Cabinas Seguridad Biologica Tipos Usos y Esterilizacion

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Cabinas de Seguridad biológica: tipos, uso y esterilización
Conference Paper · March 2017
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Javier Garcia Palomo

Banco Nacional de ADN Carlos III
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CURSO TEÓRICO DE FORMACIÓN
ESPECIALIZADA EN BIOSEGURIDAD
Y BIOCONTENCIÓN
(Universidad de País Vasco, marzo 2017)
CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

Parte I: Tipos, instalación y limpieza
Ponente: F. Javier García Palomo

Responsable del Área de Biocontención de nivel III del Banco Nacional de
ADN Carlos III
CURSO TEÓRICO DE FORMACIÓN ESPECIALIZADA
EN BIOSEGURIDAD Y BIOCONTENCIÓN
Un poco de historia…
Comienzos siglo XX, Robert Koch

Desarrolla en Alemania la primera versión de una cabina
de aislamiento biológico para trabajar con ántrax,
tuberculosis y cólera, después de descubrir cómo
algunos gérmenes podían aerotransportarse.
1909, W.K. Muldford Pharmaceutical Company

(Pennsylvania)
Diseña la primera campana extractora para prevenir la
infección durante la preparación de tuberculina.
Hasta 1940 Su uso y diseño no reglado produce 2456

infecciones que acabaron con 164 muertes (TBC, fiebre Q
y peste bubónica)
1943 año de Guerra Mundial:

• Van den Ende describe formalmente
la 1º cabina, que creaba depresión
mediante una chimenea que destruía
así los gérmenes.
• El mismo año, Hubert Kaempf Jr

diseña y construye la primera Clase
III para US Army
Cabinas Clase III en los
laboratorios de Guerra Biológica
de la U.S. Army, Fort Detrick,
• Se inventan los filtros HEPA
Maryland a comienzos de los 40. (High Efficiency Particulate Air)
1951 Baker Company lanza la primera cabina de

flujo de aire “limpio”, sentando las bases de
diseño de las actuales cabinas:
 Caja de acero inoxidable

 Paneles laterales de cristal
 Casette trasero
 Tuberías para conexión externa
 Ventilador de extracción
 Filtros absolutos de fibra de vidrio
1965 Baker Company lanza la primera
cabina de flujo laminar vertical
(BioGARD), mejorando la protección
del usuario
1970 Nuaire es el primero en fabricar

de acuerdo a norma interna NIH-03-112C
1972 Baker Company lanza la

SterilGARD primera cabina de flujo con
cámara de presurización negativa
rodeando el plenum biocontaminado con
presión positiva, mejorando aun más la
protección del usuario
1982 Thermo Scientific es el primero en fabricar una

cabina biológica de acuerdo a norma TÜV, la primera en
ser examinada por una agencia externa al fabricante
1992 Thermo Scientific es el primero en fabricar una

cabina biológica con frontal motorizado y sello hermético
para aerosoles
1996 Thermo Scientific es el primero

en fabricar una cabina biológica para
el manejo de citotóxicos (de muy
reciente aparición) de acuerdo a norma
específica DIN-12980
1998 Baker Company lanza la SterilGard III , cabina de
clase II/B3 (=A2 ducted). Sigue siendo una de las
cabinas más avanzadas y confortables del mercado
2000 Thermo Scientific es el primero en

fabricar una cabina biológica con motores
brushless
… y hasta ahora
2003 Baker lanza la “Smallgloves” para

farmacia, una cabina de Clase 100 (ISO 5) que
mejora la protección del operador frente una
convencional de flujo horizontal
2007 Labconco lanza la primera cabina que integra

microscopio y reduce vibración y sonido para satisfacer las
crecientes necesidades en cultivo celular.
2010 Telstar lanza la Bio II-Advance, que dice mejorar la

ergonomía y el espacio interior…
CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA (NTP 233)
• Son la primera barrera de protección/contención.

• Diseñadas para proteger al personal, al producto y al
medio ambiente.
• Cuatro tipos de cabinas:
• Cabinas para volátiles (extractoras).
• Clase I
• Clase II
• Clase III
CAMPANAS EXTRACTORAS (NTP 57)

SÓLO PROTEGEN AL PERSONAL
SÓLO ÚTILES PARA VOLÁTILES
Necesidad de neutralización para ácidos/bases
CABINAS DE FLUJO LAMINAR

FRONTAL/HORIZONTAL
•SÓLO PROTEGEN EL PRODUCTO
•EL FLUJO DE SALIDA DE AIRE DA EN LA ZONA DE
RESPIRACIÓN DEL OPERADOR
NO USAR CON
MATERIALES TÓXICOS O
BIOPELIGROSOS
Estándares de certificación
American Standard NSF 49
European Standar EN 12469
CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA (según NTP-233)

VELOCIDAD Radion./ Nivel Protección Protección Protección
TIPO DEL FLUJO
Tipo de flujo
volátiles contención del operador del ambiente del producto
Clase I 0.3 m/s HEPA frontal NO 2,3 NO NO SI
HEPA 70%
Clase II-A1 0.3 m/s recirculado
NO 2,3 SI SI Si
HEPA 70% SI
recirculado (BAJOS
Clase II-A2 0.5 m/s
(Plenum en NIVELES SI SE 2,3 SI SI Si
CONDUCE AL
depresión) EXTERIOR)
HEPA 30%
Clase II-B1 0.5 m/s recirculado SI 2,3 SI SI Si
Conducción exterior
HEPA no
Clase II-B2 0.5 m/s recirculado SI 2,3 SI SI Si
Dos HEPAS NO
Clase III *** RECIRCULADOS. SI 2,3 SI SI Si
DIFERENCIAS ENTRE ESTANDARES
NSF 49 (Americana) EN 12649 (Europea)

Solo para Clase II Clases I, II y III
Subtipos de clase II No hay subtipos
Poco uso para II-A1 o II-B1. Más usada II-A2 y II/A-B3
Amplio uso de II-B2
Flujo vertical 0,5 m/s, varios Flujo vertical 0,4 m/s, un
puntos y equipo específico punto, para operador. 0,2-0,5
para producto
Cualquier método trazable
Aire entrante: método directo Aire entrante: método indirecto
Estanqueidad: “soap-bubble leak Estanqueidad: “soap-bubble” en
test” específico norma EN
Test de limpiabilidad específico Test específico EN
CUALIFICACIÓN DE CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA.
Norma EN12469:2000
Microbiological Challenge Testing for protection: EN12469 adopted this section of NSF49
identically for both testing and acceptance.
Downflow Velocity: EN places a requirement on downflow; NSF does not. However, NSF
requires a larger test sample size and requires traceable test equipment for more verifiable
testing results. This means testing performed per NSF is more reliable and precise/accurate.
Inflow Velocity: NSF is very specific about inflow requirements (which are used to distinguish
between subcategories of the Class II BSC). Using a direct inflow measurement (DIM) as the
primary standard provides repeatable and accurate inflow measurements. EN performs inflow
tests by measuring the airflow above the exhaust HEPA filter and back calculating the
inflow. EN’s methodology allows for calculation errors and any multiple sets of test data can
provide different velocity values. (NSF A2 requires 0.5 m/s, EN requires 0.4 m/s).
Performance Envelope: Defined as the air speed parameters for which the cabinet must
operate, NSF requires that the Class II cabinet must function +/-0.025 m/s of the inflow and
downflow set points. EN does not have a matching specification.
Pressurization Testing: NSF requires that every unit manufactured undergo a “Soap bubble
pressure leak test” to verify the cabinet is of airtight construction. EN only requires a “type-
test” performed by an independent laboratory.
Construction: NSF emphasizes cleanability of contaminated surfaces.
Tipos de cabinas
CABINAS DE CLASE I
•Protegen al personal y al medio ambiente
• Pueden cerrarse frontalmente
• También para isótopos o volátiles con FILTRO adecuado
CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA (NTP 233)

CABINAS DE CLASE II (UNE-EN 12469)
PROTEGEN AL PERSONAL, PRODUCTO Y

MEDIO AMBIENTE
• Varios tipos: A1, A2, B1 y B2.
• Adecuadas para trabajos biológicos
• Sello biológico (tapa frontal)
• Filtros de alta eficacia y flujo
laminar vertical definen cada clase.
CABINAS DE CLASE II CABINAS DE CLASE III
Tipo II-A: Tipo II-B: Tipo III ó C:

R70/E30 R30/E70 R0/E100
0.38 -0,5m/s 0.5m/s Evitan la
exposición por
contacto


CABINAS DE SEGURIDAD
BIOLÓGICA
CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA DE

CLASE III
• Para organismos de nivel IV

• Doble HEPA en extracción y simple
en impulsión
• 100% conducida: no recircula
• 100% sellada (SAS de acceso) y
guantes neopreno para manipulación
Mecanismos de filtración de alta eficacia
Partículas de tamaño Partículas mayores Partículas más pequeñas

similar al hueco de las que el hueco siguen que el hueco se
fibras llegan más lejos el flujo hasta que amontonan entre ellas y
(MPPS). impactan y adhieren con el gas portador
Se utilizan para hasta que son retenidas
caracterizar el filtro por uno de los dos
anteriores; más fácil a
baja velocidad
Electrostática:
Partículas cargadas (-)
se pegan a fibras (+)
Filtros ABSOLUTOS
Most Penetrating Particle Size (MPPS)
Filtros ABSOLUTOS
(Clases según norma EN1822-1)
•Compuestos por mallas de fibras de diámetros 0,5µm y 2µm
•Espacio entre fibras determina su eficacia (MPPS)
•No sirven para elementos volátiles ni vapores, por su modo de trabajo
Filtros ABSOLUTOS
Filtros HEPA
High Efficiency Particulate Air
Hueco entre fibras de 0,3µm
Filtros ULPA
Ultra Low Penetration Air
Hueco entre fibras de 0,12µm

Instalación: Volúmenes prohibidos
30 cm
20 cm
15 cm
100 cm
Volúmen prohibido
Volumen prohibido
Volumen prohibido alrededor de una CSB.
Además, en altura 40 cm libes. Volumen libre 30 cm
Para conducidas, el extractor se sitúa al final de la línea,
debe llevar anti-retorno y alarma de fallo
Volúmenes prohibidos y libres alrededor de una centrífuga

Instalación: Volúmenes prohibidos
120 cm
100 cm
120 cm
200 cm 150 cm
300 cm
Poyata
Volúmenes libres recomendados alrededor de una CSB


Instalación: Flujos de aire
100 cm
150 cm
split
Distancia recomendada para una CSB ubicada junto a puertas o difusores HVAC de techo

Buenas prácticas microbiológicas
La forma más fácil de romper

el flujo laminar en una
cabina es mover demasiado los
brazos

ANTES DE EMPEZAR
• Encienda el flujo laminar, limpie/rocie con

desinfectante y espere diez minutos:
Utilice protección adecuada al trabajo (bata,
guantes nitrilo/manguitos, máscara, pantallas, …)
• Bayetas con bajo nivel de extraíbles y/o
“salvamanteles”, nunca “papel mecha”.
• Introduzca todo lo que se vaya a utilizar y
espere a que se “limpie” de partículas.
• Rocíe con desinfectante antes de introducirlo.

No use mecheros de
alcohol (asas estériles
desechables, hornos
esterilizadores
eléctricos).
Trabajar varias Utilice quitasatos (A) con trampas de

personas dentro de vacío (B) y líquidos desinfectantes en
una cabina suele ser el interior. La línea de vacío (D) debe
causa de estar protegida también por filtro
contaminación. hidrófobo de 0,45µm (C).

No tape las rejillas frontales ni traseras

con ningún objeto ni con los brazos.
Objetos en la zona trasera alejados de
rejilla frontal unos 10cm.
ORDEN limpio a la izquierda y sucio a la
derecha (recipiente de residuos con
desinfectante y bolsa residuos).
Zona de trabajo en centro (toalla abs.)

DURANTE EL TRABAJO
•No saque las manos si no es necesario. Si
lo hace, que sea lenta y
perpendicularmente a la apertura frontal
flujo. Aguarde unos segundos antes de
volver a trabajar cuando vuelva a
introducir las manos.
• Antes de sacar de la BSC un material
potencialmente peligroso, esterilícelo con
medios adecuados dentro (lejía,
PropopanoAF©, Virkon®,...
• Trabaje con lentitud y no acumule
demasiadas cosas dentro de la cabina.

DURANTE EL TRABAJO
•No mantenga tubos abiertos en posición
vertical.
•No pase los brazos por encima de tubos
abiertos: tápelos lo antes posible.
•Los tapones sólo se dejan boca-arriba y http://www.nuaire.co
fuera de la zona de trabajo. m/support/resources/
training-videos
•Las placas Petri deben mantener en todo
momento su tapa puesta, al menos apoyada
•Las técnicas de “sala blanca” son las más
apropiadas para el trabajo en BSL-3

AL FINALIZAR EL TRABAJO
Limpie las superficies con un desinfectante adecuado, no clorado.
Cierre tapa frontal y ponga el U.V. al menos 30 minutos.
Semanalmente levante también las rejillas
LIMPIE SEGÚN RECOMENDACIONES DE SALA LIMPIA

Limpieza y desinfección
Unas definiciones…
BIOCIDA
Químico gas o líquido que inactiva uno o
más microrganismos, matando o previniendo
su reproducción
EFICACIA DE UN BIOCIDA
Capacidad de inactivar en condiciones
dadas de ºC, HR y [] Valor D
Tiempo requerido, a una
FACTORES QUE AFECTAN LA EFICACIA DE UN temperatura, dada para
BIOCIDA obtener una reducción del
Tiempo de contacto, presencia de materia 90% del valor inicial
orgánica, sustrato, reto biológico, Expresado en unidades de
reducción logarítmica
facilidad de dispersión, alérgenos,..

Valor D
Tiempo requerido, a una temperatura
dada, para obtener una reducción del
90% del valor inicial
Expresado en unidades de reducción
logarítmica como valor SAL (“Sterility
Assurance level)
106 CFU
1 CFU
SAL 6log
Unas definiciones…
LIMPIEZA MECÁNICA
SANITIZANTE 3 log
3 log VIRUS
DESINFECTANTE 4 log BACTERIAS
5 log HONGOS
ESTERILIZANTE 6 log
¿Cuándo descontaminar una cabina?
Antes de reparación/intervención
Antes de verificación
Antes de cambio de filtros (BI-BO)
Técnica BI-BO
Al cambiar de lugar (fugas en sellos)

Al cambiar de programa de trabajo
Después de un derrame importante
• DERRAME de AGENTE BIOLÓGICO, con o sin producción de aerosoles o volátiles

• PROTOCOLO DE ACTUACIÓN para áreas de NIVEL II
Derrame y salpicaduras por

En CSB, SOLO en Inmediatamente contacto con papel impregnado Por las vías designadas
mediante papel en solución apropiada (EPA) para material
superficies absorbente o similar durante el tiempo aconsejado contaminado
por el fabricante.
• El exceso de líquido
• Derrame por dilución en
mediante tubo flexible
Gran derrame en solución apropiada (EPA)
conexionado a la válvula de
Inmediatamente
CSB, con líquido POR durante el tiempo aconsejado
drenaje, por gravedad a
Pare el trabajo y por el fabricante.
DEBAJO de las cierre válvula de • Salpicaduras de superficie
un recipiente adecuado.
rejillas • El resto, con papel
drenaje por contacto con papel
absorbente y por las vías
impregnado en solución
designadas para material
apropiada.
contaminado.
NO APAGUE LA CABINA DURANTE EL PROCESO

Utilice siempre el EPI adecuado: bata, guantes, máscara/respirador,…
Cuando termine, deje la cabina encendida 10 minutos para completar el ciclo de limpieza.
Notifique el incidente a su supervisor de zona para que evalue la necesidad de una descontaminación de filtros HEPA y
motores.

¿Qué biocida elegiremos?
• EFECTIVIDAD ESPECÍFICA (ABSA App)
• CAPACIDAD DE DISPERSIÓN
• Atraviese filtros HEPA
• COMPATIBILIDAD DE MATERIALES
• TIEMPOS DE EJECUCIÓN y facilidad de uso
• BAJA TOXICIDAD AMBIENTAL Y VLA
• FACILIDAD DE DETECCIÓN (olor, color,…)
• Equipo necesario: costes de adquisición, mto. y uso

Métodos de desinfección más

utilizados
• OZONO/UV
• FORMALDEHÍDO (Prohibido en UE)
• PERÓXIDO DE HIDRÓGENO (Europa)
• DIÓXIDO DE CLORO (América, NSF)
Desinfección por UV
Método de acción
Radiación electromagnética en el rango de 254nm causa rotura de
enlaces en ácidos nucleicos
Beneficios
Su uso en cabinas para PCR solo es aconsejable para “eliminar”
restos no deseados de ácidos nucleicos
Contras
Existen límites de exposición (VLA-ED) para humanos antes de
producir quemaduras:
• 30-80 minutos un UV en el centro de una habitación
• 12-24 minutos delante de la cabina con UV encendido
• 28-44 segundos para manos dentro de cabina con UV encendido
Desinfección por UV
Consejos
En USA, el NIH, ABSA (2000) han desaconsejado su uso en BSC tipo
II, incluso la NSF.
• Debido a su baja capacidad de penetración, los microorganismos
fácilmente escapan de su acción a la sombra de partículas o
accesorios del interior.
• No destruye endotoxinas ni alérgenos
• Su acción depende de la humedad relativa y temperatura:
• >70%HR su actividad cae en picado
• Temperatura óptima 25ºC: flujos de aire baja ºC
• Se necesitan limpiar con frecuencia y comprobar su potencia
• Producen ozono, también perjudicial y que degrada ciertos
materiales.
No usar como método de desinfección en BSC
Desinfección por OZONO GASEOSO (O3)
Potente oxidante, disocia anillos aromáticos

VLA-ED= 0,1 ppm - Degradación en 20 min.
Uso a 20-30 ppm y 90% HR
Reducción 3-4 log
Incompatibilidad con plástico y gomas
No destruye endotoxinas
Desinfección por formaldehído
Metilación de ADN
VLA-ED= 0,3 ppm
Difusión por calentamiento/despolimerización
Uso a 600-8000 ppm, 65% HR, 25ºC y 6-16 horas
Reducción 4-6 log – Bajo coste
Microcondensación, residuos, inflamable
CARCINÓGENO 1A (prohibición UE) -> Glutaraldehído
Necesidad de catalización y sellado (= 15 horas)
Desinfección por peróxido de hidrógeno
• Aeronebulización (HPV): Bioquell, Aeroturbex, TWC220

• Vaporización (VPH): Steris
• Nebulización de gas-plasma (iHP*): SixLog
No carcinógeno
VLA-ED= 1 ppm - Uso a 750 ppm
Degradación en agua y O2.
Reducción >5 log
Sin residuos (salvo microcondensación)
Alto coste de adquisición
Pobre difusión/penetración
(según tamaños de partículas)

Comparativa de métodos
Condiciones
[H2O2] VALOR D TIEMPOS
ambientales
HPV NO ≈35%
>5 log
VHP NO ≈35% 3-10
HORAS
iHP NO 7% + Ozono 7 log ?

Desinfección por dióxido de cloro

Potente oxidante, interrumpe
transporte de membrana
VLA-ED= 0,1 ppm , NO CARCINÓGENO
Uso a 300 ppm y >70% HR
Ciclos de 3-4 horas
Elevada difusión – Penetra en agua
• Mínimos residuos
• Bajo coste de adquisición – uso
• 6 log reducción
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CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

Ponente: F. Javier García Palomo

Comienzos siglo XX, Robert Koch

1909, W.K. Muldford Pharmaceutical Company

Hasta 1940 Su uso y diseño no reglado produce 2456

1943 año de Guerra Mundial:

• El mismo año, Hubert Kaempf Jr

1951 Baker Company lanza la primera cabina de

 Caja de acero inoxidable

1970 Nuaire es el primero en fabricar

1972 Baker Company lanza la

1982 Thermo Scientific es el primero en fabricar una

1992 Thermo Scientific es el primero en fabricar una

1996 Thermo Scientific es el primero

2000 Thermo Scientific es el primero en

2003 Baker lanza la “Smallgloves” para

2007 Labconco lanza la primera cabina que integra

2010 Telstar lanza la Bio II-Advance, que dice mejorar la

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA (NTP 233)

• Son la primera barrera de protección/contención.

CAMPANAS EXTRACTORAS (NTP 57)

CABINAS DE FLUJO LAMINAR

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA (según NTP-233)

Clase I 0.3 m/s HEPA frontal NO 2,3 NO NO SI

DIFERENCIAS ENTRE ESTANDARES

NSF 49 (Americana) EN 12649 (Europea)

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA (NTP 233)

PROTEGEN AL PERSONAL, PRODUCTO Y

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

CABINAS DE CLASE II CABINAS DE CLASE III

Tipo II-A: Tipo II-B: Tipo III ó C:

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA DE

• Para organismos de nivel IV

Mecanismos de filtración de alta eficacia

Partículas de tamaño Partículas mayores Partículas más pequeñas

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

Volúmenes libres recomendados alrededor de una CSB

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

La forma más fácil de romper

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

• Encienda el flujo laminar, limpie/rocie con

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

Trabajar varias Utilice quitasatos (A) con trampas de

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

No tape las rejillas frontales ni traseras

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

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DESINFECTANTE 4 log BACTERIAS

¿Cuándo descontaminar una cabina?