Citología, Histología y Embriología

BIENVENIDOS COHORTE 2018!!!

BIENVENIDOS COHORTE 2018!!!

REALIDAD...
MUCHO MAS FACIL QUE EL CURSO DE INGRESO…..
EQUIPO CATEDRA
ASIGNATURA: Citología, Histología y Embriología

Esp. Méd. ZAMORA, VICTOR. (Prof. Adj. Responsable )

Dr. LUQUE, MELCHOR E. (Prof. Adj.)
Esp. Méd. SANCHO, PILAR. (JTP) – COMISION E
Esp. Méd. FLORES, TERESITA. (JTP)- COMISION D
Dra. BARRIONUEVO, MARÍA GUADALUPE (JTP)- COMISION A
Esp. Méd. MURATORE, ANGEL. E. (JTP)-COMISION B
Esp. Méd. VILLAVICENCIO, CLAUDIA R. (JTP)- COMISION C
Dra. VOLTA BIBIANA JULIETA (JTP)-COMISION F

-
 CURSADO
• CLASES TEORICAS: obligatorias (75% de asistencia)
LUNES DE 12:00 HS A 15:00 HS

Lugar: Unse sede central Av. Belgrano sur 1912. Aula a confirmar.-

• CLASES PRACTICAS : obligatorias y evaluativas.

MARTES O JUEVES -4 HS
Lugar: Laboratorio de microscopia Av. Belgrano Norte al 600
Segundo piso laboratorio Nº4 ( el primero a la derecha )

evaluación oral y/o escrita. (necesitan aprobar el 75%)

para acceder al examen parcial.

• Exámenes parciales: Escritos u orales / múltiple opción o a desarrollar

100% !!! (EN PRIMERA INSTANCIA O EN RECUPERATORIO)
DEFINICIONES:

• Citología: (cito) célula

(logos)conocimiento/aprendizaje

• Histología : (histos) tejido.

(logos)conocimiento/aprendizaje

• Embriología: (embrios) embrión

(logos) conocimiento/aprendizaje
CATEDRA DE CITOLOGÍA, HISTOLOGÍA Y
EMBRIOLOGÍA

Unidad 1
Métodos e instrumentos de estudio
 Niveles de organización Biológica

Nivel atómico

Nivel molecular

Nivel tisular
Nivel celular

Nivel organos
Nivel organismo Nivel sistema de org.
 Métodos de estudio

• Microscopia: es el conjunto de técnicas y métodos

destinados a hacer visibles objetos de estudio que por su
pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo
humano.
 Poder de resolución
• Es la menor distancia que debe existir entre dos puntos para
que puedan visualizarse como separados.

Aumento
• Es la relación entre el tamaño del objeto /imagen en medidas
lineales
Poder de resolución & Aumento
Microscopio óptico
(de campo claro)
• La luz atraviesa la muestra
(transiluminación)

• Los cortes deben ser muy

delgados.

• Deben estar coloreados

para permitir el contraste
de las estructuras
¿Cómo esta compuesto un microscopio?

• Sistema mecánico: constituido por

todas la partes mecánicas donde van
sujetas las lentes y que permiten el
movimiento para el enfoque

• Sistema óptico: un sistema de lentes

que de manera coordinada producen
el aumento de la imagen

• Sistema de iluminación: las partes que

reflejan, transmiten y regulan la
cantidad de luz necesaria para
efectuar la observación a través del
microscopio.
• Sistema mecánico

• Brazo
• Base o pie
• Cabezal
• revolver
• Platina
• Pinzas de sujeción
• Tornillo macrométrico
• Tornillo micrométrico
• Sistema óptico

• Oculares
• objetivo
• Condensador
• Diafragma
• Sistema de iluminacion

• Eléctrica
• Natural
 Microscopios especiales
• Microscopio de campo oscuro.
• Microscopio de contraste de fases.
• Microscopio de fluorescencia
• Microscopio confocal
• Microscopios electrónicos
Microscopio de campo oscuro
• Utiliza un filtro en el condensador
que evita que los rayos centrales
lleguen a la muestra

• Solo llegan a la muestra rayos

indirectos

• Se observan puntos brillantes

sobre fondo oscuro.

• Sirve para ver células vivas

Microscopio de campo oscuro
Microscopio de contraste de fases
• Se usa para celulas vivas

• Los rayos que

atraviesan estructuras
gruesas sufren un
retardo mayor a los que
atraviesan estructuras
delgadas otorgando
mayor contraste.
Microscopio optico CC Microscopio de contraste de fase
Microscopio de fluorescencia
 Fluorescencia
• Es un proceso de interacción entre la radiación y la materia en el que un

material absorbe radiación de una fuente especifica y rápidamente emite

luz.
 Fluorescencia

Secundaria
Primaria
Donde YO
introduzco una
Donde el material
sustancia con
contiene
fluoroforos para
fluoroforos
ver algo en
particular
 Microscopio de fluorescencia

• Fuente de luz

• Filtro de excitación

• Espejo dicroico

• Filtro de barrera
Microscopio de fluorescencia
 Microscopio confocal
(microscopio laser de barrido )
 Microscopio confocal
• Fuente de luz: laser
• Sistema óptico:
• Filtros
• espejo dicroico
• detectores
• computadora
Tomado de Claxton N, Fellers T, Davidson M. (2008). Laser Scanning Confocal Microscopy
(119).
 Microscopio electrónico
• Reemplaza el haz de luz por un haz de
electrones.
• Opera con vacío.
• Reemplaza las lentes de cristal por campos
electromagnéticos.
• Tiene mayor resolución y amplificación que los
microscopios fotónicos
Microscopio electrónico
M.E.T MEB
MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION
MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO
 PREGUNTAS POSIBLES EN EL TP.
• QUE ES HISTOLOGIA? EMBRIOLOGIA?

• CUAL SE CONSIDERA EL MICROSCOPIO ESTÁNDAR?

• QUE OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS CONOCE? FUNDAMENTOS Y PARA

QUE SIRVEN?

• QUE DIFERENCIAS EXISTEN ENTRE UN M.O Y UN M.E.?

• DEFINA QUE ES PODER DE RESOLUCION Y SUS DEFERENCIAS CON

“AUMENTO”.
20 MINUTOS!!!!!
 Técnica histológica

Se denomina TÉCNICA HISTOLOGICA…

al conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico (animal o

vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas
para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos
a través de los microscopios fotónicos y electrónicos.
 Procedimientos
• Vitales o inmediatos: sobre células vivas
(cultivos) se observa “en fresco” con
microscopios especiales como:
– el de campo oscuro o
– el de contraste de fase.

• No vitales o mediatos: debemos detener

el proceso vital de la célula o los tejidos y
someterlos a la técnica histológica para
poder observarlos.
 Obtención de la muestra

• Citología : puedo ver células o microcolgajos celulares

– Citología exfoliativa (tec. Papanicoalou- ext bucal etc)
– Punción (PAAF)-
– Punción de líquidos cavidades

• Biopsia: veo tejidos de un organismo vivo

- Incisional : punch/ Trucut /Losange / Quirúrgica
-Escisional : ………ectomias .

• Autopsia o Necropsia. Veo tejidos de un organismo sin vida

CITOLOGIA EXFOLIATIVA
CITOLOGIA POR PUNCION CON
AGUJA FINA (PAAF)
FIJAR INMEDIATAMENTE!!!
EN ALCOHOL 96º!
BIOPSIAS
BIOPSIA POR PUNCION CON AGUJA GRUESA
(TRUCUT)
Extracción fijacion del material

Tallado del material

 Pasos de la técnica histológica
En tejidos (biopsia/autopsia) En citología (líquidos/ extendidos)
• Fijación • Fijación
• Deshidratación • Hidratación
• Aclaramiento
• Imbibición en parafina • Coloración
• Inclusión/entacado • Deshidratación
• Corte • Montaje
• Desparafinizacion
• Hidratación
• Coloración
• Deshidratación
• Montaje
 Fijación
• Evitar las modificaciones post mortem que pueda sufrir la célula (procesos
autolíticos), manteniendo la estructura morfológica de células y tejidos
tratando de que se parezcan lo mas posible a su estado vivo

Bien fijado MAL fijado

(autolisado)
 Fijadores

Calor

Fisicos
Frio

Formol
Alcohol
Simples Glutaraldehido
Tetraoxido de osmio
Quimicos

Liquido de Bouin
Compuestos Solucion de Carnoy
Liquido de Zenker
otros
 Pasos de la técnica histológica

En tejidos (biopsia/autopsia) En citología (líquidos/ extendidos)

• Fijación • Fijación
• Deshidratación • Hidratación
• Aclaramiento • Coloración
• Imbibición en parafina
• Deshidratación
• Inclusión
• Montaje
• Corte
• Coloración
• Deshidratación
• Montaje
 Deshidratación
• La deshidratación debe ser completa porque, de lo contrario, el
solvente no actúa de forma adecuada. Para tal fin se utilizan
líquidos deshidratadores en los cuales se sumergen los tejidos. Los
deshidratadores más usados son el alcohol etílico, el alcohol
isopropílico en graduaciones crecientes.

Alcohol 70
Alcohol 80 Dos horas en cada uno
Alcohol 96
Alcohol 100 / Alcohol absoluto.
 Aclaramiento / Diafanización
• Diafanización. Las muestras deshidratadas se encuentran
totalmente embebidas en alcohol etílico absoluto; pero la parafina
tampoco es soluble en alcohol por lo que es necesario reemplazarlo
por sustancias que sean capaces, simultáneamente, de mezclarse
con el alcohol y disolver la parafina. Estas se denominan líquidos
diafanizadores o intermediarios. Ejemplos: xilol, tolueno, benceno,
y el cloroformo.

Luego de dos horas

la muestra tomara el aspecto de fruta abrillantada.
Ligeramente transparente
 Imbibición en parafina
• Las parafinas son hidrocarburos saturados provenientes de la
destilación del petróleo. Generalmente son sustancias sólidas
a temperatura ambiente. Existen diferentes tipos de parafina
que se caracterizan por sus puntos de fusión. Estos oscilan
entre 40 o y 60 o C.
Procesador automático de tejidos
 Inclusión
• La inclusión o formación del bloque o TACO de parafina se
efectúa empleando moldes de diversos materiales, tamaños y
profundidades. Pueden ser de papel, metal o plástico. El
bloque de parafina debe contener la muestra correctamente
orientada para facilitar la obtención de las secciones o
“cortes”.
Desmolde y Entacado
Corte
Montaje del preparado
 Hay que desandar ….
• Desparafinizacion:
-1º en la estufa, luego en xilol

• Hidratación
– Alcohol 100- 96 -70- Agua destilada.

Listo para colorear!!!

Coloración
 Coloración de rutina

Hematoxilina
H-E Eosina
 Hematoxilina Eosina
Sin colorear (núcleos) H&E
(citoplasmas)
Deshidratación –Aclaramiento- Montaje
Preparado Histológico
Biopsia de mucosa duodenal Marsh 0 cero