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2001
Dra.Patricia Venegas *
Introducción
Desde hace 100 años se conoce la participación de la oncogénesis en el cáncer humano. En 1960
la citogenética fue la primera herramienta que permitió identificar un marcador cromosómico en un
proceso maligno, tratándose del bien conocido cromosoma Filadelfia (Ph) en la leucemia
mielocítica crónica (LMC). En 1970 con el bandeo cromosómico se descubrió que el Ph era una
translocación eromosómica entre los brazos largos del cromosoma 9 y los brazos largos del
cromosoma 22. Sucesivamente se fueron reportando cambios cromosómicos asociados con varios
procesos malignos hematológicos.
La citogenética convencional (CC) es usada hoy en día como una llave de oro estándar y la técnica
FISH (fluorescense in situ hibridization), introducida por los años 80, logró ser una técnica
molecular complementaria para la CC que permitió obtener nueva e importante información
genética (3), su utilización en el diagnóstico y pronóstico de la LMC continúa en constante
evolución (1).
Estas técnicas de citogenética molecular (CM) son una poderosa arma, muy sensible y que pueden
ser aplicadas con CC en el diagnóstico y en el manejo de pacientes con cáncer, su aplicación en el
diagnóstico prenatal es también de alto impacto (5).
En niños con leucemia linfocítica aguda (LLA), la citogenética juega un papel esencial para su
diagnóstico y pronóstico. La CC complementada con FISH es segura y altamente efectiva en la
detección de alteraciones cromosómicas involucradas en los procesos malignos. Las técnicas
moleculares son las adecuadas para la identificación precisa de los cambios genéticos específicos.
CC, FISH y análisis moleculares son los procesos complemetarios para la guía en el manejo de los
pacientes con LLA (4).
Además del FISH y el CC, técnicas de biología molecular, como el southem blot y el RT-PCR son
utilizadas para la detección de la t(9;22) o BCR/ABL (6).
El FISH es muy utilizado para monitorear respuesta al tratamiento en diferentes enfermedades
hematológicas y se recomienda su uso en el diagnóstico inicial y el seguimiento del paciente con
Ph+ especialmente después de transplante de médula ósea (8).
FISH está más dirigido en la detección de la enfermedad mínima residua (EMR) (2) y es importante
en casos donde falla la CC(10) y en donde existe un bajo porcentaje de células Ph+(8).
En niños con LLA el Ph+ se encuentra en un 5% de los pacientes y es de muy mal pronóstico, por
lo que su detección rápida y precisa es importante para ubicar al paciente en alto riesgo y dar una
terapia intensiva.
El FISH puede ser llevado a cabo tanto en metafase (C-FISH) como en Interfase (I-FISH)
1-Alteraciones numéricas
2-Duplicaciones específicas
3-Deleciones específicas
4-Rearreglos específicos
5-Mosaicismo
1- Marcadores cromosómicos
2- Material pegado a un cromosoma de origen desconocido
3-Rearreglo cromosómico
4-Sospecha de una ganancia o pérdida de un segmento cromosómico
5-Mosaicismo.
Materiales y Métodos
Se recibió una muestra de médula ósea de un adulto con leucemia mielocítica crónica donde la
citogenética fue inconclusa. La muestra fue llevada directamente a "shock hipotónico" para obtener
células en interfase y aplicar la técnica de I-FISH.
Las sondas fueron LSI BCR/ABL de la Compañía Vysis Inc, Downers Grove, IL.
Resultados
Las láminas hibridizadas fueron rastreadas con un microscopio de fluorescencia. Se analizaron 200
células en interfase. En la Figura 1 se ve la imagen de la célula positiva por mostrar las 3 señales
de fusión BCR/ABL: rojo-verde-amarillo capturada por un programa Vysis Quips FISH. La señal
roja y verde muestra los restantes cromosomas normales 9 y 22, respectivamente.
Discusión
La sonda LSI BCR/ABL aplicada en este estudio consistió de una mezcla de una sonda ABL
marcada directamente con el fluorocromo Spectrum Orange y una sonda BCR, marcada
directamente con el fluorocromo Spectrum Green. Esta sonda de doble color permitió detectar la
fusión de los genes BCR/ABL de la translocación 9;22, como se muestra en las células en
internase de la Figura 1. Este marcador cromosómico permitirá ubicar al paciente en un mejor
pronóstico, monitorear y detectar la enfermedad mínima residual en el transcurso de su
enfermedad.
El I-FISH llevado a cabo permitió detectar la fusión génica Major (M) Filadelfia en este paciente con
LMC, también puede ser usada para detectar el Minor(m) Filadelfia en LLA.
En núcleos normales en interfase, la sonda dará 4 señales(dos rojas y dos verdes) sobre ambos
cromosomas homólogos 9 y22 en 9q34 y 22q 11.2 respectivamente.
En la Figura 1 se muestra la señal positiva, los núcleos con la translocación muestran 3 señales,
uno rojo, uno verde y uno verde amarillento indicando la señal de fusión entre los genes BCR y
ABL, convirtiendo al paciente en LMC, Ph+, BCRJABL+.
Más de la mitad de los casos de LLA que presentaban cariotipo normal, guardaban aberraciones
cromosómicas que pudieron ser demostrados con I-FISH en y con Spectral Karyotyping (SKY) (9).
Resumen
El I-FISH, una técnica de citogenética molecular, es un nuevo test clínico que debe ser realizado y
estandarizado en todos los laboratorios de citogenética tanto en Genética clínica como
oncohematológica.
El cromosoma Filadelfia positivo en este paciente con LMC servirá de marcador cromosómico
favorable y permitirá el monitoreo y detección de la enfermedad mínima residual en el transcurso
de su enfermedad. Es importante también en casos donde el diagnóstico inicial es inconcluso.
Summary
I-FISH is a new elinical test to be set up and standardized in all clinical cytogenetics and onco-
hematology cytogenetics laboratory.
Philadelphia positive in this CML patient show an important favourable prognostic marker and will
be a reliable for monitoring this patient and for detection of the minimal residual disease. Also is
very important in cases when the initial diagnosis is inconclusive.
Bibliografía
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10- Wells S., Phillips C. & Farhi D.: Detection of BCRabl in acute leukemia by molecular and
cytogenetic methods. Mol. Diagn. 1:4,1996. [ Links ]
* Laboratorio Clínico, Sección de Citogenética. Hospital Nacional de Niños "Dr. Carlos Sáenz
Herrera".C.C.S.S, San José, Costa Rica.
Apdo. 1654-1000, San José, Costa Rica., San José, San José, CR, 10105-1000, (506)
2523-3600
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