FACULTAD DE CIENCIAS AGROALIMENTARIAS Y DEL MEDIO

AMBIENTE
PROGRAMA DE MAESTRIA EN CIENCIAS MENCION EN “BIOTECNOLOGIA”

ARTICULO:
La Capacidad Antagónica De T. Parareesei Frente A Phytophthora,
Rhizoctonia Y Fusarium Mediante Cultivo Dual En Condiciones In Vitro.

ASIGNATURA:
Metodología de la Investigación

PRESENTADO POR:
Ing. Adalberto Custodio 2011.0085
Lic. Edinson Rafael Núñez 2019.0189
Lic. Mabel Payero 2019.0211

PRESENTADO A:
ING. Esclaudy Pérez PHD.

Santiago de los Caballeros, Republica Dominicana

20 de octubre 2019
 Articulo Reseña
La Capacidad Antagónica De T. Parareesei Frente A Phytophthora,
Rhizoctonia Y Fusarium Mediante Cultivo Dual En Condiciones In
Vitro.

Carlos Ismael Galvez,* Nicolas De La Cruz*, Dr. Esclaudys Perez**, Adalberto

Custodio***, Edinson Nuñ ez***, Mabel Payero***
*Faculta De Ciencias Agroalimentarias y Del Ambiente, Departamento de Agronomia,
Universidad Isa, Santiago Republica Dominicana **Profesor Asesor del Dpto Agronomia en la
Universidad Isa, Santiago Republica Dominicana, *** Facultad de Ciencias Agroalimentarias y
Del Medio Ambiente, Programa de Maestria En Ciencias Mencion En “BIOTECNOLOGI” Clases
de Metodologia Cientifica.

Resumen: Los hongos antagonistas resultan importantes para el control biológico de los
fitopatógenos. En este sentido, las especies del género Trichoderma se destacan entre las
más utilizadas para el biocontrol de patógenos fúngicos del suelo. Esta investigación se
llevó a cabo con el objetivo de evaluar la capacidad antagonista de Trichoderma
parareesie en condiciones in vitro frente a fitopatógenos de importancia agrícola en la
República Dominicana. Los tratamientos estaban conformados por tres cepas de
microrganismo patógeno (Phytophthora, Rhizoctoniay Fusarium) y un antagonista
(Trichoderma parareesie) cultivadas en el centro de una placa Petri conteniendo PDA y
sirvieron como referentes de crecimiento para cada una. Paralelamente, cada patógeno
(Phytophthora infestan (PI), Rhizoctoniasolani (RS) y Fusarium oxisporum (FO)) se
enfrentó con la cepa antagonista de T. parareesei (TP) para evaluar su efecto antagónico.
En el artículo, los autores se proponen realizar una compilación sobre la capacidad
antagónica de Trichoderma parareesei frente a Phytophthora, Rhizoctonia y Fusarium
mediante cultivo dual en condiciones in vitro.

(Palabras clave: Trichoderma Parareesei;

antagonism; phytophthora; rhizoctonia; fusarium)

Introducción: Las enfermedades transformarse en factores limitantes para

causadas por hongos pueden provocar la producción y comercialización de los
pérdidas importantes en el rendimiento y productos agrícolas, provocando
la calidad de los cultivos y pérdidas económicas a productores y
adicionalmente pueden disminuir la vida comercializadores.  (Ramirez, 2017)
útil de las plantas. Dependiente de la
incidencia y severidad, estos pueden
El impacto negativo de las enfermedades
por hongos en los cultivos incrementa el
costo de producción agrícola, por la
necesidad de implementar estrategias
adicionales para el control del
microorganismo patógeno y la
disminución de sus efectos sobre sus
cosechas. (Porta y Vannacci, 2012)
de Trichoderma como controlador
biológico de determinada plaga, aún no
se aborda profundamente como elemento
clave en el manejo de la misma. Aspecto
que repercute en la eficacia y
perdurabilidad de los aislamientos
seleccionados en los sistemas
productivos.

Trichoderma ha sido ampliamente El objetivo de este trabajo fue Medir la

utilizado como agente de biocontrol capacidad antagónica de T. parareesei
desde que Weindling en 1932 frente a Phytophthora, Rhizoctonia y
describiera la capacidad antagonista de Fusarium mediante cultivo dual en
Trichoderma lignorum (ahora condiciones in vitro.
Trichoderma viride) (Chet, 1987;
Howell, 2003, 2006). Desde entonces, se
han descrito como mecanismo de acción
frente a fitopatógeno: el
micoparasitismo, la antibiosis y la
competición por nutrientes j también su
capacidad para promover el crecimiento
de las plantas y la inducción de defensas
frente a patógenos y estreses abióticos,
incremento de su tolerancia frente a
estreses abióticos e inducción de las
defensas de las plantas frente a
patógenos (Shoresh et al., 2005; Lorito
et al., 2010; Hermosa et al., 2012).

El género Trichoderma posee buenas

cualidades para el control de
enfermedades en plantas causadas por
patógenos fúngicos y otros. Este hongo
actúa por medio de una combinación de
competencia por nutrientes, producción
de metabolitos antifúngicos, enzimas
hidrolíticas y micoparasitismo, además
de producir sustancias promotoras del
crecimiento vegetal. (Suárez et al, 2008)

 El estudio de modos de acción en el

proceso de selección de los aislamientos
Metodología
El estudio se realizó en los Laboratorios
de Biología y Microbiología de la
Universidad ISA, durante el período
mayo-julio del 2017. En dichos espacios
se realizó la evaluación de la capacidad
antagónica de Trichoderma parareesei
frente a organismos fitopatógenos.
Para este ensayo, los tratamientos
estaban conformados por cada cepa
(cuatro en total) colocadas en el centro
de una placa Petri y que sirvieron como
referentes de cada cepa. Paralelamente,
cada patógeno (tres en total) se enfrentó
con la cepa de Trichoderma, para un
total de siete tratamientos. De cada
enfrentamiento se tuvieron tres réplicas
para un total de 21 unidades
experimentales.
Se utilizó medio de cultivo PDA (papa
dextrosa agar) siguiendo las
recomendaciones del fabricante
(OXOID®). Se pesaron 39 g de medio
PDA en una balanza, el polvo de PDA se
diluyó en un Erlem Meyer aforado con
1000 mL de agua destilada. Para
esterilizar el medio se utilizó un
autoclave del tipo Tuttnauer® a 120oC y
1 atmosfera de presión durante 20
minutos. Luego de autoclavar y antes de
que solidificara el medio de cultivo, se le
agregó 3 ml/1000 ml de ácido láctico al
25% para evitar la contaminación por
bacterias. El medio de cultivo fue
distribuido en placas Petri de 90 mm,
este proceso se llevó a cabo en una
cámara de flujo laminar para mantener la
asepsia.
Como antagonista se utilizó el hongo
Trichoderma parareesei. La cepa de
hongo fue donada por la Dra. Rosa
Hermosa de la Universidad de
Salamanca de España. 
Las cepas de Rhizoctonia solani (JR-19)
y Phytophthora capsici (JP-19) utilizadas
en esta investigación fueron
suministradas por la Licda. Socorro
García, investigadora en el Instituto
Dominicano de Investigaciones
Agropecuarias y Forestales (IDIAF).
La cepa de Fusarium spp.fué
previamente aislada de plantas huésped
que presenten los síntomas y signos de la
enfermedad causada por éstos.  Luego
que él y/o los microorganismos se
desarrollaron, con una aguja de
disección se colocó una muestra en un
portaobjeto y un cubre objeto para
microscopio con agua destilada para
examinar las muestras y comprobar en
base a la morfología de las esporas y
micelio si correspondía a Fusarium.
Comprobado esto, según la metodología
de Quilambaqui, (2005) se extrajeron
muestras del mismo para colocarlas en
placas con medio PDA más ácido láctico
y se incubaron en una estufa del tipo
Binder® a 28 oC durante 72 horas.
Luego que el patógeno se desarrolló se
extrajeron cilindros de 0.5 cm de
diámetro de la parte de mayor
crecimiento con un sacabocado y una
aguja de disección para colocarlo en el
centro de un medio fresco para obtener
un cultivo puro. Las placas se cubrieron
con papel Parafilm® y se mantuvieron a
4 oC dentro de una nevera del tipo
Whirlpool®
Para obtener el Micoparasitismo del
antagonista (Trichoderma parareesie)
que es la relación en la que Trichoderma
(hongo parásito) se beneficia del hongo
hospedador, del que obtiene nutrientes
Antibiosis de Trichoderma parareesei
Consiste en la inhibición del crecimiento
de un organismo por los metabolitos
secundarios producidos por T.
parareesei, sin que medie contacto físico
Resultados
Los resultados de la variable diámetro
de crecimiento analizados en la
investigación se presentan en la Tabla
4.1 (ver anexos).
El tratamiento donde se alcanzó el
mayor diámetro de crecimiento lo
registró el antagonista en la combinación
del TP+FS con 8.5 cm, mientras que el
menor diámetro lo registró Fusarium
solani con 0 cm (Tabla 4.1).En estos
resultados se puede observar que de
acuerdo al análisis de varianza (Anexo
2) y a las comparaciones de medias
realizadas por la prueba de Tukey(p≤
0.05) se detectó que existen diferencias
estadísticamente significativas. Estas
sin aportarle nada a cambio, causándole
estrés o incluso la muerte (Pérez, 2014).
Se determinó por la escala que proponen
Ezziyyani et al. (2004). La evaluación se
hizo al momento en que uno de los
componentes control alcance el diámetro
total en una placa Petri.
entre ellos (Pérez, 2014). Se evaluó el
porcentaje de inhibición del diámetro de
crecimiento (PIDC) mediante cultivo
dual al momento donde no existía
contacto físico entre el antagonista y el
patógeno en estudio
diferencias se deben posiblemente a que
los patógenos crecieron más sin la
presencia de T. parareesei, mientras que
en el antagonista, la diferencia se marca
únicamente en el tratamiento TP+PI
posiblemente por la agresividad y
rapidez de crecimiento de P. infestans
(Gráficos 4.1 y 4.2).
Estos resultados son semejantes a los
obtenidos por Benitezet al. (2004),
quienes en su estudio académico
consideran que Trichoderma lignorumha
sido ampliamente utilizado como agente
de bicontrol como mecanismo de acción
frente a fitopatógenos demostrando tener
mayor agresividad y rapidez de
crecimiento.
Micoparasitismo del Antagonista
En la Tabla 4.2 se muestran los niveles
de micoparasitismo que ejerce TP (T.
parareesei) sobre cada uno de los
patógenos de acuerdo con la Tabla3.1
propuesta por Ezziyyani et al. (2004).
Según esta tabla el tratamiento TP+FS
(T. parareesei + F. solani) registró el
nivel más alto (4), seguido por el
tratamiento TP+PI (T. parareesei + P.
infestans)  registró un nivel de 2,
mientras que el tratamiento TP+RS (T.
parareesei + R. solani), fue el que
registró el nivel más bajo (0). (Ver
Anexos)
Este alto nivel de micoparistismo
logrado por el tratamiento TP+FS (T.
parareesei + F. solani), se debe
posiblemente por la agresividad y
rapidez de crecimiento que posee T.
parareesei sobre F. solani. Los resultados
Argumentos de otros Autores
Enfermedades de plantas producidas por
hongos, debido a su ubicuidad, a su
facilidad para ser aisladas y cultivadas, a
su crecimiento rápido en un gran número
de sustratos y a que no atacan a plantas
superiores
Los mecanismos por los que las cepas
del género Trichoderma desplazan al
fitopatógeno son fundamentalmente de
tres tipos: competición directa por el
espacio o por los nutrientes , producción
de metabolitos antibióticos, ya sean de
de  la variable porcentaje de los
patógenos evaluados en la investigación
se presentan en la Tabla 4.2. (Ver Anexos)
Resultados similares se observaron al
evaluar in vitro diferentes aislados de
Trichoderma contra R. solani aislada de
piña, los que inhibieron el crecimiento
radial de este patógeno en 40-50 % y en
el antagonismo de T. harzianum contra
S. rolfsii.
Los enfrentamientos de aislamientos
nativos de T. harzianum contra Fusarium
oxysporum, en condiciones in vitro,
demostraron la represión del crecimiento
del patógeno por parte del antagonista.
Al crecer, el micelio de Trichoderma
spp. Compitió por espacio y nutrientes
del medio de cultivo y generó un efecto
indirecto de reducción del crecimiento
radial del patógeno, al ocupar su espacio
y extraer los suministros de nutrientes.
naturaleza volátil o no volátil y
parasitismo directo de determinadas
especies de Trichoderma sobre el hongo
fitopatógeno . Durante el
micoparasitismo, el antagonista localiza
al patógeno y se enrolla alrededor de las
hifas de éste, provocando su muerte.
Estos tres mecanismos no son
excluyentes sino que actúan
sinérgicamente en el control de los
patógenos. La importancia relativa de
cada uno de ellos depende de cada pareja
de antagonista-patógeno y de las
condiciones ambientales.
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Anexos