http://www.revistainfantil.org.
ar
CITOGENETICA, MAS DE 50 AÑOS EN CONTINUO AVANCE
Dra. Marta S. Gallego
INTRODUCCION
La citogenética, disciplina que estudia la
estructura y función de los cromosomas, cumple
un importante rol en el diagnóstico de patología
cromosómica asociada a retardo mental (RM),
malformaciones congénitas múltiples (MCM) y
desórdenes hemato-oncológicos.
Se han publicados varios trabajos de revisión
que hacen mención al gran avance que ha tenido
la citogenética en los últimos 50 años, emplean-
do como herramientas desde el microscopio hasta
los microarrays 1,2,3,4,5.
Walter Flemming publicó en 1882 la primera
ilustración de un cromosoma humano con la deno-
minación de “mitosis” y en 1889 Waldeyer intro-
dujo el término de cromosoma, palabra griega que
significa “cuerpo coloreado”.
En 1924 Levitsky denominó cariotipo a la orde-
nación de los cromosomas de a pares. En 1956,
tres años después que la estructura de la doble
hélice del ADN fuera descifrada, diferentes hallaz-
gos que implicaron importantes avances en la téc-
nica de obtención de las preparaciones cromo-
sómicas, como “el shock hipotónico”, el uso de
colchicina para la detención de las células en divi-
sión y el uso de mitógenos permitieron a Tjio y
Levan, en la ciudad de Lund, Suecia, descubrir
que el número modal de cromosomas en la espe-
cie humana era de 46 6,7. Este hallazgo, que fue
posteriormente confirmado por Ford y Hamerton,
rompió con la creencia que se tuvo durante 30
años que el número de cromosomas era 48 8.
A partir de estos descubrimientos, que mar-
caron el comienzo de la citogenética humana
Laboratorio de Citogenética. Servicio de Genética.
Hospital de Pediatría Juan P. Garrahan.
412 Medicina Infantil Vol. XVII N° 4
ACTUALIZACIONES
moderna, muchos científicos aplicaron la citoge-
nética al estudio de la correlación genotipo-feno-
tipo.
En 1959 se observó que la trisomía 21 era la
causa del Síndrome de Down y que anomalías en
los cromosomas sexuales eran la causa de los
Síndromes de Turner y Klinefelter 9,10,11.
Se comunicaron también varios estudios que
vincularon anomalías cromosómicas (AC) estruc-
turales a síndromes genéticos conocidos, pero el
primero lo comunicó Lejeune demostrando que la
deleción del brazo corto del cromosoma 5 esta-
ba asociada al sindrome de Cri du Chat 12. Al final
de la década del 60, Caspersson describió la pri-
mera técnica de bandeo cromosómico, bandas
Q, utilizando fluorocromos, como mostaza de qui-
nacrina que permitían observar los cromosomas
con un patrón especial para cada uno 13. Parale -
lamente se describieron otras técnicas de ban-
deo como bandeo R (G reverso), C (centromérico)
y bandeo NOR (regiones organizadoras de nuclé-
olos) 14.
En el campo de la Hemato-Oncología en
1960, Nowel descubrió el cromosoma Filadelfia,
primera AC adquirida asociada a la leucemia
mieloide crónica y trece años después Rowley,
empleando técnica de bandeo, demostró que
se producía como consecuencia de la traslo-
cación 9;22 15,16. Se han descripto posteriormente
innumerables AC asociadas a diferentes tipos de
leucemias y linfomas que han servido para la
localización y detección de genes implicados
en diferentes tipos de cánceres. En 1971
Seabright desarrolló el protocolo para la obten-
ción de bandas claras y oscuras, teñidas con
Giemsa, de allí el nombre de bandeo G, técni-
Diciembre 2010
http://www.revistainfantil.org.ar
ca que aún hoy sigue siendo de elección para
la detección de AC estructurales y numéricas 17 .
En el mismo año en la Conferencia realizada en
Paris se fijaron las primeras normativas de
nomenclatura para el cariotipo humano 18 . La
implementación de las técnicas de bandeo men-
cionadas y la facilidad para obtener cromoso-
mas mediante cultivo de linfocitos permitieron
que rápidamente se detectaran AC tanto en
pacientes afectados como en personas sanas
portadoras de AC balanceadas.
La resolución de las bandas que se emplea-
ban hasta ese momento no era superior a 400
hasta que Yunis desarrolló la técnica de alta reso-
lución (AR), que permitió obtener cromosomas de
mayor longitud, en estadío de prometafase y por
ende visualizar AC con más precisión 19.
A partir de la técnica de AR se pudieron detec-
tar deleciones y duplicaciones asociadas a dife-
rentes síndromes como Prader Willi y Angelman
entre varios otros20. Sin embargo, cuando el tama-
ño de la deleción era muy pequeño no podía
detectarse con AR. Esto se resolvió posterior-
mente con la descripción de la técnica de hibri-
dación in situ con fluorescencia (fluorescence in
situ hybridization, FISH).
En la década del 80 se produce una verda-
dera revolución en la citogenética con el adve-
nimiento de la “citogenética molecular” discipli-
na que como el nombre lo indica se generó con
el aporte de la biología molecular a la citogenéti-
ca clásica. La técnica de FISH marcó el comien-
zo de una nueva era en el campo de la citogené-
tica. La misma permite la detección, en un micros-
copio de fluorescencia de secuencias de ADN
empleando una sonda, fragmento de ADN, mar-
cada con un fluorocromo determinado.
La técnica de hibridación in situ fue desarro-
llada primeramente con sondas radiactivas por
Gall y Pardue en 1969, las que posteriormente
fueron reemplazadas por sondas marcadas con
fluorocromos (FISH) 21,22.
En un comienzo la técnica de hibridación in
situ se empleó para mapear genes en cromoso-
mas humanos 23. En 1985 se localizó la primera
secuencia, simple copia, de un gen humano “tiro-
globulina”, en una región cromosómica emplean-
do una sonda no radiactiva 24. A partir del proyec-
to del genoma humano se han clonado y mapea-
do muchos segmentos de ADN de secuencia
única disponibles para fines diagnósticos 25.
La alta sensibilidad y especificidad del FISH y
la rapidez de los ensayos han hecho de esta téc-
nica una importante estrategia diagnóstica con
numerosas aplicaciones 26.
En 1996 dos grupos independientes desarro-
llaron técnicas derivadas del FISH, como el cario-
tipo espectral (spectral karyotype, SKY) y multi-
FISH (M-FISH) que permiten identificar cada cro-
mosoma con un color diferente 27,28.
La alta complejidad y heterogeneidad de los
cariotipos de algunos cánceres y fundamental-
mente la dificultad para obtener buenas prepara-
ciones cromosómicas en los tumores sólidos lle-
varon en 1992 al desarrollo de otra técnica deri-
vada de FISH, hibridación genómica comparativa
(comparative genomic hybridization, CGH), que
permite la detección de desbalances genómicos,
sin la necesidad de tener células en cultivo de la
muestra a investigar 29.
Finalmente, el gran avance de los últimos años
ha sido la técnica de array CGH (aCGH) en la que
los cromosomas metafásicos son reemplazados
por un array de miles de clones que contienen
segmentos del genoma humano y que proporcio-
nan valiosa información de las pérdidas y ganan-
cias de material genómico con alto grado de sen-
sibilidad 30,31.
Snijders y col. desarrollaron uno de los prime-
ros arrays usando 2400 cromosomas artificiales de
bacteria (bacterial artificial chromosomes, BACS)
para escanear alteraciones en el número de copias
a lo largo del genoma 32.
Cabe destacar que el desarrollo de la
Citogenética molecular ha sido paralelo al de la
microscopía con innovaciones en la microscopía
confocal y epifluorescente, así como el desarro-
llo de componentes ópticos (lentes, filtros, cap-
tores) que mejoraron de manera decisiva el
desempeño de los clásicos microscopios de luz
trasmitida. A esto se sumó obviamente el aporte
innegable de la era computarizada.
OBJETIVOS
El objetivo del presente trabajo es el de:
1. realizar una revisión de las principales técnicas
citogenéticas de diagnóstico desde sus co -
mienzos hasta nuestros días.
2. describir la contribución de la citogenética en
pediatría fundamentalmente al diagnóstico del
RM y/o MCM y muy brevemente al campo de
la hematooncología pediátrica.
TECNICAS DE CITOGENETICA CLASICA
BANDEO G
El estudio citogenético se realiza a partir de
un cultivo de linfocitos de sangre periférica pero
puede también realizarse en otros tejidos. En
pacientes con enfermedades hemato-oncológi-
cas se realiza en médula ósea para detectar AC
adquiridas o clonales. (Figura 1).
La técnica de bandeo G se emplea de rutina
para el diagnóstico de AC tanto numéricas como
estructurales. Es una técnica sencilla que se rea-
liza mediante una digestión enzimática y posterior
coloración con Giemsa.
Avances en Citogenética 413
 http://www.revistainfantil.org.ar
Se obtienen bandas claras y oscuras con un
patrón diferente para cada cromosoma y con
distinto nivel de resolución dependiendo que el
procedimiento empleado sea el estándar o AR
(Figura 2).
Los cromosomas se agrupan de a pares con-
formando el cariotipo el que actualmente se obtie-
ne empleando equipos computarizados adapta-
dos al microscopio que disponen del software
adecuado (Figura 3).
La técnica de AR o bandeo AR se obtiene sin-
cronizando el cultivo de linfocitos para obtener
cromosomas en estadío de prometafase con un
incremento considerable en el número de bandas
de 400-550 con un nivel de resolución de 5 mega-
bases (Mb) en la técnica estándar a 750-1000 con
nivel de resolución de 3 a 5Mb en AR (Figura 4).
Se recomienda que los estudios citogenéticos
de rutina en sangre periférica en pacientes con
RM con o sin retraso en el desarrollo se realicen
con un nivel no menor de 550 bandas.
La guía de procedimientos del ‘American
College of Medical Genetics” recomienda realizar
estudios de AR en aquellos casos en que se sos-
peche un síndrome específico que involucre una
micro AC que requiera un nivel de resolución por
encima de 650 bandas 33.
El bandeo G ha permitido establecer que 1 de
cada 150 recién nacidos vivos, 50% de los abor-
tos del primer trimestre y 20% del segundo, 20%
de los ovocitos, 4% de los espermatozoides, 10%
de las concepciones, 8% de los mortinatos y 4%
de las parejas infértiles tienen una AC 34.
En nuestro país el primer trabajo de AC en
recién nacidos vivos con RM detectó un 20% de
AC 35.
En una revisión realizada en nuestro laborato-
rio sobre un total de 9500 niños con RM mental
y/o MC el 20% presentaban una AC en linfocitos
de sangre periférica 36.
Los porcentajes varían de acuerdo a la selec-
ción de los pacientes y a las técnicas empleadas.
Eventualmente pueden realizarse algunas de
las otras técnicas de bandeo previamente men-
cionadas como complemento del bandeo G, aun-
que en la actualidad con el advenimiento de las
técnicas de citogenética molecular muchas de
ellas están en desuso.
En enfermedades hemato-oncológicas el estu-
dio cromosómico en medula ósea permite detec-
tar AC adquiridas. Algunas de estas AC son recu-
rrentes y están asociadas a valor diagnóstico y
pronóstico, definiendo en muchos casos el trata-
miento a seguir. Por lo tanto, el estudio cromo-
sómico es una herramienta de diagnóstico muy
valiosa para el médico hematólogo
El nivel de resolución en médula ósea es de
400 bandas y excepcionalmente pueden obte-
414 Medicina Infantil Vol. XVII N° 4 Diciembre 2010
nerse cromosomas con un mayor nivel de reso-
lución modificando la técnica estándar.
Empleando sólo técnica de bandeo G, se ha
detectado que el 80% de las leucemias mieloi-
des y el 55% al 90% de las leucemias linfoblás-
ticas en pediatría, dependiendo de las series, tie-
nen una AC 37,38.
CITOGENETICA MOLECULAR
FISH
La hibridación in situ con fluorescencia se basa
en la propiedad de complementariedad de la doble
cadena de ADN.
La técnica es rápida y sencilla. La muestra a
investigar, ya sean cromosomas metafásicos o
núcleos interfásicos, se desnaturaliza, permitien-
do que las hebras complementarias del ADN se
separen. Posteriormente se agrega la sonda de
interés, marcada con un fluorocromo, que se unirá
al ADN de la muestra en el sitio complementario
donde se volverá a formar la doble hélice, proce-
so que se llama hibridación. La misma se visua-
liza en un microscopio de fluorescencia, los que
actualmente se adaptan a equipos computariza-
dos analizadores de imágenes que permiten cap-
turar las imágenes y mejorar la calidad de las mis-
mas (Figura 5).
La gran ventaja de esta técnica es que la
secuencia a investigar puede verse tanto en meta-
fase como en interfase lo que hace del FISH una
valiosa arma de diagnóstico en aquellos casos en
que no se dispone de mitosis o cuando quiere
realizarse el contaje de un gran número de célu-
las. Es utilizada para detectar rearreglos cromo-
sómicos crípticos, microdeleciones, microdu-
plicaciones, para identificar material extra de ori-
gen desconocido y para clarificar rearreglos com-
plejos. La desventaja del FISH es que sólo detec-
ta aquello que se está buscando sin dar informa-
ción del resto del genoma.
La técnica de FISH puede realizarse en dife-
rentes tejidos por ejemplo en extendidos de la
mucosa bucal resultando en una técnica rápida y
no invasiva en aquellos casos en que por dife-
rentes razones debe estudiarse otro tejido diferente
a sangre periférica. El tamaño de las sondas que
se emplean es variable y actualmente pueden
tener un tamaño tan pequeño como 1 kilobase
(kb).
En menos de 15 años la sensibilidad del FISH
ha incrementado en unas 10.000 veces. Las son-
das pueden adquirirse comercialmente o fabri-
carse en el laboratorio empleando BACS que son
vectores utilizados para clonar segmentos de ADN.
Este ha sido tal vez uno de los mayores logros de
la técnica ya que permite precisar los segmentos
involucrados en las diferentes AC estructurales.
Es importante resaltar que la sonda se selec-
http://www.revistainfantil.org.ar
ciona en función del diagnóstico clínico presun-
tivo o para clarificar los hallazgos citogenéticos
previos. Se pueden utilizar sondas centroméricas
(marcan únicamente los centrómeros), de pintado
cromosómico (marcan todo el cromosoma), de
secuencia específica de locus (secuencia única)
y subteloméricas (que marcan las regiones próxi-
mas a los telómeros).
Las sondas centroméricas identifican los cen-
trómeros de los cromosomas. Son ampliamente
utilizadas para detectar AC numéricas tanto en
metafases como en núcleos interfásicos.
Las sondas específicas de locus o de secuen-
cia única permiten detectar rearreglos cromosó-
micos. Se conocen como sondas LSI y tienen un
tamaño que varía desde 1kb hasta 1Mb y sirven
para detectar deleciones o duplicaciones. Gene -
ralmente se emplea una sonda control en el mismo
cromosoma que contiene la secuencia a testear.
El número de síndromes de microdeleción y
microduplicación detectados por FISH, emplean-
do sondas específicas de locus, ha aumentado
considerablemente en los últimos años. Algunos
de los síndromes que pueden diagnosticarse inclu-
yen: Deleción. 1p, Wolf-Hirschhorn, Cri du Chat,
Sotos, Williams, Saethre Chotzen, CHARGE,
Langer Giedion, Di George II, Pallister Killiam,
Prader Willi/ Angelman, Rubinstein Taybi, Miller
Decker, Smith Magenis, Di George/VCFS, Defi -
ciencia de Sulfatasa Esteroide, Distrofia Muscular
de Duchenne/Becker, Cornelia de Lange, Beckwith
Wiedemann y Charcot-Marie-Tooth. Cabe aclarar
que no todas las sondas se disponen en forma
comercial 3.
Actualmente muchos de estos síndromes son
diagnosticados por la técnica de MLPA (Multiplex
Ligation-dependent Probe Amplification) que no
será descripta en esta revisión ya que es una téc-
nica de biología molecular 39.
La técnica de FISH es también útil para detec-
tar translocaciones en interfase. Rowley y
Tkachnuk desarrollaron una estrategia para iden-
tificar traslocaciones en interfase empleando son-
das de secuencia única40,41. Para ese objetivo exis-
ten distintos tipos de FISH: de simple fusión, señal
extra, de doble fusión y separación de separa-
ción de señal.
Las sondas de pintado se corresponden con un
determinado cromosoma y permiten detectar AC
estructurales y numéricas que afecten a ese cro-
mosoma, interpretar AC complejas e identificar
cromosomas marcadores.
Finalmente las sondas subteloméricas con-
tienen secuencias específicas de ADN que se
encuentran aproximadamente a 100-300 kb del
extremo del cromosoma y se utilizan en la iden-
tificación de deleciones y rearreglos teloméricos
submicroscópicos.
Las sondas subteloméricas identifican las regio-
nes subtelómericas de ambos brazos de los cro-
mosomas. Estas regiones son una parte intere-
sante del genoma porque son regiones ricas en
genes y a menudo están involucradas en rearre-
glos cromosómicos 42.
La mayoría de las AC que involucran a estas
regiones son difíciles de detectar por técnicas
citogenéticas convencionales, ya que se corres-
ponden con bandas G claras, por eso el FISH con
sondas subteloméricas es una herramienta valio-
sa para poder detectar AC en dichas regiones.
Se ha comunicado que la frecuencia de AC
subteloméricas en RM varía de un 4% a un 35%
en casos de RM idiopático dependiendo del grado
de RM, selección de los pacientes y calidad y
nivel de resolución de los cromosomas estudiados.
Se estima que la frecuencia es de 6 - 7% y de
0,5 - 1% en individuos con retardo mental seve-
ro y leve respectivamente 43-47.
M-FISH y SKY
Las técnicas de M-FISH y SKY permiten visua-
lizar todos los cromosomas, con diferentes colo-
res, en un único ensayo de FISH hibridando las
metafases con un cóctel de 24 sondas de pinta-
do. Las diferencias entre ambas radican solamente
en el equipamiento empleado para realizarlas 27,28 .
El cariotipo espectral es muy útil en neopla-
sias hematológicas y en tumores sólidos para cla-
rificar rearreglos complejos y para identificar cro-
mosomas marcadores extras.
Sin embargo, no permite detectar rearreglos
intracromosómicos, como inversiones, delecio-
nes y duplicaciones ya que en ningún caso se
modifica el color del cromosoma anormal. Tam -
poco pueden precisarse los puntos de ruptura de
las AC ni determinar a qué región del cromosoma
pertenecen los cromosomas marcadores.
La sensibilidad de la técnica es de 1-2.6 Mb.
Su alto costo, la falta de equipamiento ade-
cuado y lo laborioso de la técnica, hace que no
se realice en muchos centros del mundo.
CGH
Esta metodología derivada del FISH consiste
en la hibridación simultánea de dos ADN, tumo-
ral y control, marcados con diferentes fluorocro-
mos sobre una preparación cromosómica normal.
Se marca el ADN del tumor con un fluorocromo
verde y un ADN normal con un fluorocromo rojo.
Ambos en igualdad de proporciones, se hibridan
sobre los cromosomas metafásicos normales. Se
produce una reacción por competencia donde si
la cantidad de ADN es similar (marcas rojas y ver-
des son equitativas) el color resultante es amari-
llo. Sin embargo en presencia de deleciones o
duplicaciones de material tumoral habrá una mayor
Avances en Citogenética 415
 http://www.revistainfantil.org.ar
proporción de color rojo o verde respectivamen-
te (Figura 12).
La resolución de la técnica es de 2-10 Mb.
La visualización de esta técnica se realiza median-
te un software adecuado donde se observan las
ganancias y pérdidas comparando las desviacio-
nes de señal con respecto a un valor estándar.
La ventaja es que no necesita cromosomas meta-
fásicos pero sin embargo tiene la gran desventa-
ja de no dar información de AC balanceadas.
La capacidad para detectar AC en mosaico, no
presente en todas las células, dependerá de la
proporción de las células anormales y del tama-
ño del cromosoma marcador extra.
Esta técnica no se utiliza actualmente y ha sido
reemplazada por la técnica de aCGH.
aCGH
La hibridación genómica comparativa emple-
ando arrays, o cariotipo molecular como se la ha
denominado, es una técnica que ha revoluciona-
do la citogenética clínica.
Permite examinar todo el genoma en un sim-
ple chip con una gran resolución, 10 veces mayor
que los cromosomas prometafásicos de 750 ban-
das, detectando ganancias y pérdidas de material
cromosómico.
El principio de aCGH es similar al de CGH pero
la hibridación se realiza en una matriz de arrays
inmobilizada en lugar de extendidos cromosómi-
cos (Figura 10). Posteriormente los arrays son
escaneados y los datos analizados con un soft-
ware adecuado que permite detectar las diferen-
cias en el número de copias entre el ADN del
paciente y el ADN control. En realidad es una téc-
nica enteramente molecular, con aplicación en
citogenética y puede considerarse un “hibrido”
de ambas para la cual deben trabajar expertos de
las dos disciplinas 29,30.
Los dos grupos de plataformas de arrays usa-
dos en clínica son aCGH y polimorfismos de sim-
ple copia (SNP) que miden directamente la dife-
rencia en el número de copias entre el ADN del
paciente y el ADN normal de referencia.
El aCGH contiene miles de sondas fabricadas
a partir de BACs o PACs (P1derived Artificial
Chromosomes) o sondas de oligonucleótidos sin-
tetizados in vitro. Esas sondas pueden estar enri-
quecidas por genes conocidos o por regiones cro-
mosómicas de síndromes conocidos.
La mayoría de las plataformas de aCGH son
diseñadas para detectar aneuploidias, síndromes
de microdeleción y microduplicación, rearreglos
subteloméricos y otras AC desbalanceadas.
Las variaciones en el número de copias (copy-
number variants, CNVs) se han detectado en indi-
viduos con RM, retraso en el desarrollo, autismo
y anomalías congénitas múltiples de causa des-
416 Medicina Infantil Vol. XVII N° 4 Diciembre 2010
conocida. El tamaño de las mismas varía desde
1Kb a varias Mb. Cuando se las encuentra de
novo se las considera patogénicas aunque en rea-
lidad deben ser interpretadas con precaución. Se
han comunicado más de 5000 CNVs en el data-
base de Toronto y muchas están asociadas a dife-
rentes enfermedades 48.
Sin embargo también se han descripto en indi-
viduos fenotípicamente normales, heredadas de
sus padres y algunas de ellas ocurren frecuen-
temente en la población general.
Estudios recientes han demostrado que el
18,6% de los pacientes con RM y/o dismorfias y
cariotipo normal presentaban desbalances cro-
mosómicos detectados por esta metodología 49.
El uso de aCGH aplicado a las regiones sub-
teloméricas aumenta considerablemente la detec-
ción de desbalances submicroscópicos (hasta
10Mb). En un estudio realizado sobre un total de
5380 pacientes con RM y/o dismorfias se iden-
tificaron 4,4% de rearreglos subteloméricos que
involucraban deleciones, duplicaciones, traslo-
caciones desbalanceadas y rearreglos comple-
jos 50.
En los últimos años se han definido varios sín-
dromes empleando aCGH en los que las altera-
ciones genómicas se corresponden con fenotipos
que son en su mayoría moderados y muchas veces
variables o no específicos 51.
También se han detectado desbalances genó-
micos en individuos con cariotipos aparentemente
balanceados tanto de novo como familiares 52.
Recientemente se ha realizado un consenso
sobre el uso de aCGH como herramienta en el
diagnóstico clínico de individuos con trastornos
en el desarrollo o anomalías congénitas sobre un
total de 21.698 pacientes provenientes de 33 estu-
dios distintos. De este trabajo surgieron las
siguientes recomendaciones:
1. se debe realizar aCGH como primer estudio
diagnóstico en pacientes con RM, retraso en
el desarrollo, autismo y MCM de causa des-
conocida, considerando que tiene además una
ventaja diagnostica de 15 -20 % más que el
bandeo G,
2. el bandeo G sigue siendo prioritario en pacien-
tes con Sindrome de Down, y otros síndromes
cromosómicos clínicamente reconocidos,
3. no detecta mosaicismos bajos ni AC balancea-
das, pero como estos sólo contribuyen en un 1%
a la etiología del de RM, el aCGH es la técnica
de elección para el estudio del retardo mental.
4. el bandeo G debería reservarse para pacientes
con abortos espontáneos, síndromes cromo-
sómicos reconocidos o historia familiar de AC53.
Sin embargo la falta de uniformidad en el
empleo de aCGH en términos de resolución y de
cobertura, ya sea de todo el genoma o de un locus
http://www.revistainfantil.org.ar
específico hace que aún no esté estandarizada
para uso clínico. Debe recopilarse más informa-
ción para comparar los resultados de diferentes
laboratorios en los cuales la interpretación de los
resultados es disímil. Ese es el desafío para los
próximos años.
Esta tecnología también es prometedora en la
investigación de enfermedades malignas, tanto
en diagnóstico, clasificación y pronóstico. Por
ejemplo, duplicaciones en tándem del gen FLT3
que ocurren en más de 15% de los pacientes
pediátricos con LMA pueden ser detectados por
aCGH. Sin embargo, la incapacidad para detec-
tar rearreglos balanceados es una limitación impor-
tante en este campo 54-55.
Resumiendo, en la Tabla 1 se indican las téc-
nicas citogenéticas aquí descriptas y sus aplica-
ciones, ventajas y desventajas.
Debe resaltarse que todas son complementa-
rias pero no excluyentes.
Es importante que el lector sepa que no todas
las técnicas descriptas en esta revisión se reali-
zan en la Argentina. Sólo en algunos laboratorios,
se realiza FISH con fines diagnósticos debido al
costo de reactivos y equipamiento. El cariotipo
espectral no se realiza en ningún laboratorio por
la misma razón.
Cabe aclarar que tampoco está implementa-
do en nuestro país el uso de FISH con BACS, lo
TABLA 1: TECNICAS CITOGENETICAS.
Técnicas Aplicaciones
Bandeo G Identificar anomalías cromosómicas
estructurales y numéricas.
Alta Identificar anomalías cromosómicas
resolución estructurales y numéricas
Precisar puntos de ruptura
FISH Determinar la presencia, número de
copias y localización de secuencias de
ADN
Multi FISH Detecta rearreglos cromosómicos com-
Cariotipo plejos que involucran más de un cro-
espectral mosoma e identifica cromosomas mar-
cadores
CGH Detecta pérdidas y ganancias de mate-
rial cromosómico
aCGH Detecta pérdidas y ganancias de
secuencias de ADN
que permitiría precisar las múltiples AC que que-
dan sin definir por no disponer de esta metodo-
logía.
Con respecto a la técnica de aCGH, que está
emergiendo como una valiosa herramienta en el
diagnóstico de desbalances genómicos, a pesar
de su alto costo sería muy importante que pudié-
ramos realizarla teniendo en cuenta que incre-
menta considerablemente la detección de des-
balances que son crípticos para otras técnicas.
En el campo de la hemato-oncología, que ame-
ritaría un capítulo aparte, cabe destacar que el
bandeo G y el FISH siguen siendo las técnicas de
elección, aún en laboratorios altamente especia-
lizados, pero se dispone de las otras técnicas, en
la mayoría de los casos para poder completar el
estudio o con fines de investigación.
Finalmente, la historia de algunos descubri-
mientos que llevaron a la Citogenética a estar
donde hoy está situada, nos permiten deducir
lógicamente que cada adelanto ha sido el pro-
ducto del trabajo incansable de sus descubrido-
res pero también de avances paralelos en otras
disciplinas, la microfotografía en el caso del tras-
cendental descubrimiento de Tjio y Levan y la
sofisticación de la microscopia de fluorescencia
y la computación en el caso de la Citogenética
Molecular.
Como hemos podido ver desde sus comien-
Ventajas Desventajas
Bajo costo Requiere células en división.
Pesquisa de todo el genoma Baja eficiencia en cariotipos complejos.
Bajo costo El análisis de todo el cariotipo es muy
Pesquisa de todo el genoma tedioso.
Su costo no es demasiado ele- Solo es informativa de la secuencia que se
vado. Es rápida y sencilla. desea investigar.
Se aplica a células en interfase
y en división.
Pesquisa de todo el genoma Es laboriosa y de alto costo.
Clarifica rearreglos cromosómi- Requiere células en división y de muy
cos complejos buena calidad.
No detecta anomalías cromosómicas intra-
cromosómicas
Pesquisa de todo el genoma No detecta anomalías cromosómicas balan-
No necesita células en cultivo. ceadas.
Pesquisa de todo el genoma Tanto el equipamiento como los reactivos
No necesita células en división son costosos.
Las AC que se detectan deben ser confir-
madas por FISH.
No detecta anomalías cromosómicas balan-
ceadas.
Avances en Citogenética 417
 http://www.revistainfantil.org.ar
zos hasta nuestros días, muchos han sido los
avances que nos permiten a los citogenetistas
trabajar en un mundo totalmente impensando hace
muchos años.
Espero que en un futuro no lejano podamos
ver como el avance a nivel mundial puede incor-
porarse a nuestro país. De esto dependerá que el
crecimiento que fue tan próspero en décadas
pasadas, pueda ser empleado por las nuevas
generaciones de citogenetistas a quienes les
queda el desafío de luchar por lograrlo, más allá
de los obstáculos.
AGRADECIMIENTOS Y RECONOCIMIENTO
A la Dra. Cristina Barreiro por su valioso aporte en
la revisión de este trabajo.
Al Dr. Jorge Herrera por sus comentarios.
A mis colaboradores, profesionales (Dr. He rrera,
Dr. Baialardo, Dra. Zelaya, Dra. Coccé), técnicos
(Alejandra Rampazzi, Cecilia Romero y Daniel Scheifer)
y becarios por su contribución al material fotográfi-
co de preparaciones cromosómicas realizadas en
nuestro laboratorio.
Finalmente quiero hacer un especial reconoci-
miento en este trabajo a mi maestro, el Dr. Roberto
Coco, quien es un pionero de la Cito genética en la
Argentina.
REFERENCIAS
1. Trask B. Human Cytogenetics: 46 chromosomes, 46 years and
counting. Human Genetics Disease 2002;3:769-78.
2. Smeets D. Historical prospective of human cytogenetics: from
microscope to microarryas. Clin Biochemis 2004;37;439-46.
3. Dave B., Sanger W. Role of cytogenetics in the diagnosis of
genetics imbalances, Semin Pediatr Neurol 2007;14:2-6.
4. Andrieux J. Array-CGH for routine diagnosis of cryptic chro-
mosomal imbalances. Pathologie Biologie 2008;56:368-74.
5. Edelmann L, Hirschhorn K. Clinical utility of array CGH for the
detection of chromosomal imbalances associated with mental
retardation and multiple congenital anomalies.Ann N Y Acad Sci
2009;1151:157-66.
6. Tjio JH, Levan A. The chromosome number in man. Hereditas
1956;42:1-6.
7. Ford CE, Hamerton JL. A colchicine, hypotonic citrate, squash
sequence for mammalian chromosomes. Stain Technol
1956;31:247-51.
8. Ford CE, Hamerton L. The chromosomes of man. Nature 1956 ;
178:1020-3.
9. Lejeune, J., Gautier, M. & Turpin, R. Etude des chromosomes
somatiques de neuf enfant mongoliens. Comptes Rendus
1956 ;248:1721-22.
10. Ford, C. E., Jones, K. W., Polani, P. E., De Almeida, J. C.& Briggs,
J. H. A sex-chromosome anomaly in a case of gonadal dysge-
nesis (Turner’s syndrome). Lancet I 1959;i:711–13.
11 Jacobs, P. A. & Strong, J. A. A case of human intersexuality
having a possible XXY sex-determining mechanism. Nature
1959;183: 302–3.
12. Lejeune J y col. Trois cas de deletion partielle du bras court d’un
chromosome 5. C. R. Acad Sci (Paris) 1963;257,3098-12.
13. Caspersson T, Zech L, Johansson C. Differential binding of alky-
lating fluorochromes in human chromosomes.Exp Cell Res
1970;60:315-19.
14. Rooney DE, editor. Human cytogentics: constitutional analy-
sis.New York: Oxford Univ.Press 2001;99-127.
15. Nowel PC and Hungerford DA. A minute chromosome in human
chronic granulocytic leukemia. Science 1960;132:1497-1501.
16. Rowley, J. D. A new consistent chromosomal abnormality in
chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluo-
rescence and Giemsa staining. Nature 1973;243, 290–93.
17. Seabright M. A rapid banding technique for human chromoso-
mes.Lancet.1971;2:971-72.
418 Medicina Infantil Vol. XVII N° 4 Diciembre 2010
18. Paris Conference Standarization in Human Cytogenetics Birth
Defects: Original. 1971.
19. Yunis JJ. High resolution of human chromosomes. Science 1976;
26;191:1268-70.
20. Ledbetter DH, Riccardi VM, Airhart SD et al. Deletions of chro-
mosome 15 as a cause of the Prader-Willi syndrome. N Engl J
Med 1981;5;304:325-9.
21. Gall, J. G., & Pardue, M. L. Formation and detection of RNA-DNA
hybrid molecules in cytological preparations. Proceedings of
the National Academy of Sciences 1969;63, 378–83.
22. Rudkin, G. T., & Stollar, B. D. High resolution of DNA-RNA hybrids
in situ by indirect immunofluorescence. Nature 1977;265,472–74.
23. Langer-Safer PR, Levine M, Ward D. Immunological method for
mapping genes on Drosophila polytene chromosomes. Proc Natl
Acad Sci USA 1982;79:4381-85.
24. Landegent JE, Jansen in de Wal N, Van Omment G.-J. B † et al.
Chromosomal localization of a unique gene by non-autoradio-
graphic in situ hybridization. Nature 1985;317:175-77.
25. Cheung VG, Nowak N, Jang W et al. BAC Resource Consortium.
Integration of cytogenetic landmarks into the draft sequence of
the human genome. Nature 2001;409:953-58.
26. Bishop R. Applications of fluorescence in situ hybridization (FISH)
in detecting genetic aberrations of medical significance.
Bioscience Horizons 2010;3:85-95.
27. Speicher MR, Ballard SG, Ward DC: Kariotyping human chro-
mosomes by combinatorial multi-fluor FISH. Nat Genet
1996;12:368-75.
28. Shröck E, du Manoir S, Veldman T, Schoell B, Wienberg J,
Ferguson-Smith MA, Ning Y, et al: Multicolor spectral karioty-
ping of human chromosomes. Science 1996, 273: 494-97
29. Kallioniemi A, Kallioniemi OP, Sudar D et al. Comparative geno-
mic hybridization for molecular cytogenetic analysis of solid
tumors. Science 1992;258:818-21.
30. Solinas-Toldo S, Lampel S, Stilgenbauer S, et al. Matrixbased
comparative genomic hybridization: biochips to screen for geno-
mic imbalances. Genes Chromosomes Cancer 1997;20:399-
407.
31. Pinkel D, Segraves R, Sudar D et al. High resolution analysis of
DNA copy number variation using comparative genomic hybri-
dization to microarrays. Nat Genet 1998; 20:207-11.
32. Snijders AM, Nowak N, Segraves R et al. Assembly of microa-
rrays for genome-wide measurement of DNA copy number. Nat
Genet 2001;29:263-64.
33. Shaffer LG. American College of Medical Genetics guideline on
the cytogenetic evaluation of the individual with developmental
delay or mental retardation. American College of Medical Genetics
Professional Practice and Guidelines. Committee.Genet Med
2005;9:650-54.
34. Queisser-Luft A, Stolz G, Wiesel A et al. Malformations in new-
born: results based on 30,940 infants and fetuses from the Mainz
congenital birth defect monitoring system (1990-1998). Arch
Gynecol Obstet 2002;266:163-67.
35. Coco R, Penchaszadeh VB. Cytogenetic findings in 200 children
with mental retardation and multiple congenital anomalies of
unknown cause. Am J Med Genet 1982;12:155-73.
36. Gallego M, Herrera J, Baialardo E y col. Hallazgos citogenéticos
en 8808 niños con malformaciones congénitas múltiples con o
sin RM .VI Jornadas Multidisciplinarias Hospital de Pediatría”
Prof. Dr. Juan P. Garrahan”. Libro de Actas P42, 2005.
37. Harrison CJ. The detection and significance of chromosomal
abnormalities in childhood acute lymphoblastic leukaemia. Blood
Rev 2001;15:49-59.
38. Harrison CJ, Hills RK, Moorman AV et al. Cytogenetics of child-
hood acute myeloid leukemia: United Kingdom Medical Research
Council Treatment trials AML 10 and 12. J Clin Oncol
2010;28:2674-81.
39. Kearney L. Multiplex-FISH (M-FISH): technique, developments
and applications. Cytogenet Gen Res 2006;114:189–98.
40. Rowley JD, Diaz MO, Espinosa R 3rd et al. Mapping chromoso-
me band 11q23 in human acute leukemia with biotinylated pro-
bes: identification of 11q23 translocation breakpoints with a
yeast artificial chromosome. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990;87:
9358-62.
41. Tkachuk DC, Westbrook CA, Andreeff M et al. Detection of bcr-
abl fusion in chronic myelogeneous leukemia by in situ hybridi-
zation. Science 1990; 26;250:559-62.
42. Saccone S, De Sario A, Della Valle G et al. Proc Natl Acad Sci U
S A.The highest gene concentrations in the human genome are in
telomeric bands of metaphase chromosomes 1992; 89: 4913-917.
http://www.revistainfantil.org.ar
43. Flint J, Wilkie AO, Buckle VJ et al. The detection of subtelome-
ric chromosomal rearrangements in idiopathic mental retarda-
tion.Nat Genet 1995; 9:132-40.
44. Knight SJL, Flint J. Perfect ending: a review of subtelomeric pro-
bes and their use in clinical diagnosis. J Med Genet 2000;37:401-
9.
45. de Vries BBA, White SM, Knight SJL et al. Clinical studies on
submicroscopic subtelomeric rearrangments: a checklist. J Med
Genet 2001;38:145-50.
46. Rossi E, Piccini F, Zollino M et al. Cryptic telomeric rearrangments
in subjets with mental retardation associated with dysmorphysm
and congenital malformation. J Med Genet 2001;38:417-20.
47. Anderlid BM, Schoumans J, Ameren G et al. Subtelomeric rea-
rrangments detected in patients with idiopathic mental retar-
dation. Am J Med Genet 2002;107:275-84.
48 . Nordgren A. Hidden aberrations diagnosed by interphase fluo-
rescence in situ hybridisation and spectral karyotyping in child-
hood acute lymphoblastic leukaemia. Leuk Lymphoma
2003;44:2039-53.
49. Li M, Andersson H. Clinical application of microarray-Based
molecular cytogenetics: An emerging new era of genomic medi-
cine. The J of Pediatr 2009;311-17.
Figura 1: Distintas etapas del cultivo celular.
Figura 2: Ideograma
del cromosoma 1
mostrando el distin-
to nivel de resolu-
ción de bandas en
la parte superior.
50. Siggberg L, Ala-Mello S, Jaakkola E et al. Array CGH in mole-
cular diagnosis of mental retardation - A study of 150 Finnish
patients. Am J Med Genet A 2010;1398-410.
51. Shao L, Shaw CA, Lu XY et al. Identification of chromosome
abnormalities in subtelomeric regions by microarray analysis: a
study of 5,380 cases. Am J Med Genet A 2008;1;2242-51.
52. Sismani C, Kitsiou-Tzeli S, Ioannides M et al. Cryptic genomic
imbalances in patients with de novo or familial apparently balan-
ced translocations and abnormal phenotype. Mol Cytogenet
2008;1:1-9.
53. Miller DT, Adam MP, Aradhya S et al. Consensus statement:
chromosomal microarray is a first-tier clinical diagnostic test
for individuals with developmental disabilities or congenital ano-
malies. Am J Hum Genet 2010;86;749-64.
54. Kearney L, Horsley SW. Molecular cytogenetics in haematological
malignancy: current technology and future prospects. Mini
Review. Chromosoma 2005;114:286.
55. Marwan Shinawi and Sau Wai Cheung. The array CGH and its
clinical applications. DDiscovery Today, 13, Numbers 2008;
17/180.
Figura 3: Cariotipo femenino bandeado G obtenido por téc-
nica estándar.
Figura 4: Cromosomas prometafásicos obtenidos por téc-
nica de AR. Las flechas señalan el cromosoma 6 normal
(negro) y su homólogo con deleción del brazo corto (rojo).
Avances en Citogenética 419
 http://www.revistainfantil.org.ar

Figura 5: Etapas de la
hibridación in situ con
fluorescencia.

Figura 6: Núcleos interfásicos mostrando señales verdes y

rojas correspondientes a los centrómeros de los cromoso-
mas X e Y respectivamente.

Figura 7: Metafase hibridada con sonda de secuencia única

para detectar microdeleción del cromosoma 22. Se obser-
va un cromosoma 22 normal en la parte superior y otro
delecionado en la inferior con ausencia de señal roja, región
crítica para Síndrome de microdeleción 22. Se emplea una
sonda control verde visible en otra región del mismo cro-
mosoma.

420 Medicina Infantil Vol. XVII N° 4 Diciembre 2010

http://www.revistainfantil.org.ar

Figura 8: Métodos para la

detección de traslocaciones
e inversiones por FISH
Actualmente las más usadas
son las “doble fusión” y
“separación de señal” que
disminuyen considerable-
mente el número de falsos
positivos y son empleadas
para el diagnóstico de AC
recurrentes asociadas a leu-
cemias y linfomas.

Figura 8: Metafase hibridada con sonda de doble fusión

para el rearreglo BCL2/IGH producto de la t(14;18)(q32;q21).
Se observan las dos fusiones señaladas con flechas corres-
Figura 9: Metafase hibridada con sonda de separación de
pondientes a los derivados de la translocación (Gentileza
señal para el gen MLL ubicado en el 11q23. Se observa un
de la Dra. Irma Slavutsky).
cromosoma 11 normal (señal verde y roja juntas) y sepa-
ración de señal producto de una traslocación 1; 11 en los
derivados 1(rojo) y 11(verde).

Figura 10: Metafase hibridada con sondas de pintado para

los cromosomas 2 (rojo) y 18 (verde) mostrando una inser-
ción del cromosoma 18 en el cromosoma 2. Figura 11: Cariotipo espectral.

Avances en Citogenética 421

 http://www.revistainfantil.org.ar

Figura 11: Metafase hibridada con sonda subtelomérica para el brazo corto del cromo-
soma 8, mostrando presencia de señal en un cromosoma 8 y ausencia en su homólogo.

Figura 12: a) Metafase obtenida por CGH y su análisis correspondiente. b) aCGH Plataforma de arrays y cariotipo mole-
cular.

422 Medicina Infantil Vol. XVII N° 4 Diciembre 2010