuto. Esta actividad se produce en protofilamentos
FtsZ en lugar de monómeros porque la molécula de GTP está situada entre
subunidades FtsZ adyacentes. Tras la hidrólisis de GTP, las dos subunidades
giran, lo que hace que el protofilamento que contiene el PIB se curva. Esta
curvatura podría explicar cómo las membranas unidas a los protofilamentos FtsZ
se deforman con la hidrólisis GTP.
Por lo tanto, la combinación de la curvatura subunidad-subunidad y el
reensamblado rápido de las interacciones de subunidad rectas en membranas que
se han curvado recientemente proporciona una manera de deformar
iterativamente la membrana localmente hasta que se alcanza el límite para la
curvatura del protofilamento. Este límite de curvatura puede explicar por qué la
mayoría de los liposomas solo pueden pellizcarse hasta cierto punto. In vivo ,
también podría explicar por qué FtsZ deja el tabique de división invaginante antes
de que se cierre completamente.
Para abordar el mecanismo general de la citocinesis dependiente de FtsZ, es
importante comprender la estructura de orden superior del anillo Z en las
células. Las reconstrucciones tridimensionales originales de los anillos Z utilizando
microscopía de fluorescencia convencional mostraron sobre todo anillos continuos
de fluorescencia en la membrana que estaban estrechamente agrupados,
probablemente con un ancho inferior a 300 nm.
En muchas bacterias que se han estudiado, el anillo parece comenzar como una
estructura en espiral, que luego se une en un anillo más coherente con el
tiempo. Los FtsZ mutantes que permanecen en ensamblajes en espiral pueden
reclutar los componentes restantes del divisoma en un andamio en espiral, lo que
resulta en septos de división en forma de espiral. Sin embargo, se ha observado
que los anillos Z en otras especies comienzan como un solo sitio de nucleación
antes de rodear la célula, sin evidencia de un intermedio en espiral.
Para ayudar a dilucidar la estructura del anillo Z a una resolución más alta,
recientemente se han utilizado métodos de microscopía de súper resolución para
brindar mayor precisión y detalle. En E. coli , B. subtilisy Caulobacter crescentus ,
el anillo Z aparece como una cadena de cuentas parcheadas cuando se toman
imágenes mediante microscopía de iluminación estructurada tridimensional (3D-
SIM; Figura 1 ). Dicho patrón podría interpretarse como concentraciones más altas
de FtsZ en conjuntos discretos o balsas, intercaladas con concentraciones más
bajas de FtsZ entre las balsas. Estos datos se derivaron de la inmunofluorescencia
o de las células que producen una fusión FtsZ con una proteína fluorescente.
 los experimentos de polarización de fluorescencia sugieren que la mayoría de los
protofilamentos FtsZ no están alineados circunferencialmente, sino que están
orientados al azar.Otras proteínas reclutadas por FtsZ, como ZipA y ZapA,
también adoptan patrones similares, consistentes con la idea de que la distribución
espacial en nanoescala de FtsZ determina la morfología de la división que se está
reclutando. Sin embargo, la estructura fina del anillo Z puede diferir entre las
especies, debido a que los filamentos Caulobacter FtsZ parecen estar más
alineados en paquetes que los de E. coli.
El reclutamiento de proteínas divisómicas adicionales para los parches FtsZ en
lugar de un anillo continuo tiene bastante sentido dado el bajo número de copias
de muchas de estas proteínas. Por ejemplo, en E. coli , FtsA y ZipA están
presentes en menos de mil moléculas por célula, a diferencia de los muchos miles
de moléculas FtsZ. Además, las proteínas divisómicas FtsQ y FtsI, que son
necesarias para la biosíntesis de la pared del peptidoglicano septal, están
presentes en solo unos pocos cientos de moléculas por célula 
Para generar una fuerza de constricción hacia el interior, las balsas de
protofilamento FtsZ necesitan coordinar las entradas de la maquinaria de síntesis
de la pared septal que han reclutado y ensamblado en la membrana. Hay algunas
sugerencias sobre cómo podría ocurrir esto: las proteínas divisomas FtsE y FtsX
dependientes de FtsZ actúan como una ATPasa y pueden transmitir señales de la
maquinaria de la pared a FtsZ directamente; Además, FtsA puede recibir señales
de la maquinaria de la pared a través de FtsN, otra proteína divisoma esencial que
contacta al peptidoglicano directamente con su dominio periplásmico y se une a
FtsA con su dominio citoplasmático. Estas y probablemente otras señales de la
división asegurarán que la generación de fuerza por el anillo Z se coordine de
manera precisa y sólida con el progreso de la síntesis del septum. Los huecos
entre las balsas FtsZ pueden proporcionar un cambio entre un anillo Z disperso y
un anillo Z más altamente condensado, y este interruptor proporcionaría una
fuerza de constricción, potencialmente además de la fuerza de deformación de la
membrana. Recientemente se han revisado en profundidad diferentes modelos
para la constricción de anillo en Z.