“Año de la lucha contra la corrupción e impunidad”

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA DE PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

PROPAGACIÓN DE PLANTAS POR CULTIVO

In vitro

ASIGNATURA: Biotecnología Ambiental.

DOCENTE: Edgar Chaparro

PRESENTADO POR: Amanda Alexandra Bermudez Quispe

CÓDIGO: 2017-178018

SEMESTRE: Sexto (VI)

TACNA – PERÚ

2019
 PROPAGACIÓN DE PLANTAS POR CULTIVO IN VITRO

I. INTRODUCCIÓN

La expresión cultivo in vitro de plantas, significa cultivar plantas dentro de

un frasco de vidrio en un ambiente artificial. Esta forma de cultivar las
plantas tiene dos características fundamentales:

 La asepsia (ausencia de gérmenes, etc),

 El control de los factores que afectan el crecimiento.
II. OBJETIVOS

- Realizar la micro propagación por cultivo In Vitro de Origanum vulgare.

- Conocer la preparación de medios de cultivo, esterilización y asepsia.

III. MARCO TEÓRICO

3.1. CULTIVO IN VITRO DE PLANTAS

Significa cultivar plantas dentro de un frasco de vidrio en un ambiente

artificial. Esta forma de cultivar las plantas tiene dos características
fundamentales: la asepsia (ausencia de gérmenes, etc), y el control de los
factores que afectan el crecimiento. [ CITATION Mal14 \l 22538 ]. Las semillas
germinan y se desarrollan en el medio de cultivo hasta el momento de la
transferencia a tierra.[CITATION Gar15 \l 22538 ]

3.2. MICROPROPAGACIÓN: ETAPAS SEGÚN MURASHIGE

3.2.1. FASE 0: PREPARACIÓN DE LA PLANTA MADRE

Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben

obtener explantes con un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado.
Para obtener estos explantes es recomendable mantener a las plantas madre, es
decir la planta donadora de yemas, durante un período de tiempo que puede
oscilar entre unas semanas o varios meses en un invernadero bajo condiciones
controladas. [CITATION Cas04 \l 22538 ]. En ese ambiente se cultiva la planta en
condiciones sanitarias óptimas y con un control de la nutrición y riego
adecuados para permitir un crecimiento vigoroso y libre de enfermedades.
[CITATION UNE \l 22538 ].

3.2.2. FASE 1: DESINFECCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL

Una vez elegida la planta madre, se extraerán los fragmentos a partir de los
cuales se obtendrán los explantes. Los explantes pueden ser yemas, trozos de
hojas, porciones de raíces, semillas, etc. Antes de extraer los explantes se hará
una desinfección de los fragmentos de planta madre para eliminar los
contaminantes externos.[ CITATION Dao15 \l 22538 ].

3.2.3. FASE 2: INTRODUCCIÓN DEL MATERIAL IN VITRO

Luego de la desinfección superficial, las semillas o las yemas dependiendo

del material seleccionado, se ponen en medio de cultivo estéril. [ CITATION
Cas04 \l 22538 ]El objetivo de esta etapa es mantener y aumentar la cantidad de
brotes para los nuevos ciclos de multiplicación sucesivos y poder destinar parte
de ellos a la siguiente etapa de producción.[ CITATION Olm10 \l 22538 ].

3.2.4. FASE 3: MULTIPLICACIÓN DE LOS BROTES

 Durante esta fase se espera que los explantes que sobrevivieron la FASE 1 y
2 originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varias hojas. En la
base de cada hoja hay una yema que se desarrollará luego de ser puesta en
contacto con el medio de cultivo.[ CITATION Gal11 \l 22538 ].

3.2.5. FASE 4: ELECCIÓN DE LOS MÉTODOS DE ENRAIZAMIENTO DE

LOS EXPLANTOS

Para enraizar los explantes se utilizan principalmente plantines individuales

de un tamaño aproximado de 2 centímetros. Los brotes obtenidos durante la fase
de multiplicación se transfieren a un medio libre de reguladores de crecimiento
o que solo contenga hormonas del tipo auxinas. Algunas especies de plantas no
necesitan pasar por esta etapa y emiten sus raíces en el mismo medio de cultivo.
[ CITATION Tor16 \l 22538 ].

3.2.6. FASE 5: ACLIMATACIÓN DE LOS EXPLANTOS ENRAIZADOS

Los explantes recién enraizados son muy sensibles a los cambios

ambientales, de manera que el éxito o el fracaso de todo el proceso depende de
la aclimatación. En esta etapa las plantas sufrirán cambios de diferente tipo que
permitirán la adaptación de las mismas a vivir en condiciones naturales.
[ CITATION Cas04 \l 22538 ].

IV. METODOLOGÍA

4.1. UBICACIÓN
La presente practica se desarrolló en el Laboratorio de Biotecnología
Vegetal de la Facultad de ciencias Agropecuarias de la UNJBG – TACNA,
ubicado en el lugar denomida “Fundo los Pichones”.

Fuente: Google Earth

IV.1. PROCEDIMIENTO

4.1.1. Preparación del medio de cultivo in vitro

 Para el desarrollo y crecimiento de la planta son esenciales nutrientes y agua,

también azúcares.

 Primeramente, se agrega 100 ml de agua destilada en un recipiente,

seguidamente se agrega el volumen necesario de las soluciones de
macronutrientes, micronutrientes, hierro, vitaminas y reguladores de
crecimiento como se muestra en la tabla 1.

Tabla 1:
Plantilla para la preparación de medios de cultivo Murashige y Skoog.

Componentes Cantidad Concentración ml/L

 Solución stock
Macronutrientes
N H 4 N O3 1.65 g/l
KN O3 1.9 g /l
MgS O 4 .7 H 2 O 0.37 g/l x10 100
CaCl 2 .aq 0.33 g/l
K H 2 P O4 0.17 g/l
Micronutrientes
KI 0.83 mg/l
H 3 B O3 6.20 mg/l
MnS O 4 .4 H 2 O 22.3 mg/ l
ZnS O 4 .7 H 2 O 8.60 mg/ l x100 10
Na2 Mo O 4 .2 H 2 O 0.25 mg/l
CuS O 4 .5 H 2 O 0.025 mg/l
Co Cl2 .6 H 2 O 0.025 mg/l
Hierro
Na2 EDTA 37.3 mg/l
x200 5
FeS O 4 .7 H 2 O 27.8 mg/l
Vitaminas
Inotisol 100 mg
Ácido Nicitinico 0.5 mg
Piridoxina HCl 0.5 mg x200 5
Tiamina HCl 0.1 mg
Glicina 2.0 mg
Otros compuestos
Sacarosa 20 g -
Phytagel - -
pH 5.7

 Añadir la cantidad de sacarosa requerida y agitar hasta su disolución, ajustar al

volumen el volumen final con agua destilada.

 Se ajusta el pH a 5.7 con la ayuda de soluciones 0.1 M de HCl o NaOH. Se

añade el agente gelificante (phytagel), por ultimo dosificar en tubos de ensayo y
esterilizarlos en autoclave a 121 °C por 15 minutos.

4.1.2. Establecimiento y micropropagación in vitro

 Se seleccionan muestras de orégano del invernadero de tamaño de 5 cm

aproximadamente.

 Las muestras recolectadas del invernadero son puestas en un matraz, para poder
realizar la asepsia de las yemas, donde inicialmente son lavados con agua y
jabon, seguidamente se alcohol al 70% por 30 s, luego se le agrega una
disolución de cloro (hipoclorito de sodio) al 0.4 % por 10 min.
  Colocarse mascarillas, gorro, desinfectarse las manos con el fin de no
contaminar nuestra muestra.

 En la cámara de flujo laminar se deben esterilizar por flameado los

instrumentos a utilizarse como son pinzas, bisturí.

 Se procede a colocar las yemas que serán utilizadas, se les cortan hojas, se
cortan bordes, y se consigue los microesquejes que serán colocados en el medio
de cultivo.

V. MATERIALES

Materiales Equipos
- Explanes (unidonales) - Autoclave
- Jabón - Equipo de rotación
- Lejía - Cámara de flujo laminar
- Alcohol 70 - Balanza analítica
- Clin 20 - Potenciómetro
- Pinzas
- Bisturí
- Agua destilada esterilizada
- Placa de Petri
- Cultivo
- Matraz
- Tubo de ensayo
- Pipetas
- Mecheros

VI. RESULTADOS

Figura 01. Selección de la planta madre.

 Figura 02. Corte de hojas.

Figura 03: Selección de las yemas.

Figura 04. Asepsia de las yemas

 Figura 05. Colocación de las yemas en el cultivo

VII. CONCLUSIONES
Figura 06. Cultivo In Vitro final.