Verificación microbiológica de desinfectantes de ambientes rangos permisibles de

recuento en placas.
Desde el inicio las organizaciones han buscado mejorar su competitividad implantando
programas y técnicas para el mejoramiento de la calidad de sus productos y servicios,
y la productividad de su operación. En el mundo actual donde el interés de los
laboratorios que prestan servicios es mantener controladas todas las variables que
interviene en el procedimiento y análisis de muestras, toma particular importancia la
verificación como una herramienta importante para asegurar la calidad y la trazabilidad
de cada uno de las variables que intervienen en el proceso de limpieza y desinfección,
garantizando el cumplimiento de las buenas prácticas de laboratorio. De ahí la
importancia de establecer métodos de limpieza y desinfección adecuados en las áreas
de trabajo. Por esto se deben utilizar desinfectantes que cumplan con ciertas
características específicas, siendo capases de eliminar diferentes tipos de
microorganismos patógenos y no patógenos a concentraciones adecuadas en
intervalos de tiempo determinados.
El proceso de limpieza comprende desinfección con hipoclorito de sodio (0,5 a 1%) en
el caso de mesones, paredes y vertedero; desinfección varias veces con alcohol al
70% en el caso de equipos como microscopios; lavado con agua y jabón para el piso,
mesones y vertederos; nueva limpieza con hipoclorito de sodio (0,5 a 1%) al piso,
mesones y vertederos.
Consentracion minima inhibitoria de antisepticos desinfectantes contra bacterias gran
positivas y negativas

Proseso de la muestra

Evaluación Superficies rugosas

Se utilizó un mesón de acero inoxidable del laboratorio de química, donde se dividió el
mesón en 3 extremos diferentes, posterior a esto se realizó el proceso de limpieza y
desinfección en cada cuadrante aplicando las diferentes concentraciones de
hipoclorito de sodio (2.5%, 3%, 4%,), dejando actuar el desinfectante por 10 minutos y
posterior a esto se procedió a realizar la toma de muestra mediante la técnica de
hisopado en los sitios específicos y la respectiva siembra en Agares Plate count.
Se aplicó la técnica de limpieza y desinfección adecuadamente con las diferentes
etapas del proceso, limpiando los mesones con agua y jabón removiendo la suciedad,
enjuagando con agua destilada, aplicando el desinfectante en una concentración del
3% de hipoclorito de sodio dejando actuar por 10 minutos y enjuagando nuevamente.
Se procedió a realizar las muestras por hisopados en los diferentes laboratorios
sembrando nuevamente en Agar plate count, incubándolos a temperaturas ambientes.
Evaluación de ambientes
Para la evaluación de la calidad microbiológica del ambiente en las secciones de
trabajo, se utilizó el método de sedimentación en placa, para el recuento de
microorganismos aerobios mesófilas, mohos y levaduras. Teniendo en cuenta el
número de muestras a tomar, se colocó una caja de agar Patata Glucosa y una caja
de agar Plate Count expuestas al ambiente en cada punto a analizar durante 30
minutos. Se incubaron las cajas de Patata Glucosa a temperatura ambiente durante 3
– 5 días y las cajas de Agar Plate Count a 35 ± 2oC, durante 48 horas. Pasado el
tiempo de incubación, se realizaron los recuentos y se expresaron los resultados en
Unidades Formadoras de Colonias por 30 minutos de exposición (UFC/30 minutos).
Análisis de superficies lisas
Conocidos los puntos a analizar por cada superficie, se tomaron las muestras
empleando una plantilla estéril para lograr una mayor exactitud, para la evaluación de
la calidad microbiológica de las superficies en las secciones de trabajo, se utilizó el
método de siembra masiva en superficie de Agar Plate Count. Para la recolección de
la muestra se humedeció un escobillón estéril con Caldo Peptona al 0.1%, con lo cual
se facilita la recuperación del mayor número de microorganismos al frotar en forma de
zig – zag la superficie a analizar. Se Incubó 48 horas a 35 ± 2°C. Posteriormente, al
tiempo de incubación, se realizaron los recuentos y se expresaron en Unidades
Formadoras de Colonias por cm2 (UFC/cm2).
Determinación de la efectividad en la desinfección de manos de los manipuladores
Posteriormente, al procedimiento de lavado de manos por parte del operario, con un
hisopo estéril se frotó en los dedos, uñas y palmas de la mano del operario, el cual se
extendió en la superficie, mediante la técnica de siembra masiva. Se incubó 24-48
horas a 35±2°C. Pasado el tiempo de incubación se realizó el recuento de aerobios
mesófilos y se reportó el número de microorganismos.

 Aceptable: menor de 10 UFC (Unidades Formadoras de Colonias).

 Inaceptable: mayor de 10 UFC (Unidades Formadoras de Colonias).

1. Hipoclorito de sodio (NaClO) al 13%: A partir de la concentración estandarizada

comercialmente se diluyó 2 mL de hipoclorito en 1000 mL de agua de chorro
para obtener una solución de 260 ppm.
2. Biquat al 10%, a partir de la concentración inicial se diluyó 2 mL de Biquat en
1000 mL de agua de chorro para obtener una solución de 200 ppm.
 3. Bactydan: no fue necesario diluir puesto que éste se utiliza a la concentración
estandarizada comercialmente.
El NaClO a 260 ppm solo es efectivo frente a Pseudomonas spp. a partir de los 10
minutos de exposición, no siendo capaz de inhibir el crecimiento de Chryseobacterium
indologenes, Stenotrophomonas maltophilia y Micrococcus luteus en un tiempo
máximo de 15 minutos de exposición, que es el tiempo de actuación establecido en el
protocolo de limpieza y desinfección.
El Biquat® a 200 ppm es efectivo frente a Pseudomonas spp. a partir de los 5 minutos
de exposición y frente a M. luteus a partir de los 15 minutos de exposición, no siendo
capaz de inhibir el crecimiento de C. indologenes y S. maltophilia en un tiempo
máximo de 15 minutos de exposición, que es el tiempo de actuación establecido en el
protocolo de limpieza y desinfección.
El Bactydan® es efectivo para inhibir el crecimiento S. aureus y E. coli a partir de los
30 segundos, que es el tiempo de actuación establecido en el protocolo de la planta
evaluada. Lo cual lleva a concluir que las prácticas higiénicas deficientes del personal
manipulador y el no cumplimiento a cabalidad del protocolo de lavado de manos, son
los responsables de los recuentos de aerobios mesófilos elevados y la persistencia de
Staphylococcus aureus y Escherichia coli.