CINÉTICA DE

CRECIMIENTO CELULAR
Crecimiento Celular

Aspectos fundamentales
Estequiométrico:
 la concentración final de células depende de la
concentración y composición del medio de cultivo.
 balance de materia y energía de los procesos de
crecimiento celular .

Cinético:
velocidad en la que se desarrolla el proceso

2
 Aspectos que intervienen en la interacción entre
las células y el medio ambiente a lo largo de su
crecimiento

Condiciones ambientales Población celular

(medio) nutrientes
multicomponente multicomponente
sustratos
reacciones en solución heterogeneidad en cada célula
equilibrio ácido-base. individual
cambio de las propiedades productos mutiples reacciones
reológicas mecanismos de control interno
multifásico (gas, líquido) adaptabilidad
calor variabilidad genética
distribución espacial no unifrome.

interacciones
mecánicas
Modelos de crecimiento celular

Modelos segregados

Modelos no segregados

Modelos estructurados

Modelos no estructurados
 No Estructurado Estructurado

Caso ideal
Multicomponente.
No
Descripción de las células
Segregado Un solo componente.
como promedio.
Descripción de las células
como promedio

Un solo componente. Multicomponente.

Segregado
Población celular Población celular
heterogénea. heterogénea.
Caso real
 Sistemas de cultivo

Discontinuo (Batch)

Continuo

Discontinuo alimentado (Fed-Batch)

Bioreactores: Tanque de agitación mecánica

45
 Cultivo Batch o Discontinuo

V constante fX

Xo So
Sf
Po

Pf
 Continuo

SR
Reservorio

FI = F S
FI
FS X

X
S
V constante S
P
P
Discontinuo alimentado (fed-
(fed-batch).

F, SR

X
VX
VF S≈0
V0 VP
 Discontinuo (batch).

Características

Tiempos cortos de procesos lo que permite trabajar

en condiciones asépticas, sobre todo cuando se trata
de medios de cultivos ricos en nutrientes.

Períodos muertos: lavado, esterilizado, etc.

Opera a baja densidad celular.

Las concentración de los distintos

componentes varía a lo largo del proceso.
Distintas fases en el crecimiento de un organismo
en un proceso en batch
 Discontinuo (batch).
Suponemos que las células crecen en condiciones homogéneas en cuanto a
transferencia de nutrientes (fte. de carbono, nitrógeno, minerales,
vitaminas, etc.)
Las concentraciones de nutrientes y de biomasa del cultivo varían a
través del tiempo.

El crecimiento de un microorganismo puede describirse a través de una

ecuación exponencial de acuerdo a:

n
Xn = Xo * 2 (1)

Xn = biomasa después de n generaciones

Xo = biomasa inicial
n = número de generaciones
 Discontinuo (batch).
También puede decirse que la biomasa se incrementará en dX en
un determinado intervalo de tiempo dt de acuerdo a la ecuación:

dX = Xo m (2)
dt
donde µ es la velocidad específica de crecimiento de un organismo
y tiene unidades de t-1 (min-1, h -1 o d-1).
la velocidad específica de crecimiento depende:
• características intrínsecas del organismo
• factores externos (fte. de carbono, O2, T, etc.)
Integrando la ecuación 2 se obtiene:
m t
Xt = Xo * e (3)

o bien

ln Xt = ln Xo + m *t (4)
Cálculo de parámetros cinéticos en cultivos en
batch

Graficando ln X vs. tiempo el cálculo de la recta de

regresión en la zona de crecimiento exponencial es
igual a m . También es posible calcular la fase lag
de acuerdo a lo que se describe en el gráfico.

Figura 2: Gráfica ln X vs. tiempo, calculo de m y de la fase lag

 Discontinuo (batch).

Otro parámetro importante a conocer en un proceso en

batch es el tiempo de duplicación de la biomasa (td),
por la ecuación 4 podemos reemplazar t = td y Xt=
2 Xo

ln 2Xo = ln Xo + m * td (5)

m = ln 2 = 0.693
(6)
td td

td = 0.693
(7)
m
 Fase Descripción µ
lag Las células se adaptan al nuevo µ≈0
ambiente

aceleración Comienza el crecimiento µ < µmax

exponencial Se alcanza la velocidad máxima de µ = µmax

crecimiento

desaceleración Crecimiento disminuye por falta de µ < µmax

nutrientes o inhibidores

estacionaria Se detiene el crecimiento µ=0

muerte Las células pierden viabilidad y se µ<0

lisan
 Influencia del substrato limitante en el
crecimiento microbiano

La biomasa final obtenida es un proceso de cultivo esta dada

por la relación de rendimiento:

ΔX
YX/S = (8)
ΔS

Yxs= gr. de peso seco de biomasa obtenida por gr. de

substrato consumido.
El primero en establecer una relación entre la
concentración de substrato limitante y la velocidad de
crecimiento fue Monod y hallo que se correspondía con
una hipérbola rectangular similar a la descripta por
Michaelis-Menten para un proceso enzimático
estableciendo la siguiente relación:

µmax s
µ= (9)
KS + s
Representación gráfica del modelo de
Monod de sustrato limitante
Donde µmax = es la máxima velocidad de crecimiento; s
es la concentración de substrato limitante y Ks=
constante de saturación de substrato y es igual a la
concentración de substrato que da una velocidad de
crecimiento de µmax /2.
Si reemplazamos la ecuación 9 dentro de la 2 queda:

dx
= Xo µ
µmax s dt
dx * Xo (10)
=
dt KS + s

Si s>> Ks, s/(Ks+s) tiende a uno entonces el organismo

crece a µmax conforme s tiende a Ks entonces s/(Ks+s)
tiende a cero reduciendo el crecimiento.
Energía de activación para el crecimiento
microbiano.
 Efecto de la temperatura sobre mm de un
cultivo aeróbico en glucosa de A. aerogenes
Cinética de crecimiento en cultivos con
plásmidos

Posibilidad de pérdida del plásmido

Mutación del plásmido

Diferencia de velocidad de crecimiento

entre población con y sin plásmidos
X+: población con plásmidos
X-: población sin plásmidos

dX + = (1-p) * X + * m +
dt

- + + - -
dX = p * X * m + X *m
dt

p: probabilidad de pérdida de plásmidos

 F = X+
X+ + X-

F: fracción de células con plásmidos.

F = 1- a -p
n( a + p - 1)
1- a -2 p

Donde

a = m -
n = m+ * t

m+ ln 2
 Relación de velocidad de crecimiento en
poblaciones libres y que portan plásmidos.
Fracción de la población que porta plásmidos en
un cultivo en batch después de 25 generaciones
 Otros modelos de crecimiento
El modelo logístico describe el crecimiento de una población al momento del
inicio del crecimiento de acuerdo a la siguiente ecuación:

m = m max * 1- X
[ Xf ]
al inicio X<<Xf y [1-X / Xf ] tiende a 1 entonces el organismo crece
a µmax en cambio cuando X = Xf [1-X / Xf ] tiende a 0 y dx/dt =0
entonces el crecimiento se detiene debido que la población llega a su
densidad máxima. Si queremos evaluar entonces la velocidad de consumo
de substrato reemplazamos por la ecuación 11 y queda:

m max * 1- X * X
ds = [ Xf ]
dt Yxs
 Fase lag

Aparte de la forma gráfica descripta para hallar la duración

de la fase lag, otros autores ha descripto otras formas
matemáticas como ser:

t lag = t- 2.3 * lg X / Xo
m max

y también puede modificarse la ecuación de Monod :

(-t/t lag )
m = m max * s 1- e
Ks + s
 Cálculo de parámetros cinéticos en
cultivos en batch
Graficando ln X vs tiempo el cálculo de la recta de
regresión en la zona de crecimiento exponencial es igual a µ.
También es posible calcular la fase lag de acuerdo a lo que se
describe en el gráfico.
 Cinética de muerte celular
La cinética de muerte celular puede describirse por la ecuación:

kD = - 1 dx
X dt

Y haciendo la corrección en la ecuación 3 que describe el

crecimiento de un microorganismo queda:

Xt = Xo e ( µ-kD ) t

El factor kD es importante en procesos como los de

degradación de efluentes, cuando se trabaja a bajas
velocidades de crecimiento cuando se usan inóculos de baja
viabilidad.
Modificaciones de las ecuaciones de Monod
calculando la fase lag y la velocidad de
muerte celular
 Velocidad de consumo de substrato
Un incremento de biomasa dx se deberá a consumo ds y
esa relación esta dada por la formula de rendimiento
Yxs = dx
ds
entonces la velocidad de consumo de substrato si reemplazamos por la
ecuación 2 se transforma en:
- ds = m max * X dX = Xo m
dt Yxs dt
o bien
- ds = qs * X
dt

donde qS es la velocidad específica de consumo de substrato

qS tiene unidades de gr. de
qs = m
substrato limitante consumido
Yxs por gr. de biomasa por tiempo
(gr. sust * gr X -1 * h-1).
 Energía de mantenimiento: mS
En todo proceso además del substrato que se consume para crecimiento existe una
energía necesaria para el mantenimiento de la biomasa (mS), esta energía es utilizada
por la célula para, por ejemplo mantener gradientes, pH, turnover de macromoléculas,
etc. Se expresa en unidades de substrato consumido por gr. de X por tiempo. Podemos
decir entonces que en todo proceso parte de la fuente de carbono será consumida para
el crecimiento y parte para el mantenimiento. Por la estimación del coeficiente de
mantenimiento podemos recalcular lo que es el YXS para crecimiento (YXS verdadero)
del YXS observado por las siguientes ecuaciones, donde tenemos que la velocidad de
consumo de substrato va a tener dos términos uno para el crecimiento y otro para el
mantenimiento:

ds = ds + ds
dt dt M dt G

ds
consumo de substrato para mantenimiento
dt M

ds
consumo de substrato para crecimiento
dt G
Formación de Productos
Productos de bajo peso molecular

Productos de alto peso molecular

1) Componentes estructurales.
2) Enzimas (intra o extracelulares).
 Clasificación de los productos de fermentación
de bajo peso molecular
Productos directamente asociados con la generación de energia
en la célula (asociados al crecimiento): etanol, acido acético, ac.
láctico , productos de las fermentaciones anaeróbicas.

Productos indirectamente asociados con la generación de

energía (semiasociados al crecimiento):, aminoacidos,
nucleótidos.

Productos cuya síntesis no está claramente ligada directa o

indirectamente a la generación de energía (no asociados al
crecimiento): antibioticos, vitaminas.
 Formación de productos

1 Asociado al crecimiento
2 Semiasociado al crecimiento
3 No asociado al crecimiento

X( )
P(---)

Tiempo Tiempo Tiempo

 Cinética formación de productos

Básicamente pueden describirse tres tipos de procesos

con respecto a la formación de producto :
asociados al crecimiento
parcialmente asociados
no asociados al crecimiento

A continuación se describe tres fórmulas de rendimiento de

importancia: producción de producto en función del sustrato

ΔP
YP/S =
ΔS
 Cinética formación de productos

Y PX = Y PS producción de producto en función de la

Yxs biomasa

Es también posible formular la ecuación de formación de producto a

través del tiempo según:

dp = a * dx + b * X
dt dt

donde a es una constante asociada al crecimiento y b es una constante

que no esta asociada al crecimiento. Y también podemos definir qP s
decir la velocidad específica de producción del producto

qP = Y PX * m
Distintos Tipos de cinética de
formación de productos
Productividad de una fermentación en batch

Qp o P = X
t

t = 1 * ln X + t lag + t est + tlim

m max Xo
Medidas de Performance de un Bioproceso

Productividad
mg / gr biomasa * h
mg / L * h
Mas importante porque describe cuanto tiempo puede durar el
bioproceso

Máxima Concentración de Producto

mg / L
(importante cuando el costo de la recuperación y purificación del
producto representa un porcentaje alto en el costo total del
bioproceso)
Rendimiento de Producto
gr de producto / gr de substrato
(importante cuando el costo nutriente representa un porcentaje
alto en el costo total del bioproceso, no muy usual)
Inhibición del crecimiento

Alta concentración de sustrato y/o

productos, cambios en las propiedades
fisico-químicas del medio :presión
osmótica, fuerza iónica, constante
dieléctrica, y actividad de solutos, pueden
alterar la fluidez de las membranas.
Posibles mecanismos de la acción de
inhibidores

Alteración de permeabilidad celular

Alteración de la actividad de las enzimas
Disociación de agregados enzimáticos
Afecta la síntesis de enzimas
Influencia en la actividad funcional de las
células
 Otros modelos

Inhibición por sustrato

Andrews y Noack 1
 = m
Ks + S + S2
Kis
Inhibición por producto
Jerusalimsky y Neronova

S Kip
 = m
Ks + S Kip + P
 Modificaciones del Modelo de Monod.
Inhibición por altas concentraciones de substrato

m = m max * s * 1
Ks + s (1+ (s / K is ))

donde Ki es la constante de inhibición .

Inhibición del crecimiento debido al producto

m = m max * s * K ip
Ks + s K ip + p

donde Ki,p es la constante de inhibición del producto y p es

igual a la concentración del producto
 Modificaciones del Modelo de Monod.
Modelo de inhibición del crecimiento debido al producto de Luong:

Pi n
m = m max * 1-
P i*

Donde Pi es la concentración de producto y Pi* es la concentración crítica de

producto en las cuales el crecimiento es cero. Y donde n es una constante que
surge de graficar (ver gráfico ):

ln 1- m = n lnP i - n lnP i *
m max

de no conocerse Pi* debe hallarse por prueba de ensayo y error para aquella
recta de regresión que mejor ajuste tenga donde la pendiente será igual a n .
 n ln Pi*
0

ln [ 1- µ/µmax]
n

-3

ln P
 Modificaciones del Modelo de Monod.

Otros modelos describen los casos para cuando se dan

múltiples inhibiciones de productos y substratos,

n n
m = m max * 1 - Ci * 1- Pi
C i* P i*