DETERMINACION DE DEL GRUPO SANGUINEO Y RH

ELABORACION: MARZO 2020 CODIGO: MET-QC-22 PAGINA 1 de 5

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

Q.F.B. HERMES DAVID T.L.C. MIRIAM QFB. EDUARDO

PALESTINA PERES SORIA CRUZ REYES MACIAS

QUIMICO ANALISTA ADMINISTRADOR GENERAL GERENTE DELABORATORIO

1. OBJETIVO
Demostrar por medio de una reacción de aglutinación la presencia de los Ag eritrocitarios
A, B y D.

2. SIGNIFICADO CLÍNICO
Alrededor de 1900 Karl Landsteiner descubrió que en el humano existen cuatro tipos de
sangres con respecto a la presencia o ausencia de dos antígenos específicos
denominados A y B. Estos cuatro grupos se conocen actualmente como tipos A, B, AB y
O.
Este último se caracteriza por la ausencia de los antígenos A y B. En 1940 Landsteiner y
Wiener reportaron que el suero de conejo producido contra eritrocitos de mono Rhesus
podía aglutinar los eritrocitos del 85% de una población caucásica. Este antígeno se
designó inicialmente como factor Rh, posteriormente se encontró que existe como seis
antígenos a los cuales Fisher y Race designaron con letras C, D, E, c, d, e. Uno de estos
antígenos, el D es responsable de la condición Rh positivo. La tipificación de eritrocitos en
el laboratorio se realiza con antisueros específicos contra los antígenos A, B y D, y puede
realizarse por métodos en tubo o en portaobjetos.

3. FUNDAMENTO
El reactivo provocará una aglutinación directa de los hematíes que lleven el
correspondiente antígeno ABO y D. La no aglutinación indica en general la ausencia de
antígenos ABO o D
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4. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Tipo de muestra: Sangre total obtenida mediante EDTA como anticoagulante.
Estabilidad. En caso de no procesar en el momento las muestras refrigerar 2-8 °C, la
glicohemoglobina permanece estable por una semana a 2°-8° C en sangre total utilizando
EDTA como anticuagulante.

4.1 PROCEDIMIENTO DE PREPARACION DE LA MUESTRA

Colocar la muestra en un mezclador durante 5 min. Previos a analizar.

5. PREPARACIÓN DEL PACIENTE

 El paciente se debe presentar al laboratorio de 7 a 12 de la mañana.
 El paciente para este tipo de muestras debe presentarse en ayuno de al menos 8
horas y máximo de 12 horas.
 En caso de pacientes hospitalizados, ambulatorios graves, bebes, muestras únicas
o muestras de alto valor biológico, las muestras serán tomadas y analizadas en las
condiciones que el medico solicite y crea conveniente para su diagnóstico,
vigilancia médica y/o tratamiento.

6. MATERIAL
 Placa oscilatoria
 Pipetas automátizadas
 Puntas para pipeta 5 - 200l
 Gasa o papel absorbente
 Aplicadores de madera

7. EQUIPO
 Cronometro
 Centrifuga
 Mezclador de tubos
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8. EQUIPO DE BIOSEGURIDAD
 Bata blanca
 Guantes de latex
 Zapato cerrado antiderrapante
 Lentes de seguridad
 Cubre bocas

9. REACTIVOS
 Reactivo anti- A
 Reactivo anti - B
 Reactivo anti - D

ESTABILIDAD: Los componentes del reactivo son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del frasco cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2 – 8°C,
protegidos de la luz y se evita su contaminación.

10. PROCEDIMIENTO
10.1 Condiciones del ensayo
 Volumen de la muestra: 500 µl
 Temperatura: ambiente

10.2 Procedimiento
1. Se obtiene aproximadamente 5 ml de sangre venosa y se colocan en un tubo
con
EDTA (0.1 ml de EDTA al 1% por cada ml de sangre).
2. Depositar 2 gotas de sangre en tres diferentes divisiones de un portaobjetos.
3. Agregar de izquierda a derecha una gota del antisuero anti-A, una gota de anti-
B y una gota de anti-D respectivamente.
4. Mezclar los reactivos con un aplicador de madera diferente para cada gota.
5. Agitar suavemente en la placa oscilatoria.
6. Buscar la presencia de aglutinación.
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11. RESULTADOS

1. Positivo: La aglutinación constituye un resultado positivo y dentro de las

limitaciones aceptadas para el procedimiento de la técnica, indica la presencia
apropiada de antígeno ABO o D en los hematíes.

2. Negativo: La ausencia de aglutinación de hematíes constituye un resultado

negativo y dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento de la
técnica, indica la ausencia del antígeno apropiado ABO o D en los hematíes.

3. Discrepancias: Si no existe correlación entre los resultados obtenidos con el

grupo directo y el grupo inverso, es preciso realizar más pruebas.

4. Los resultados de células que aglutinen con el control negativo deben excluirse,
puesto que la aglutinación es probablemente causada por el efecto de los
potenciadores macromoleculares del reactivo en células sensibilizadas.
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12. LIMITACIONES
1. Los antígenos ABO no están totalmente desarrollados en el nacimiento, por lo
que pueden darse reacciones más débiles con muestras de neonatos y de cordón
umbilical.
2. Al utilizar el reactivo monoclonal anti A, B, las muestras de los subgrupos A o B
débiles (ej.Ax) pueden dar lugar a falsos negativos o reacciones débiles cuando se
analizan mediante porta, microplacas o gel. Se recomienda pues re-testar las
muestras de subgrupos débiles mediante la técnica en tubo.
3. Los reactivos de Spinreact monoclonales Anti A y Anti B no están validados
para detectar los antígenos Ax, A3, Bx, ni B3 respectivamente. En consecuencia,
no debe exigirse reactividad al reactivo monoclonal Anti A , Anti B frentes estos
subgrupos débiles.
4. Muestras conservadas pueden dar reacciones mas débiles que no muestras
frescas.
5. También pueden darse falsos resultados positivos o negativos debido a:
Contaminación de los materiales del test Conservación inadecuada, concentración
celular, tiempo o temperatura de incubación Centrifugación inapropiada o excesiva
Desviación de las técnicas recomendadas Muestras de cordón umbilical
contaminadas con gelatina de Wharton.
6. El usuario es responsable del funcionamiento de los reactivos en cualquier otro
método distinto de los aquí mencionados.
7. Cualquier desviación de las técnicas aquí recomendadas debería ser validada
antes de su utilización
8. El reactivo Spinreact Anti-D no es adecuado para su utilización con células
tratadas enzimáticamente o resuspendidas en LISS.

13.BIBLIOGRAFIA
Inserto SPINREACT Antia-A, Anti-B, Anti A+B monoclonal, Test en Tubo, Porta, Diamed-
ID y Microplacas, Grupos sanguineos
Inserto SPINREACT Antia-D IgG + IgM monoclonal, Test en Tubo, Porta, Diamed-ID y
Microplacas, Grupos sanguineos