MINIREVISTA

crossm

Diagnóstico de laboratorio para

histoplasmosis

Marwan M. Azar, una Chadi A. Hage si

Departamento de Patología, Sección de Microbiología, Hospital General de Massachusetts, Boston, Massachusetts, EE. UU. una; Departamento de
Medicina, Programa de trasplante torácico, Universidad de Indiana, Indianápolis, Indiana, EE. UU. si

RESUMEN El diagnóstico de histoplasmosis se basa en un enfoque multifacético que incluye evidencia clínica,

radiográfica y de laboratorio de la enfermedad. Los estándares de oro para el diagnóstico de laboratorio incluyen la Manuscrito aceptado publicado en línea 8 de marzo de

2017
demostración de levadura en el examen patológico de tejido y el aislamiento del moho en el cultivo de muestras
Citación Azar MM, Hage CA. 2017. Diagnóstico de
clínicas; sin embargo, la detección de antígenos ha proporcionado un método rápido, no invasivo y altamente
laboratorio para histoplasmosis. J Clin Microbiol 55:
sensible para el diagnóstico y es un marcador útil de la respuesta al tratamiento. Se están desarrollando métodos 1612-1620. https://doi.org/10.1128/JCM
. 02430-16 .
moleculares con sensibilidad mejorada en muestras clínicas, pero aún no están listos para un uso clínico
Editor Colleen Suzanne Kraft, Universidad de Emory
generalizado. Esta revisión sintetiza los diagnósticos de laboratorio disponibles actualmente para la histoplasmosis,
Derechos de autor © 2017 Sociedad Americana de Microbiología.
con énfasis en las complejidades de las pruebas y el rendimiento en diversos contextos clínicos.
Todos los derechos reservados . Dirección de correspondencia a

Marwan M. Azar, mmazar@mgh.harvard.edu.

MMA y CAH contribuyeron igualmente a este trabajo.

PALABRAS CLAVE diagnóstico, histoplasmosis

H La istoplasmosis
causa un amplio es la infección
espectro fúngica endémica
de enfermedades, más
que van común
desde en América
pulmonar del Norte
a diseminado y
y agudo a crónico. El
agente etiológico Histoplasma capsulatum, es térmicamente dimórfico, existe como un molde hialino en el medio
natural y como una levadura a temperatura corporal. La demostración de la levadura sobre las manchas patológicas y
el aislamiento del moho en el cultivo de muestras clínicas constituyen las pruebas estándar de oro para el diagnóstico
de histoplasmosis. En 1986, el primero Histoplasma Se desarrolló un ensayo de antígeno, que introdujo una
modalidad diagnóstica novedosa, altamente sensible y no invasiva. Otras iteraciones de este ensayo han permitido
una mayor especificidad y capacidad cuantitativa y han revolucionado el diagnóstico de histoplasmosis al permitir a
los médicos realizar diagnósticos rápidos en ausencia de cultivo o confirmación patológica. La prueba serológica de
histoplasmosis es otro método ampliamente utilizado para el diagnóstico y es particularmente útil para las
manifestaciones de enfermedades crónicas en las que la sensibilidad de la detección de antígenos es subóptima.
Aunque todavía no está listo para su uso generalizado, los métodos moleculares tienen el potencial de revolucionar el
diagnóstico de histoplasmosis.

El Grupo Cooperativo de la Organización Europea para la Investigación y el Tratamiento del Cáncer / Infecciones
Fúngicas Invasoras y el Grupo de Estudio del Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas (EORTC /
MSG) han definido criterios para el diagnóstico de infecciones fúngicas invasivas, incluidas las causadas por hongos
dimórficos ( 1) Un diagnóstico comprobado depende de la confirmación por histopatología o cultivo, mientras que un
diagnóstico probable se basa en la presencia de una presentación clínica apropiada, una condición predisponente y
evidencia micológica, como la presencia de antigenuria. El Consejo de Epidemiólogos del Estado y Territoriales
(CSTE) ha desarrollado recientemente una definición de caso de consenso para la histoplasmosis para abordar la
variabilidad en las designaciones entre los diferentes estados y como una herramienta para mejorar la vigilancia
epidemiológica. Los criterios definidos y probables para un nuevo caso de histoplasmosis incluyen evidencia clínica,
de laboratorio y epidemiológica de enfermedad, así como un período de 24 meses desde el último inicio informado de
histoplasmosis en el mismo individuo (2). Como se refleja en estos criterios, el diagnóstico de histoplasmosis a
menudo requiere un enfoque multifacético, que incluye:

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TABLA 1 Resumen de la prueba de diagnóstico para histoplasmosis una

% de resultado de histoplasmosis por tipo

pulmonar agudo Pulmonar Pulmonar Progresivo

Prueba subaguda crónica diseminado
Cultura 0-20 53,8 66,7 74,2
Patología 0–42 42,1 75,0 76,3
Antígeno 82,8–83,3 30,4 87,5 91,8
Serología 64,3–66,7 95,1 83,3 75
una Ver referencias 14 y 16.

ing pruebas de laboratorio convincentes. Esta revisión sintetiza los diagnósticos actuales para la identificación de
laboratorio de H. capsulatum, con énfasis en probar las complejidades y el valor basado en el contexto.

CULTURA Y MANCHAS DE MICROBIOLOGÍA

Aislamiento de H. capsulatum de muestras clínicas sigue siendo el estándar de oro para el diagnóstico de

histoplasmosis. En el laboratorio de microbiología, H. capsulatum puede identificarse en cultivo después de inocular la

muestra en un medio apropiado e incubar lo suficiente como para permitir el crecimiento de hongos o mediante tinción y

microscopía directa en muestras de fluidos corporales y tejidos. diferente a Candida y Criptococo células de levadura, que

son predominantemente extracelulares, H. capsulatum se tiñe mal con la tinción de Gram y rara vez se detecta por esta

modalidad. Calco Flour White, una mancha fluorescente que une la quitina en la pared celular de todos los hongos, es útil

para identificar H. capsulatum en muestras clínicas enviadas para pruebas microbiológicas. Cuando se incuba en un medio

apropiado a una temperatura de 25 a 30 ° C, el crecimiento de la fase micelial ocurre más comúnmente en 2 a 3 semanas,

pero puede demorar hasta 8 semanas. Una vez que se identifica una colonia en medio sólido, se puede realizar una prueba

de azul de algodón de lactofenol (montaje de prueba) para determinar la morfología del moho y, dependiendo de la madurez

del micelio, primero se mostrarán hifas septadas, seguidas de la presencia de lisas (o, menos comúnmente, microconidios

espinosos (tamaño de 2 a 5 m) y finalmente, macroconidios tuberculosos característicos (7 a 15 m de tamaño). Si las placas

se incuban originalmente a 37 ° C, las colonias aparecen como levaduras, y la microscopía revelará levaduras pequeñas,

redondas y de brotación estrecha. La incubación de la forma del molde a 37 ° C conducirá a la transformación del micelio a

la fase de levadura. Aunque anteriormente se utilizaba como un método para confirmar la naturaleza dimórfica de H.

capsulatum, La tasa de conversión es baja y, por lo tanto, poco práctica como herramienta de diagnóstico. Los
macroconidios tuberculosos son altamente sugestivos de H. capsulatum, pero otros hongos, incluidos Sepedonio especies,

también pueden producir tales estructuras; por lo tanto, se necesita una prueba más específica antes de hacer un

diagnóstico definitivo de histoplasmosis. Las sondas moleculares disponibles comercialmente se pueden aplicar al aislado y

producir una identificación rápida (ver Métodos moleculares). Estos han reemplazado las pruebas de un exoantígeno

específico, que requieren más mano de obra y son menos prácticas. H. capsulatum plantea un riesgo infeccioso y debe

manipularse en un laboratorio con equipos e instalaciones de seguridad de nivel 3 de bioseguridad.

La sensibilidad de los cultivos para la detección de H. capsulatum depende de la manifestación clínica (pulmonar
versus diseminada), el estado neto de inmunidad del huésped y la carga de la enfermedad (Tabla 1). Los pacientes
con histoplasmosis diseminada tienen una tasa más alta de cultivos positivos (74%) que los pacientes con
histoplasmosis pulmonar aguda (42%) (3). En pacientes con VIH / SIDA, los cultivos respiratorios pueden ser positivos
hasta en un 90%, mientras que los hemocultivos pueden ser positivos hasta en un 50% (4). Aunque el uso rutinario de
tubos de centrifugación de lisis para la recuperación de bacterias y hongos exigentes de los hemocultivos ha caído en
desgracia en muchos laboratorios, la sensibilidad de este método ha demostrado ser superior a la de los hemocultivos
líticos convencionales y Bactec MYCO / F para la recuperación de H. capsulatum ( 5–7).

HISTOPATOLOGIA
Demostrando la presencia de células de levadura consistentes con H. capsulatum en tejido apoya el
diagnóstico de histoplasmosis (aunque no necesariamente infección activa). H.

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capsulatum var. capsulatum Las células de levadura son de forma ovoide, miden de 2 a 4 m de tamaño, tienen paredes

celulares delgadas no refractivas y manifiestan un brote característico de base estrecha. La levadura se encuentra

predominantemente fagocitada dentro de los macrófagos e histiocitos, a menudo en grupos de muchos organismos, pero a

veces se puede ver en espacios extracelulares.

H. capsulatum var. duboisii, el agente de histoplasmosis africana, es más grande (6 a 12 m) y fácilmente

distinguible de la variedad más común. Organismos a considerar al hacer el diagnóstico histopatológico de H.
capsulatum incluir Criptococo spp.
Dermatitis por Blastomyces, Candida glabrata, Pneumocystis jirovecii, Coccidioides spp. Talaromyces ( antes Penicillium)
marneffei, Leishmania spp. Toxoplasma gondii, y
Trypanosoma cruzi. El uso de tinciones histoquímicas específicas facilita la diferenciación de estos patógenos, siendo
las tintas Gomori methenamine silver (GMS) y periódicas acidSchiff (PAS) las más útiles para visualizar H. capsulatum en
preparaciones de tejidos al resaltar la pared celular de la levadura. La tinción con hematoxilina y eosina (H&E) a
menudo es demasiado insensible para detectar la presencia de H. capsulatum, excepto cuando la carga de organismos
es muy grande. La mucicarmina permite la diferenciación de Cryptococcus otra levadura de crecimiento estrecho y
ligeramente más grande (3 a 8 m), manchando su cápsula y produciendo la apariencia de halos característicos. En
cepas no encapsuladas de Cryptococcus La tinción de Fontana-Masson se puede usar para teñir melanina criptocócica.
La mayoría de Dermatitis por blastomyces las células de levadura son significativamente más grandes (hasta 15 m) que
las de

H. capsulatum, pero sus brotes de base amplia y paredes más gruesas pueden distinguir formas más pequeñas.
Debido a su pequeño tamaño y la falta de producción de pseudohyphal, la aparición de C. glabrata demuestra la
mayor superposición con H. capsulatum. Las características que ayudan a distinguir estas levaduras incluyen la
ubicación celular predominante (intracelular para H. capsulatum, extracelular para C. glabrata), variación de forma y
tamaño (uniforme versus heterogéneo) y respuesta histopatológica (granulomatoso versus supurativo) (8).

Pneumocystis jirovecii quistes, como H. capsulatum, teñir con PAS y GMS pero no están encapsulados y no toman
mucicarmina. Sin embargo, estos quistes son más grandes (5 a 8
m) que H. capsulatum levadura, no exhiben brotación, y son predominantemente extracelulares. Endosporas
de Coccidioides spp. se aproximará al tamaño y forma de H. capsulatum y debe provocar una búsqueda de
esférulas intactas o de ruptura. T. marneffei
exhibe un tabique transversal que está ausente en otras levaduras y no brota. Leishmania
spp. Toxoplasma gondii, y Trypanosoma cruzi son protozoos que no se tiñen con manchas de GMS o PAS pero a
menudo son evidentes con H&E. Cuando se aplica a frotis de sangre periférica, la tinción de Wright-Giemsa puede
identificar grupos intracelulares de levadura incipiente, especialmente en pacientes con enfermedad diseminada.

La presencia de H. capsulatum La levadura en ciertos tejidos o el fluido corporal estéril (como las lesiones
cutáneas) y en el contexto clínico apropiado (como la neumonía aguda) es indicativo de infección activa. Sin embargo,
se pueden encontrar organismos no viables en los tejidos de granuloma mediastínico o pulmonar durante muchos años
después de la infección inicial. La patología generalmente muestra granulomas y / o fibrosis incompletos en lugar de una
reacción piogranulomatosa bien formada. En estos casos, los cultivos negativos, la falta de síntomas y la antigenemia
pueden ayudar a distinguir entre enfermedad resuelta, enfermedad antigua e infección activa.

CITOPATOLOGIA
El examen de los aspirados de tejido y los fluidos para células individuales en lugar de tejido con arquitectura

preservada puede proporcionar evidencia presunta de histoplasmosis. Al igual que con la histopatología, cuando se tiñe

con GMS o PAS, la preparación citológica a menudo mostrará células de levadura incipientes de base estrecha

principalmente dentro de los macrófagos. La sensibilidad varía según la manifestación clínica (tabla 1). La evaluación

citopatológica del líquido de lavado broncoalveolar (BAL) es relativamente no invasiva y tiene una sensibilidad de

alrededor del 50% para la histoplasmosis pulmonar aguda. Cuando se combina con fluido BAL Histoplasma

prueba de antígeno, la sensibilidad se eleva al 97% (9). La aspiración con aguja fina es otro método de diagnóstico seguro que

puede producir un citodiagnóstico de histoplasmosis cuando se aplica a una variedad de tejidos, incluidos los ganglios linfáticos y

las glándulas suprarrenales (10).

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DETECCIÓN DE ANTIGENOS

En virtud de su naturaleza no invasiva, su amplia accesibilidad a los médicos y sus buenas características de
rendimiento, las pruebas de antígeno se han convertido en una modalidad líder para diagnosticar histoplasmosis.
Aunque un diagnóstico definitivo de histoplasmosis requiere cultivo o confirmación histopatológica, todavía se puede
hacer un diagnóstico probable cuando hay un factor huésped (condición inmunocomprometida), cuadro clínico
compatible y evidencia micológica (como positividad antigénica) (1).

Desarrollado por primera vez en 1986 como un radioinmunoensayo sándwich, el Histoplasma el antígeno se
reformuló en un inmunoensayo enzimático (EIA) en 1989. Se desarrolló una EIA de segunda generación en 2004,
que permitió resultados semicuantitativos, y una prueba de tercera generación (MiraVista H. capsulatum Galactomannan
EIA) con mayor especificidad y resultados cuantitativos disponibles en 2007. En contraste con el ensayo MiraVista,
que requiere procesamiento en un laboratorio central, un in vitro EIA de diagnóstico (IMMY ALPHA Histoplasma EIA)
fue aprobado por la Administración de Drogas y Alimentos (FDA) en muestras de orina en 2007 para su uso en
instalaciones locales. Se encontró que la sensibilidad y la especificidad de este ensayo eran más bajas que las del
ensayo MiraVista (11). Un reactivo específico de analito desarrollado posteriormente (ASR) H. capsulatum El
antígeno EIA (IMMY) ha mostrado características de rendimiento mejoradas (12), así como un alto acuerdo con el
MiraVista EIA (13). Sin embargo, las comparaciones cara a cara entre IMMY ASR EIA y MiraVista EIA han mostrado
una mayor sensibilidad y una tendencia general hacia valores numéricos más altos con los MiraVista EIA (12, 13).

En un gran estudio multicéntrico, la sensibilidad de la EIA MiraVista Histoplasma Se encontró que la prueba de
antígeno es más alta en pacientes con histoplasmosis diseminada en quienes la carga de infección es sustancial,
seguida por aquellos con histoplasmosis pulmonar crónica e histoplasmosis pulmonar aguda (91.8%, 87.5% y 83%,
respectivamente), y más baja en pacientes con histoplasmosis subaguda (30%) (14) (tabla 1). La sensibilidad del
ensayo es particularmente alta en pacientes con VIH / SIDA con enfermedad diseminada, en la cual se puede detectar
antigenuria en el 95% de los casos (15). Las manifestaciones mediastínicas de la histoplasmosis, incluidos el
granuloma mediastínico y la mediastinitis fibrosante, generalmente no conducen a pruebas de antígeno positivas.

La detección del antígeno en la orina generalmente ha demostrado ser ligeramente más sensible que en el suero en

todas las manifestaciones de histoplasmosis. La combinación de las pruebas de orina y suero aumenta la probabilidad de

detección de antígeno (16). Las pruebas de antígeno también se han aplicado a otros fluidos corporales, incluidos el líquido

BAL y el líquido cefalorraquídeo (LCR). En pacientes con histoplasmosis pulmonar, fluido BAL Histoplasma el antígeno

puede servir como un complemento útil para las pruebas de orina y suero. Un estudio anterior entre pacientes con VIH /

SIDA mostró un fluido BAL Histoplasma sensibilidad al antígeno del 70% en comparación con el 93% en orina y el 88,5% en

suero (17). Sin embargo, en un estudio más reciente, la sensibilidad de la prueba de antígeno de fluido BAL fue superior

(93%) a la de la orina (79%) y el suero (65%) y los casos identificados que los métodos de orina y suero no detectaron (9 )

En pacientes con

Histoplasma meningitis, el antígeno puede detectarse en el LCR, con una sensibilidad que varía del 40% al 65% (18, 19). Datos más

recientes sugieren que el CSF Histoplasma el antígeno puede ser hasta un 85% sensible cuando se extrae dentro de los 14 días

posteriores al inicio del antimicótico en casos de histoplasmosis comprobada del SNC (datos no publicados). Es importante tener en

cuenta que las pruebas de antígeno en muestras no aprobadas por la FDA a menudo se basan en datos menos sólidos, pueden

verse obstaculizados por factores interferentes y requieren estudios de validación para establecer características de rendimiento.

Además de su utilidad en el diagnóstico, la tercera generación Histoplasma La naturaleza cuantitativa del antígeno EIA

permite la monitorización secuencial del aclaramiento de antígeno. Se ha demostrado que los niveles de antígeno,

particularmente en suero, disminuyen con el tratamiento efectivo y aumentan con el fracaso del tratamiento, proporcionando

un marcador útil de la respuesta al tratamiento. Los datos para el monitoreo de antigenemia y antigenuria han sido más

rigurosos entre los pacientes con VIH / SIDA; En esta población, se han propuesto niveles de antígeno en orina y suero de 2

ng / ml como uno de los requisitos para la curación y la interrupción del tratamiento antimicótico (20).

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TABLA 2 Reactividad cruzada de Histoplasma antígeno con otros hongos

Reactividad cruzada (%)

Hongo (referencia)

Blastomyces dermatitidis 64 (40), 90 (14), 70 (41), 80 (9)

Histoplasma capsulatum var. duboisii 100 (40) una
Coccidioides immitis y C. posadasii 0 (40), 60 (41), 67 (42)
Paracoccidioides brasiliensis 90 (40), 80 (41)
Sporothrix schenckii 100 (43) una
Penicillium marneffei 94 (40), 80 (41)
Aspergilo spp. 0 (41)
una Datos basados ​en un solo paciente.

Una limitación de Histoplasma la prueba de antígeno es la reactividad cruzada significativa con otros antígenos
fúngicos, que incluyen Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, T. marneffei y menos comúnmente, Coccidioides
immitis y Coccidioides posadasii ( ver tabla
2) También se ha demostrado que las reacciones falsas positivas ocurren en el 15% de los pacientes trasplantados que
reciben globulina antitimocítica como parte del tratamiento antirrechazo (21). Aunque es más probable que los resultados
positivos bajos sean falsos positivos, a menudo son de importancia clínica y no se pueden ignorar. En un estudio de 25
pacientes con resultados poco positivos y sin antecedentes de histoplasmosis, se demostró que 13 pacientes tenían
histoplasmosis activa por otros métodos de diagnóstico (histopatología, cultivo, serología o PCR), y se determinó que 5
pacientes tenían otras infecciones micóticas. (blastomicosis o coccidioidomicosis) endémica del área (22).

SEROLOGÍA

Los anticuerpos requieren de 4 a 8 semanas para ser detectables en la sangre periférica y, por lo tanto, no son adecuados

para el diagnóstico de infección aguda temprana. La prueba de anticuerpos es más útil para las formas subagudas y crónicas de

histoplasmosis (incluida la histoplasmosis mediastínica), en las que los anticuerpos circulantes están presentes y la sensibilidad

de la detección de antígenos es subóptima (Tabla 1). Al igual que con otras pruebas serológicas, una prueba de anticuerpos

positiva para H. capsulatum indica que el paciente estuvo expuesto al hongo en algún momento en el pasado. Sin embargo, en

algunos escenarios, las pruebas serológicas pueden proporcionar evidencia de infección aguda (Tabla 3). Los 3 ensayos

serológicos más comunes para histoplasmosis incluyen la prueba de inmunodifusión (ID), la prueba de fijación del complemento

(CF) y el inmunoensayo enzimático (EIA). El método CF detecta la presencia de anticuerpos en el suero de un paciente, en

función del grado de fijación del complemento a los complejos de anticuerpos del paciente con antígenos de fase de levadura y

de micelio (histoplasmina). Con este ensayo, la infección aguda se define como un Aumento de 4 veces en los títulos de

anticuerpos entre sueros de fase aguda y convaleciente. Un título de 1: 8 es positivo, lo que indica una exposición previa a H.

capsulatum. Un título de 1:32 o un aumento de 4 veces en el título de anticuerpos del suero de fase aguda a convaleciente es
fuertemente sugestivo de infección activa (23). Los títulos generalmente disminuyen con la resolución de la enfermedad, pero la

disminución es lenta y a menudo incompleta, lo que hace que el aclaramiento de anticuerpos sea poco práctico como

herramienta para evaluar la respuesta al tratamiento. La prueba de ID detecta la presencia de anticuerpos séricos que precipitan

en gel de agar después de unirse con H y M H. capsulatum

TABLA 3 Evidencia serológica de infección aguda según criterios CSTE una

Fuente de
Criterio si muestra C

Aumento de 4 veces en H. capsulatum Títulos de CF tomados con al menos 2 semanas de diferencia Suero
Detección de banda H por H. capsulatum Prueba de identificación Suero
Detección de banda M por H. capsulatum Prueba de identificación después de documentado Suero
falta de banda M en la prueba anterior
Detección de H. capsulatum anticuerpos por título de CF simple de 1:32 Suero o LCR
Detección de banda M por H. capsulatum Prueba de identificación sin prueba negativa previa Suero o LCR

una El cumplimiento de un criterio único es suficiente para el diagnóstico de histoplasmosis aguda.

si CF, fijación del complemento; Identificación, inmunodifusión.

C LCR, líquido cefalorraquídeo.

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antígenos La banda M es detectable en la mayoría de los pacientes con histoplasmosis aguda (80%) pero persiste durante

largos períodos de tiempo; por lo tanto, una sola banda M positiva no puede distinguir la enfermedad activa de la latente o

resuelta. Raramente se observan precipitinas H (20%) pero, cuando están presentes, confirman infección aguda. El método

CF es más sensible que la ID (90% versus 80%, respectivamente) (23). La reactividad cruzada en el contexto de otras

infecciones fúngicas u otras afecciones (particularmente enfermedades granulomatosas, como la tuberculosis y la

sarcoidosis) puede ocurrir con ambos ensayos, pero es más común con la FQ (24). Se ha descrito un método de EIA que es

más sensible que la CF y la ID pero con una especificidad disminuida (25). La serología puede ser útil incluso en áreas que

son altamente endémicas para la enfermedad, donde sorprendentemente, menos del 5% de los individuos tienen serología

positiva con FQ o ID (23). La presencia de anticuerpos en el LCR por CF o ID es suficiente para hacer el diagnóstico de Histoplasma

meningitis y es más sensible que el aislamiento de H. capsulatum en cultivos de LCR (26). Los parámetros serológicos que

proporcionan la confirmación de la infección aguda han sido delineados por el CSTE, y la presencia de un único criterio es

suficiente para el diagnóstico de infección aguda (Tabla 3). Los pacientes inmunodeprimidos, particularmente aquellos con

inmunidad humoral deteriorada, pueden no montar una respuesta de anticuerpos. Los datos sugieren que la mayoría de los

pacientes con inhibidores del factor de necrosis tumoral tendrán serología positiva, mientras que solo del 25 al 30% de los

receptores de pacientes con trasplante de órganos sólidos desarrollan una respuesta de anticuerpos (27, 28). La

combinación de pruebas de anticuerpos y antígenos puede conducir a una sensibilidad significativamente mejorada para el

diagnóstico de histoplasmosis pulmonar aguda (29).

Métodos moleculares
Los métodos moleculares ofrecen la ventaja de una alta especificidad analítica, combinada con tiempos de
respuesta más cortos que los de otros diagnósticos. Sin embargo, actualmente no hay ensayos moleculares aprobados
por la FDA para H. capsulatum que son directamente aplicables a muestras clínicas. Se han desarrollado ensayos de
PCR desarrollados en laboratorio que utilizan una variedad de objetivos moleculares (Tabla 4). En comparación con el
cultivo y un diagnóstico clínico o basado en criterios de histoplasmosis, la sensibilidad de los ensayos moleculares en
estudios publicados ha oscilado entre 67 y 100% (30-35) y 33 y 87% (36, 37), respectivamente. Una fluorescencia en el
lugar técnica de hibridación (FISH) que detecta con éxito H. capsulatum El ARNr en hemocultivos puede evitar la
necesidad de crecimiento de colonias para obtener un diagnóstico definitivo y oportuno (35). Aunque el cultivo se ha
considerado típicamente el estándar de oro para el diagnóstico, los métodos moleculares pueden ser más sensibles. De
hecho, en un estudio que compara la PCR en tiempo real con el cultivo para la detección de H. capsulatum, Se confirmó
que 10 de 11 pacientes con muestras positivas para cultivos negativos para PCR tenían histoplasmosis basada en
cultivos positivos de otras muestras o histopatología positiva (33). Menos estudios han examinado métodos moleculares
en comparación con la detección de antígenos y anticuerpos. Un método basado en inmunoensayo enzimático por PCR
fue solo

18,5% sensible en comparación con la antigenuria de alto nivel ( 20 U) (34), mientras que una PCR anidada detectó el 86% de

los casos con elevación H. capsulatum- anticuerpos específicos (1: 320 a 1: 2,560) (38). La generalización de estos resultados

está limitada por la heterogeneidad de los ensayos moleculares, los objetivos utilizados, el pequeño número de pacientes

incluidos, la variación en las muestras clínicas estudiadas y el método de diagnóstico comparativo. No obstante, los métodos

moleculares claramente tienen el potencial de revolucionar el diagnóstico de histoplasmosis, y los ensayos con características

de rendimiento mejoradas probablemente jugarán un papel más importante en los próximos años.

En la actualidad, el procedimiento principal para el diagnóstico molecular de histoplasmosis es mediante la aplicación

de una sonda rápida de ADN a hongos aislados del cultivo. Una de esas pruebas es el AccuProbe, que utiliza una sonda
de ADN monocatenario con una etiqueta quimioluminiscente que es complementaria a una secuencia de ARNm fúngico.
Fluorescencia generada por ADN marcado: los híbridos de ARN se miden con un luminómetro. Las señales mayores o
iguales a valores de corte predeterminados se consideran positivas (39). Ciertos laboratorios comerciales ofrecen
secuenciación y pruebas de PCR basadas en tejidos, que incluyen una PCR de amplio rango de secuencia del hongo
28S ribosoma y espaciador transcrito interno (ITS), así como

Junio ​de 2017 Volumen 55 Número 6 jcm.asm.org 1617

 CUADRO 4 Métodos moleculares desarrollados en laboratorio para la detección de H. capsulatum en muestras clínicas Minireview

Molecular H. capsulatum Sensibilidad Ciudad

método una objetivo molecular si No. / tipo de pacientes C No. de muestras clínicas Fuente (s) de muestra (s) ( norte) re Prueba comparativa (%) específica (%) mi

LÁMPARA (32) hcp100 locus genético 6 VIH con PDH, 10 controles 16 Orina Cultura 67 100
PCR anidada (31) hcp100 locus genético 15 VIH con PDH *, 12 40 Médula ósea (11), muestra de biopsia hepática (9), Cultura 100 100
control S* aspiraciones bronquiales (6), líquido BAL (4), ganglio linfático

Junio ​de 2017 Volumen 55 Número 6

(2), biopsia intestinal (2), sangre (2), LCR (2), suero (2)

PCR-EIA (34) H. capsulatum- gen especifico 51 con orina positiva 76 Orina Cultura 80 100
secuencia (99 pb) Histoplasma antígeno, 25
controles
Antígeno de orina (1–19.9 U) 00 NR
Antígeno de orina (20 U)
18,5 NR
PCR en tiempo real (30) Región de 192 pb de GAPDH gene Sospecha de infección micótica, 797 (15 cultivos positivos Lavados bronquiales (346), fluido BAL (212), Cultura 73 100
N NR muestras) líquido pleural (157), secreciones traqueales (35), tejido (14),
esputo (13), lavados pulmonares (6), sangre (4), médula ósea
(5), líquido peritoneal (3), otros líquidos corporales (2) )

PESCADO (35) Subunidad ribosómica 18S 3 VIH con clínica 33 Cultura de sangre Cultura 100 100
diagnóstico de micosis
invasiva, 30 controles
PCR (35) ARNr 3 VIH con clínica 33 Sangre Cultura 100 100
diagnóstico de micosis
invasiva, 30 controles
PCR en tiempo real (44) H. capsulatum- gen especifico 9 con histoplasmosis 99 FFPE Cultura 89 DAKOTA DEL NORTE
secuencia (99 pb)
PCR en tiempo real (33) Región espaciadora transcrita interna de Sospecha de clínica 348 (71 cultivo positivo Médula ósea (108), LCR (55), sangre (48), BAL Cultura 96 96
complejo de genes rRNA micosis, N NR muestras) fluido (43), biopsia intestinal (31), biopsia hepática
(30), ganglios linfáticos (25), biopsia de piel (8)

PCR (36) RYP1 gene 15 VIH con histoplasmosis 21 Sangre Diagnóstico de histoplasmosis 87 100
6 controles (comparador específico no
informado)
PCR anidada (37) Regiones conservadas de NAALADase 5 con probado (4) o probable 99 Suero (4), FFPE (4), fluido BAL (1) Diagnóstico de histoplasmosis 77 DAKOTA DEL NORTE
genes (1) histoplasmosis según los según los criterios de EORTC
criterios de EORTC
PCR en tiempo real (37) Regiones conservadas de NAALADase 5 con probado (4) o probable 99 Suero (4), FFPE (4), fluido BAL (1) Diagnóstico de histoplasmosis 33 DAKOTA DEL NORTE
genes (1) histoplasmosis según los según los criterios de EORTC
criterios de EORTC
PCR anidada (38) hcp100 locus genético 7 con pulmonar agudo 77 Suero Serología (EIA; rango de títulos, 86 DAKOTA DEL NORTE
histoplasmosis 1: 320–1: 2.560)
PCR simple (38) H. capsulatum- gen especifico 7 con pulmonar agudo 77 Suero Serología (EIA; rango de títulos, 86 DAKOTA DEL NORTE
secuencia (1281–1283 [220] pb) histoplasmosis 1: 320–1: 2.560)

una LAMP, amplificación isotérmica mediada por bucle; EIA, inmunoensayo enzimático; PECES, fluorescencia en el lugar hibridación.
si NAALADase, NORTE- acetilo- L- aspartilo L- glutamato peptidasa. "[220]" se refiere a un fragmento de 220 pb que se amplificó usando los cebadores 1281 a 1283.
C PDH, histoplasmosis diseminada progresiva; EORTC, Organización Europea para la Investigación y el Tratamiento del Cáncer. *, todos los pacientes excepto 1 eran VIH positivos. N NR, número no informado.
re BAL, lavado broncoalveolar; LCR: líquido cefalorraquídeo; FFPE, tejido embebido en parafina fi nado con formalina.
mi NR, no informado; ND, no hecho.
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una Histoplasma ensayo de PCR específico. Sin embargo, el rendimiento y la validación clínica de estos ensayos no
se han aclarado bien.

RESUMEN Y CONCLUSIONES
Aislamiento de H. capsulatum En el cultivo o la identificación de la levadura en la histopatología son los estándares de oro para

el diagnóstico. Las pruebas de antígeno y la serología también están disponibles, y las pruebas de antígeno son altamente sensibles

y fácilmente interpretables, lo que lo hace ampliamente accesible para los médicos. Los métodos moleculares pueden ser la próxima

frontera en Histoplasma

diagnóstico, pero los ensayos actuales no han sido aprobados por la FDA para uso clínico de rutina. Al igual que con la
mayoría de las otras enfermedades infecciosas, el método de diagnóstico óptimo depende del momento en el curso
natural de la enfermedad, el sitio de la infección, la muestra clínica que se muestrea y el estado neto de la
inmunosupresión. La selección de las pruebas apropiadas requiere una comprensión de las características de
rendimiento de varios métodos de diagnóstico en cada entorno clínico. El laboratorio clínico de microbiología puede
servir como un recurso importante para los médicos que buscan seleccionar e interpretar pruebas de diagnóstico para
histoplasmosis.

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