PRUEBAS CUALITATIVAS

PRUEBA DE MOLISH

P. DE BARFOED
P. DE BIAL:

En 1ml de sustancia problema

PRUEBA DE SELIWANOFF

En 1ml de sustancia problema

PRUEBA DE LUGOL

En 2ml de sustancia problema

PRUEBA DE BENEDICT

En 0.5 ml de sustancia problema:

PRUEBA DE FENILHIDRAZINA
En 2ml de sustancia problema:
HIDRÓLISIS ACIDA DE DISACARIDOS:

Tome dos tubos de ensayo y siga el procedimiento:

tubo Sln de disacárido V de la sln del disacárido HCl 1N (ml) H2O (ml)
(ml)
1 Lactosa 1 muestra problema 1 0
2 lactosa 1 muestra patrón 0 1
 LABORATORIO DE BIOQUIMICA
CATALISIS ENZIMATICA E INORGANICA – CINETICA DE LA HIDRÓLISIS ENZIMATICA DE LA UREA
DIAGRAMAS DE FLUJO
PRESENTADO POR:………………………………………………………………………………………………….

1. Catálisis enzimática e inorgánica

0.5 mL de
sangre al
10%

Rotular 3 tubos Comparar cada

de ensayo de 0.5 mL de Agregar 0.5 Observar la uno de los tubos y
iguales extracto de mL de H2O2 al intensidad de registrar el orden
Agregar papa 3% la reacción creciente de
dimensiones
reactividad
Pequeña
porcion de
MnO2

Realizar el procedimiento anterior para los siguientes casos:

- Colocando los tubos en agua a ebullición por 10min (esta vez, agregar 1mL de H2O2)
- Colocando los tubos en hielo por 10 min
- Agregando a cada tubo 5 gotas de NaCN (esta vez, agregar 1mL de H2O2)
2. Cinética de la hidrólisis enzimática de la urea

2.1 Determinación de la constante de Michelis – Menten

Preparar 100mL de soluciones de urea: 0.4%, 0.2%, 0.1%, 0.05%, 0.025%, 0.0125%

Agregar 40mL de Introducir el Agregar 50μL de Realizar las medidas

la solucion de urea electrodo de de conductividad
Agitación magnética ureasa en solución t = 100s
en un beaker de conductividad
t = 200s
100mL

Proceder igualmente
para las demás
soluciones de urea
2.2 Determinación de la inhibición del sustrato

Preparar 100mL de soluciones de urea: 1.6%, 0.8%, 0.4%, 0.2%, 0.1%, 0.05%, 0.025% y 0.0125%

Agregar 40mL de Introducir el Agregar 50μL de Realizar las medidas

la solucion de urea electrodo de de conductividad
Agitación magnética ureasa en solución t = 100s
en un beaker de conductividad
t = 200s
100mL

Proceder igualmente
para las demás
soluciones de urea

2.3 Envenenamiento de la enzima

Agregar 40mL de Introducir el Agregar 50μL de Realizar las medidas

la solucion de urea electrodo de de conductividad
Agitación magnética ureasa en solución t = 100s
en un beaker de conductividad
100mL
Pasados 5 minutos

Seguir realizando Agregar 1mL de

mediciones cada solución al 4% de
100s hasta 600s AgNO3
 1. Extracción de lactosa a partir de leche
Lentamente ≈ 2
5g de leche en Leche en mL de La mezcla
polvo en un 20mL de Sln hasta constantemente con
Depositar CH3COOH
beacker de 100mL Disolver agua caliente Calentar 55ºC Adicionar Agitar una varilla de vidrio

Filtrar

Mezcla en La mezcla fuertemente La mezcla con papel

caliente y Agitación y temperatura con una varilla de Al sobrenadante 0.75g filtro
Agregar
desechar el Filtrar en 55ºC por 15 min Mantener vidrio Agitar CaCO3
precipitado

Calentar

A la mezcla 10 mL Liquido Filtrado en

Filtrado a 55ºC de EtOH 95% y con papel un baño de
agitando y reducir el 1mL de La solución
0.04g CaCl filtro hielo agua nuevamente
volumen a la mitad Verter Filtrar Colocar Adicionar Filtrar
calientes

Agregar

Perlas de ebullición
 2. Preparación del extracto de frutas

Colocar Pulpa en el Liquido con Extracto de A 1mL de jugo

mortero La pulpa el embudo frutas 3mL de EtOH
Macerar Decantar Filtrar Adicionar

Centrifugar

La solución para
extraer la proteína
desnaturalizada
 3. Cromatografía
Extracto de
fruta

A d = 1,5 cm Espacio de 1cm

4ml de Lactosa del borde entre la muestra
Aplicar muestra Dejar
inferior de la y el patrón
placa
Soluciones patrón Verter
(Glc, F, lactosa,
sacarosa)
En la camara agregar
100mL de n-BuOH Luego agregar
– CH3COOH – H2O CH3COOH a la
La placa Con una línea (4:1:4) mezcla
totalmente a el frente de
37ºC Secar migración del Esperar 15
Marcar Colocar min
solvente
Observar Primero mezclar el
La lamina La lamina en la n-BuOH y H2O
por 1h Desarrollar cámara
Cromatograma con
lámpara UV

Revelar La placa con solución de La placa a Placa en

anilina – difenil amina – 100ºC por ≈ camara de Distancia de migración
Calentar Colocar Medir
acido fosforito (5:5:1) 10 min Yodo para calcular el Rf
 4. Determinación de la cantidad de lactosa en la leche

Filtrar La solucion La solución La lactosa La lactosa en

que contiene Lavar con EtOH al Secar completamente Pesar balanza
la lactosa 95% analítica

Determinar

El punto de fusión
de la lactosa
 LABORATORIO DE BIOQUIMICA
TRANSPORTE DE CARGA EN SISTEMAS BIOLOGICOS – IDENTIFICACION DE CUERPOS CETONICOS EN LA ORINA
PRESENTADO POR:………………….…………………………………….

1. TRANSPORTE DE CARGAS EN SISTEMAS BIOLOGICOS

 Obtención del extracto enzimático

Mantener en
Muestra de Macerar el Formar una hielo por 15 min
hígado libre de Con arena hígado en un Adicionando tres mezcla suave Transferir a un con agitación
sangre lavada mortero porciones de beacker ocasional
buffer

A 1600 RPM
Por 10 min
Rotularlo (*) y Centrifugar y
mantenerlo en tomar el
hielo sobrenadante
  Seguimiento de la reacción

Tubo1
(Control)

Por 10 min
Preparar Tubo2
tres tubos Con azul de
metileno Agregar Incubar a Agregar (*) y
0.1% succinato Por 10 min 37ºC Sin sacar adicionar
los tubos aceite vegetal
Tubo 3 Agregar del baño
malonato
Pasados 40 min

Observar y
comparar la
coloración
 2. IDENTIFICACION DE CUERPOS CETONICOS EN LA ORINA

 Determinación de acetona

5mL de Nitroprusiato de sodio Agregar Observar si se forma

orina Agregar al 5% en acido acético Por las amoniaco una anillo violeta (+)
al 50% paredes del
tubo

 Determinación de acido aceto acético

5mL de Gotas de cloruro ferrico

orina en presencia de acido Observar si se forma un
Agregar
acetoacetico color rojo – vino (+)

 Determinación de acido β-hidroxibutirico

Control
10mL agua + Calentar hasta Agregar 10mL
10mL orina Acidificar reducir el volumen de agua y dividir Realizar
con acido a la mitad en dos partes prueba de
acetico iguales Imbert
Prueba Agregar Baño
1mL maria
H2O2 5min y
enfriar