Las algas verdes unicelulares que pertenecen al género Chlorella se pueden encontrar tanto en

agua dulce como marina y son organismos muy prometedores para la biotecnología de microalgas.

Las microalgas son microorganismos fotosintéticos que convierten eficientemente la energía solar,
el agua y el dióxido de carbono en lípidos ricos en carbono [4] . En comparación con las plantas
terrestres, las microalgas tienen un alto rendimiento en producción de aceites, produciendo hasta
5 veces mas que una planta terrestre. Las microalgas proporcionan la ventaja de usar tierras no
fértiles, que son ineficientes para la agricultura, para la producción de biodiesel en lugar de usar
tierras productivas que pueden usarse para la producción de alimentos.

El biodiesel ha recibido una gran atención recientemente debido a las ventajas asociadas con su
clasificación como un recurso de energía renovable y su biodegradabilidad. El biodiesel está
compuesto de ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME) y generalmente se sintetiza a través de la
transesterificación (intercambio del grupo funcional entre las cadenas carbonadas de un alcohol y
un ester) a partir de un aceite vegetal con un alcohol de cadena corta (metanol principalmente), se
obtiene la glicerina como subproducto y el éster (metiléster o éster metílico al emplearse
metanol), que ya puede utilizarse como biocarburante.

Combustible renovable y no toxico, no contribuye a la atmosfera con dióxido de carbono o azufre

y emite menos contaminantes que el combustible convencional. COSTOS: El biodisel cuesta
aproximadamente 0.5 dolares/litro en comparación con el diésel convencional que cuesta 0,35
dolares/litro.

Chlorella protothecoides es una microalga que puede crecer de forma fotoautótrofa o heterótrofa
en diferentes condiciones de cultivo. El crecimiento heterotrófico de C. protothecoides
suministrado con acetato, glucosa u otros compuestos orgánicos como fuente de carbono, da
como resultado un alto nivel de biomasa y un alto contenido de lípidos en las células.

Las microalgas en situaciones de estrés provocadas por condiciones ambientales, tanto químicas
como físicas, sintetizan y acumulan ácidos grasos. Los principales estímulos que afectan el
crecimiento de estos microorganismos son la temperatura, la intensidad luminosa, la deficiencia
de nutrientes (nitrógeno, fósforo, azufre y silicio), la salinidad, la concentración de CO2 y el pH del
medio de cultivo, de estos la deficiencia de nitrógeno es el principal factor que incide en el
metabolismo de los lípidos.

El cultivo heterotrófico de C. protothecoides se llevó a cabo inicialmente en un matraz Erlenmeyer

de 500 ml que contenía 300 ml de medio a 28 ± 1 ° C bajo agitación continua (180 rpm) y aire
que fluye en la oscuridad. Se realizó un cultivo heterótrofo adicional en un fermentador de 5 l que
contenía 3,0 l de medio, en el que se alimentó por lotes solución concentrada de glucosa. La
concentración de oxígeno disuelto se controló aumentando la velocidad de agitación y el flujo de
aire. La velocidad de aireación y la velocidad de agitación fueron variables.

Las células se recogieron por centrifugación, se lavaron con agua destilada y luego se secaron en
un liofilizador. El aceite de microalga se preparó mediante pulverización de polvo de células
heterótrofas en un mortero y extracción con n- hexano.

El crecimiento celular se midió por medio de la absorbancia de la suspensión a 540 nm Este valor
se transformó en concentración de biomasa: y= 0,2821x (x es absorbancia)
La composición del biodiesel se derivó y analizó mediante cromatografía de gases y análisis de
espectrometría de masas. La cromatografía de gases se realizó en una columna de sílice revestida
con una película de polietilenglicol. La presión en la cabeza de la columna del gas portador (helio)
fue de 3 kPa a la temperatura inicial del horno, y su caudal de 1,0 ml min -1 . La temperatura de
inyección fue de 290ºC ; La temperatura del horno fue de 100 ° C durante 2 minutos, aumentó a
300 ° C durante 20 minutos y se mantuvo a esta temperatura durante 20 minutos. min (tiempo
total de ejecución 42 min).

Articulo

El cultivo heterotrófico de C. protothecoides se llevó a cabo inicialmente en un matraz Erlenmeyer

de 500 ml que contenía 300 ml de medio a 28 ± 1 ° C bajo agitación continua (180 rpm) y aire
que fluye en la oscuridad. Se realizó un cultivo heterótrofo adicional en un fermentador de 5 l que
contenía 3,0 l de medio, en el que se alimentó por lotes solución concentrada de glucosa. La
concentración de oxígeno disuelto se controló aumentando la velocidad de agitación y el flujo de
aire. La velocidad de aireación y la velocidad de agitación fueron variables.

Las células se recogieron por centrifugación, se lavaron con agua destilada y luego se secaron en
un liofilizador. El aceite de microalga se preparó mediante pulverización de polvo de células
heterótrofas en un mortero y extracción con n- hexano.

El crecimiento celular se midió por medio de la absorbancia de la suspensión a 540 nm Este valor
se transformó en concentración de biomasa: y= 0,2821x (x es absorbancia)

La composición del biodiesel se derivó y analizó mediante cromatografía de gases y análisis de

espectrometría de masas. La cromatografía de gases se realizó en una columna de sílice revestida
con una película de polietilenglicol. La presión en la cabeza de la columna del gas portador (helio)
fue de 3 kPa a la temperatura inicial del horno, y su caudal de 1,0 ml min -1 . La temperatura de
inyección fue de 290ºC ; La temperatura del horno fue de 100 ° C durante 2 minutos, aumentó a
300 ° C durante 20 minutos y se mantuvo a esta temperatura durante 20 minutos. min (tiempo
total de ejecución 42 min).

RESULTADOS

El polvo de maíz se hidrolizó en 2 3 experimentos factoriales. Al comparar los equivalentes de

dextrosa (DE) después de 1 h, cuando la dosis de alfa-amilasa se fijó, la dosis de glucoamilasa no
jugó un papel decisivo. Esto significó que el almidón se hidrolizó pero no se sacarificó con el
tiempo de reacción de 1 h. Después de 2 h, todas las reacciones fueron determinantemente
excesivas bajo las condiciones, excepto que la alfa-amilasa y la glucoamilasa fueron de 0.005 y
0.100 g. Debido a que el azúcar reductor producido en las reacciones excesivas fue
desproporcionado.

Como se muestra en la Fig. 2 , el crecimiento celular alcanzó un valor máximo (3.92 g L -1 )

después de 144 h de cultivo con el sustrato de hidrolizado de maíz en polvo. Indicó que era
factible utilizar CPH como carbono orgánico para cultivar Chlorella . Durante la mayor parte del
tiempo de cultivo, la CPH resultó superior a la solución de glucosa, que debido a la CPH contenía
algunos componentes beneficiosos para la Chlorella . El contenido de lípidos en las células de algas
fue del 54,7% con la alimentación con glucosa y del 55,3% con la alimentación con CPH, que no fue
significativamente diferente.

El contenido de lípidos en las células heterótrofas (el crecimiento heterótrofo de Chlorella

protothecoides da como resultado no solo la desaparición de la clorofila en las células sino
también la acumulación de un alto contenido de lípidos en las células) alcanzó el 55,2%,
aproximadamente cuatro veces más que en las células autótrofas.

Se estableció un cultivo heterótrofo de alta densidad de C. protothecoides con alimentación de

CPH en el fermentador del tanque agitado de 5 l. El contenido de lípidos en las células de algas
cultivadas en el fermentador fue del 46,1%, que fue un poco menor que en los matraces
Erlenmeyer. el crecimiento celular alcanzó 15.5 g L -1 después de 184 h de cultivo en biorreactor
de 5 l, luego disminuyó a 14.3 g L -1 en el cultivo de 2 h posterior.

El éster metílico del ácido oleico, el éster metílico del ácido octadecadienoico y el éster metílico
del ácido octadecanoico son 18 ésteres metílicos del ácido carbónico, y el contenido total de estos
tres FAME fue superior al 80%. Esto dio lugar a la alta calidad del biodiesel.

Los resultados sugieren que el nuevo proceso, que combina bioingeniería y transesterificación, fue
un método viable y eficaz para la producción de biodiesel de alta calidad a partir de aceite de
 microalgas heterotrófico. El biodiésel de aceite microalgal heterótrofo podría ser una alternativa
competitiva al combustible diesel convencional.

METABOLISMO

La síntesis de ácidos grasos en las algas se realiza en los cloroplastos y generalmente se producen
cadenas de ácidos grasos de 16C y 18C, los cuales son usados por la célula para la síntesis de
membranas, triglicéridos, almacenamiento de lípidos neutros y cloroplastos. Específicamente, la
biosíntesis de ácidos grasos se inicia con la conversión del Acetil-CoA a Malonil-CoA catalizada por
la enzima Acetil-CoA Carboxilasa. La molécula de Malonil-CoA es la donadora de carbono para la
síntesis de nuevos ácidos grasos,donde es transferida de la CoA a un cofactor proteico (ACP) para
la obtención del Malonil-ACP, el cual participa en una serie de reacciones de condensación con los
aceptores acil-ACP y acetil-CoA. El ciclo termina cuando el grupo acil es removido del sitio ACP por
la acil-ACP tioesterasa y una vez sintetizados los ácidos grasos libres son trasportados del ACP al
glicerol-3-fosfato o al monoacilglicerol-3-fosfato.

en condiciones heterotróficas suponen que la xilosa y la arabinosa involucradas en el ciclo de las

pentosas fosfato pueden estar predominando sobre la ruta de la glucólisis mejorando la
acumulación de lípidos

Se ha demostrado que mantener a la microalga bajo condiciones de estrés incrementa la

acumulación de lípidos, por lo que se han utilizado métodos como limitación de nitrógeno y
adición de iones metálicos y sales como EDTA, para inducir las condiciones de estrés

metanol
licuadora
Acido catalizador

Metil ester
reactor separador Removedor
Aceite de de metanol
microalgas
glicerol

secador Neutralizacion y
biodisel
lavado

alquil

agua Agua de
lavado