FUNDAMENTOS Y TÉCNICAS DE LABORATORIO PARA CERTIFICACIÓN DE

PRODUCTOS ORGÁNICOS – 2019

RESUMEN
En esta práctica realizamos procedimientos experimentales utilizando el
espectrofotómetro para la determinación del espectro visible de azul de metileno
en una solución de 1,7 mL con una concentración de 6.5 x 10-6 M, obteniendo una
absorbancia máxima de 0.534 y a una longitud de onda de 660 nm. Se comprobó
experimentalmente la Leyde Beer-Lambert, además de aplicar dicha ley para
determinar la concentración de una muestra problema de azul de metileno con un
resultado de 3,27 x 10-6 M.
Palabras clave: absorbancia, concentración, espectrofotómetro, longitud de onda,
transmitancia.
ABSTRAC
In this practice we perform experimental procedures using the spectrophotometer for the
determination of the visible spectrum of methylene blue in a solution of 1.7 mL with a
concentration of 6.5 x 10-6 M, obtaining a maximum absorbance of 0.534 and at a
wavelength of 660 nm The Beer-Lambert Law was tested experimentally, in addition to
applying said law to determine the concentration of a methylene blue test sample with a
result of 3.27 x 10-6 M.
Keywords: absorbance, concentration, spectrophotometer, wavelength, transmittance.

INTRODUCCIÓN Para hacer este tipo de medidas se

emplea un espectrofotómetro, como
La espectrofotometría UV-visible es
ya sabemos es un equipo de
una técnica analítica que permite
laboratorio que mide la cantidad de
determinar la concentración de un
luz que pasa por medio de una
compuesto en solución. Se basa en
longitud de onda especifica. La
que las moléculas que absorben las
cantidad de luz absorbida por un
radiaciones electromagnéticas y a su
medio es proporcional a la
vez que la cantidad de luz absorbida
concentración del soluto presente, es
dependen de forma lineal de la
entonces así que la concentración de
concentración. Además es usada
un soluto colorido en solución puede
para identificar compuestos por su
ser determinada en el laboratorio
espectro de absorción y conocer la
mediante la medición de su absorción
concentración de un material o
de luz a una longitud de onda
sustancia, esto último permite, seguir
específica.
el curso de reacciones químicas y
enzimáticas así como determinar Las muestras en estos equipos se
enzimas y proteínas incluso ácidos utilizan en estado líquido y se colocan
nucleicos. en el compartimiento de las muestras
de celdas transparentes de diferentes La transmitancia (T) de una sustancia
tamaños y materiales. en solución es la relación entre la
cantidad de luz transmitida que llega
En espectroscopia el término luz no
al detector una vez que ha
sólo se aplica a la forma visible de
atravesado la muestra y la
radiación electromagnética, sino
absorbancia (A) es un concepto más
también a las formas UV e IR, que
relacionado con la muestra puesto
son invisibles. En espectrofotometría
que nos indica la cantidad de luz
de absorbancia se utilizan las
absorbida por la misma.
regiones del ultravioleta (UV cercano,
de 195-400 nm) y el visible (400-780
nm).
EQUIPO Y REACTIVOS
La región UV se define como el rango
 Solución de Azul de Metileno
de longitudes de onda de 195 a 400
nm. Es una región de energía muy  Agua destilada
alta.  2 Cubetas ópticas
 1 Pipeta Graduada de 5 ml
En la región visible apreciamos el  1 Balón volumétrico de 50 ml
color visible de una solución y que  1 Pipeta Volumétrica de 25 mL
corresponde a las longitudes de onda
 1 Soporte para Cubetas
de luz que transmite, no que absorbe.
 1 Balón volumétrico de 100 mL
El color que absorbe es el
 1 Espectrofotómetro
complementario del color que
transmite.  2 Beacker de 100 mL
 1 Propipeta
Por tanto, para realizar mediciones de
absorción es necesario utilizar la
longitud de onda en la que absorbe
luz la solución coloreada.
La fuente de radiación visible suele
ser una lámpara de tungsteno y no
proporciona suficiente energía por RESULTADO
debajo de 320 nm.
Tabla 1. Resultados obtenidos

Datos λ(nm) Abs

1 400 0.010
2 430 0,008
3 470 0,016
4 500 0,026
5 540 0,039
 6 580 0,122
7 600 0,219
8 620 0,285
9 630 0,303
10 650 0,443
11 660 0,534
12 670 0,531
13 680 0,348
14 700 0,064
15 750 0,008

Gráfica 1. Absorbancia y longitud de onda

GRÁFICA
0.6
0.53 0.53
0.5
0.44

0.4
0.35
0.3
0.3 0.29
Abs

0.22
0.2
0.12
0.1 0.06
0.03 0.04
0.01 0.02 0.01
0
0
400 430 470 500 540 580 600 620 630 650 660 670 680 700 750

λ(nm

Abs

Formula
Datos 1 2 3
λ(nm) 650 660 670
Abs 0,242 0,279 0,279
6,25× 10−6 ×0,242
Concentración de la muestra 1= =3,4142
0,443
concentración del estandar ×absorbancia de la muestra
Concentración de la muestra= 6,25× 10−6 ×0,279
absorbancia estandar
Concentración de la muestra 2= =3,2654
0,534
 6,25 ×10−6 × 0,279a disminuir ya
−6 que cuenta con un
Concentración de la muestra 3= =3,2830× 10
0,531 límite.
2. ¿Si usamos luz azul o
amarilla o verde, tendrá la
misma absorción?
Si usamos la luz azul seguirá siendo
azul la muestra y no absorberá nada
ya que son del mismo color, si
utilizamos amarilla o verde absorbería
los colores porque son diferentes
pero no tendría la misma longitud de
onda.
3. ¿En qué longitud de onda
espera encontrar su mínima
y su máxima absorbancia?
Figura 1: Muestra de azul de metileno Su mínima longitud de onda en
400nm y su máxima longitud entre los
rango de 650nm, 660nm y 670 nm.
4. Cuando el fotómetro esté
listo, ¿en cuál longitud de
onda se podrá lograr mayor
precisión al momento de
medir muestras con
diferente concentración de la
sustancia “azul de
metileno”?

ANÁLISIS Con diferentes concentraciones de

muestras de azul de metileno
1. ¿Será necesario usar esperamos encontrar mayor precisión
energía de acuerdo a su en los rangos de 650nm, 660nm y
capacidad de absorción o 670 nm.
dará lo mismo usar cualquier
rango de longitud de onda? CONCLUSIONES

Como pudimos observar el azul de La absorbancia es la capacidad que

metileno tiene su punto máximo y tiene algunos compuestos para
mínimo de absorbancia en unas absorber la radiación
longitudes de ondas electromagnética, pudimos observar
predeterminadas, si le aumentamos cómo, dependiendo de la
la longitud de onda su absorbancia va concentración y la longitud a la cual
se le aplique un rayo, puede alcanzar China, 2008, Editorial
un punto máximo de absorción. panamericana.
 DOUGLAS, A. Química
Según esto la longitud y la
analítica, capitulo 23 (pág. 614
absorbancia son proporcionales hasta
– 620) 3ra edición, México,
alcanzar el punto máximo y de allí
2005, internacional Thompson
empieza a descender.
editores S.A.
Según la concentración varia la  Espectrometría: Espectros de
absorbancia del compuesto. Variando absorción y cuantificación
la cantidad de solvente (Siendo agua colorimétrica de
destilada) se puede disminuir la biomoléculas.http://www.uco.e
absorbancia. s/organiza/departamentos/bioq
uimica-biol-
BIBLIOGRAFIAS
mol/pdf/08_ESPECTROFOTO
 BARNARD, J.A. y CHAYEN, METR%C3%8DA.pdf
R. Métodos modernos de  http://es.scribd.com/doc/85104
análisis químico, capitulo 3 25/Tecnica-de-bilirrubina
(pág. 57, 62, 68, 69, 70, 75)  http://www.biosimex.com.mx/p
España, 1970, ediciones urmo. df/insertos/QUIMICA
 ATKINS, P. Química física, %20CLINICA/11515%20115
capitulo 13 (pág. 432 – 434) 11%2011510.pdf