La cromatografía es un método fisico de separación de mezclas complejas cuyo

objetivo es separar los distintos componentes . Es ampliamente utilizado en diversas

ramas de la ciencia. Para ello emplea el principio de la retención selectiva, cuyo
objetivo es separar los distintos compuestos de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes.

La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que se excluyen mutuamente:

 Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que

puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
 Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En
este caso, las cantidades de material empleadas suelen ser muy pequeñas.

La separación por cromatografía implica dos fases distintas

FASE ESTÁTICA O ESTACIONARIA: Sustancia solida o liquida sostenida por un

soporte inerte (como papel, gas, un líquido neutro, etc.) Con lo cual interactúan de
diversas maneras los componentes de la muestra a analizar. Un ejemplo es la capa
de gel de sílice en la cromatografía en capa fina

FASE MÓVIL.- Es un líquido (o mezcla de líquidos), un gas o un fluido supercrítico que

fluyen a través de un sistema cromatografico (papel, columna o placa) arrastrando
los solutos. Permitiendo así su reacción con los componentes de la mezcla, para que la
diferencia en la velocidad de reacción sirve como criterio de separación

El objetivo de la fase estacionaria es retrasar el paso de los componentes de la

muestra. Cuando los componentes pasan a través del sistema a diferentes
velocidades, estos se separan en determinados tiempos. Cada componente tiene un
tiempo de paso

característico a través del sistema, llamado tiempo de retención.

Las dos fases se eligen de tal forma, que los componentes de la muestra se
distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos
componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven
lentamente con el flujo de la fase móvil, por el contrario, los componentes que se
unen débilmente a la fase estacionaria se mueven con rapidez. Como consecuencia
de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o
zonas que pueden analizarse cualitativa o cuantitativamente

Términos comúnmente usados en la Cromatografía

SOPORTE: Papel u otro elemento físico sobre el cual queda retenida la fase
estacionaria, con la cual debe ser totalmente inerte.
SIEMBRA: Procedimiento mediante el cual se deposita la muestra a analizar sobre
una línea (línea recta), en el caso de la cromatografía que se desarrollara en papel o
capa fina. Para ello se utilizan micro pipetas (pipetas Pasteur) de manera que el
volumen sembrado sea pequeño

CORRIDA CROMATOGRAFICA O DESARROLLO: Termino que se refiere a la acción

por la cual los componentes de la muestra son arrastrados por la fase móvil

FRENTE DEL SOLVENTE: Distancia máxima recorrida por la fase móvil

REVELADO: Si la técnica cromatografía se realiza en papel o capa fina, una vez

concluida, interesa localizar la posición de las sustancias separadas. Si las sustancias
no son coloreadas, como poder localizarlas a simple vista, se recurre a diferentes
métodos para poder hacerlo. Los métodos físicos como fluorescencia y
radioactividad, tiene aplicación muy limitada. Lo más frecuente es hacer reaccionar a
las sustancias a revelar con algún reactivo químico con el cual forman un compuesto
coloreado.

RESOLUCION: En una cromatografía en papel, es la distancia mínima a la que es

posible distinguir individualmente las manchas producidas por los componentes de la
muestra, luego separados.

ELUCION: Fenómeno de migración el compuesto de una mezcla de los compuestos

de una mezcla, a través de la fase estacionaria, impulsados por la fase móvil. También
se denomina esta manera a la acción por la cual se “recuperan” los compuestos
retenidos por la fase estacionaria, ya sea en papel, en placa o en columna, por medio
del arrastre de los mismos con algún solvente adecuado para su posterior
identificación y/o cuantificación.

TIEMPO DE RETENCION: En la cromatografía en columna se utiliza este parámetro en

vez de la distancia recorrida, usada en la cromatografía planar. El tiempo e retención
es el tiempo que demora cada componente de la muestra en abandonar el sistema
cromatografico, medido desde su inyección en el mismo hasta su salida y detección.
Incluye todo el tiempo que el componente en cuestión permanece el sistema
cromatografico.

Fase móvil.- es la fase que se mueve en una dirección definida. Se procede a mover otra
sustancia sobre el soporte, permitiendo así su reacción con los componentes de la
mezcla, para que la diferencia en la velocidad de reacción sirve como criterio de
separación Puede ser un líquido (cromatografía de líquidos o CEC). un gas (cromatografía
de gases) o un fluido supercrítico (cromatografía de fluidos supercríticos). La muestra que
se está separando/analizando (formada de analito/s y el disolvente) se inyecta en la fase
móvil que se mueve a través de la columna. En el caso de la cromatografía líquida de alta
resolución, HPLC, la fase móvil es un disolvente no polar como el hexano (fase normal) o
bien algún disolvente polar (cromatografía de fase reversa).

Dependiendo de su naturaleza, algunas sustancias tenderán a moverse y otras a

permanecer sobre el soporte, conforme a cuántas fases estéticas y móviles de diversa
condición (líquidas, sólidas y gaseosas) se lleven a cabo.
Las dos fases se eligen de tal forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de modo
distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente
retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil, por el
contrario, los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria se mueven con rapidez.
Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas
o zonas que pueden analizarse cualitativa o cuantitativamente

El fenómeno de migración de los componentes de una muestra impulsados por la

fase móvil, a lo largo de la fase estacionaria, se denomina elución

Conceptos en la Cromatografía

Concepto Definición

Analito Es la sustancia producto de un proceso cromatografico.

Cromatografía Se utiliza para determinar la presencia y concentración de

Analítica analito en la muestra.

Cromatografía Se utiliza para la purificación de sustancias con fines

Preparativa específicos (para el análisis).

Es una representación visual de los resultados del proceso

cromatográfico. Cada sustancia corresponde a un cierto pico
Cromatograma en el cromatograma.

Cromatógrafo Instrumento para la realización de la cromatografía.

Tiempo de Tiempo durante el cual el analito pasa a través del sistema

retención cromatográfico en ciertas condiciones.

Sustancia que se fija a la columna o en el panel, sobre cuya

Fase estacionaria superficie se separan las sustancias.

Fase móvil Fase que se está moviendo en una dirección

determinada. Puede ser un líquido o gas. La fase móvil se
 Concepto Definición

mueve a través de una columna que lleva la muestra a

separar.

Analito es la sustancia que se va a separar durante la cromatografía

Tiempo de retención es el tiempo característico que tarda un analito particular en pasar a

través del sistema (desde la columna de entrada hasta el detector) bajo las condiciones fijadas