INSTRUCCIONES DE USO –

MEDIOS EN PLACA LISTOS

PARA USAR
PA-256506.02 Rev.: Junio de 2003

BD CDC Anaerobe Agar + 5% Sheep Blood

USO PREVISTO
BD CDC Anaerobe Agar with 5% Sheep Blood (agar BD para anaerobios de los CDC con
sangre de carnero al 5%) es un medio no selectivo para el aislamiento y cultivo de bacterias
exigentes y anaerobias obligadas a partir de muestras clínicas y materiales no clínicos.

PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO

Método microbiológico.
El agar para anaerobios de los CDC con sangre de carnero al 5% fue formulado por Dowell et al
de los Centers for Disease Control and Prevention como medio enriquecido no selectivo para el
aislamiento y cultivo de una amplia variedad de microorganismos anaerobios obligados, en
especial los que se encuentran en muestras clínicas1-4. El medio contiene agar de soja
Trypticase suplementada con agar adicional como base de nutrientes. El cloruro sódico
mantiene el equilibrio osmótico. La sangre de carnero, la hemina, la cistina y la vitamina K1
proporcionan factores de crecimiento necesarios por determinados anaerobios obligados1,5-7.
Este medio ha demostrado favorecer el crecimiento de Prevotella melaninogenica,
Fusobacterium necrophorum, Clostridium haemolyticum, además de determinadas cepas de
Actinomyces israelii y Bacteroides thetaiotaomicron2. Asimismo, se ha reseñado una variación
de colonias de menos lisas a rugosas de Bacteroides fragilis en comparación con el agar sangre
Schaedler5.

REACTIVOS
BD CDC Anaerobe Agar with 5% Sheep Blood
Fórmula* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de caseína 15,0 g
Digerido papaico de harina de soja 5,0
Cloruro sódico 5,0
Agar 20,0
Extracto de levadura 5,0
Hemina 0,005
Vitamina K1 0,01
L-cistina 0,4
Sangre de carnero, desfibrinada 5%
pH 7,5 ± 0,2
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.

ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL

Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su
envase original hasta momentos antes de su utilización. Evitar la congelación y el
sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la
etiqueta del paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana cuando se
almacenan en un área limpia a una temperatura de 2 – 8 °C.

PA-256506.02 -1-
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar durante 48 – 72 h en atmósfera
anaerobia (por ejemplo, el sistema anaerobio BD GasPak).
Cepas Resultados del crecimiento
Bacteroides fragilis ATCC 25285 Crecimiento de bueno a excelente
Clostridium perfringens ATCC 13124 Crecimiento de bueno a excelente
Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 Crecimiento de bueno a excelente
Peptostreptococcus anaerobius ATCC 27337 Crecimiento de bueno a excelente
Porphyromonas levii ATCC 29147 Crecimiento de regular a bueno
Sin inocular Entre rojo y rojo oscuro (color sangre)

PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD CDC Anaerobe Agar with 5% Sheep Blood (placas Stacker de 90 mm). Controladas
microbiológicamente.

Material no suministrado
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.

Tipos de muestras
Se trata de un medio no selectivo para el aislamiento y el cultivo de anaerobios estrictos para
todo tipo de muestras clínicas (véase también CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Emplear las técnicas aprobadas para la selección, la
recogida y el transporte de muestras anaerobias8-11. Se deben utilizar medios de transporte
adecuados, por ejemplo, BD Port-A-Cul.

Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La
placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras con
flora mixta.
Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en
una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego para hacer el aislamiento a partir de
esta área inoculada.
Para el aislamiento de bacterias estrictamente anaerobias se recomienda el uso de al menos
dos medios para el total de las muestras. Una placa, de BD CDC Anaerobe Agar with 5%
Sheep Blood, se incuba en atmósfera anaerobia después de la inoculación. La segunda placa,
por ejemplo, de BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood, se debe incubar en atmósfera
aerobia con dióxido de carbono al 5 – 10% para el aislamiento de los patógenos aerobios que
puedan estar presentes. Además, también debe inocularse un medio anaerobio selectivo para
los anaerobios estrictos gram negativos, tal como BD Schaedler Kanamycin-Vancomycin
Agar with 5% Sheep Blood. Una manera fácil y eficaz de obtener las condiciones anaerobias
adecuadas es mediante el uso de sistemas anaerobios BD GasPak. Independientemente del
sistema anaerobio que se utilice, es importante incluir un indicador de anaerobiosis tal como el
indicador anaerobio desechable GasPak. Para obtener más detalles acerca del procesamiento
de muestras, consultar las referencias8-10,12,13.
Incubar las placas en la atmósfera apropiada a 35 – 37 °C por lo menos 48 h y hasta un máximo
de 7 días antes de considerar el resultado como negativo.

Resultados
Después de la incubación, la mayoría de las placas mostrarán un área de crecimiento
confluente. Dado que el procedimiento de extensión de la muestra es, de hecho, una técnica de
“dilución”, se depositan cada vez menos microorganismos en las áreas en que se realiza. Por
consiguiente, una o más de estas áreas presentarán colonias aisladas de los organismos que
contenga la muestra. Por otra parte, el crecimiento de cada microorganismo podrá medirse
semi-cuantitativamente basándose en el crecimiento ocurrido dentro de las áreas en que se
realiza la extensión.

PA-256506.02 -2-
En BD CDC Anaerobe Agar with 5% Sheep Blood crecerán todos los organismos anaerobios
estrictos y facultativos. El crecimiento en este medio anaerobio se compara con el de la placa
BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood incubada en atmósfera aerobia, que contendrá
solamente anaerobios facultativos. Finalmente el crecimiento en BD Schaedler Kanamycin-
Vancomycin Agar with 5% Sheep Blood se compara con el crecimiento de los otros dos
medios Si se encuentran presentes cultivos mixtos de anaerobios estrictos y facultativos, se
deben realizar subcultivos apropiados de medios anaerobios en medios no selectivos,
incubados en atmósferas aerobia y anaerobia, con el fin de confirmar que el aislado es un
anaerobio estricto.
Consultar los textos correspondientes para obtener información de los procedimientos
adicionales de diferenciación e identificación8-10,14.

CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

En BD CDC Anaerobe Agar with 5% Sheep Blood, que es uno de los medios estándar no
selectivos para el aislamiento de anaerobios estrictos, crecen los siguientes organismos:
Bacteroides, Prevotella, Porphyromonas, Fusobacterium, Clostridium, Peptostreptococcus,
bacilos anaerobios estrictos no formadores de esporas (por ejemplo, el antiguo género
Eubacterium), Mobiluncus, Actinomyces y muchos otros4,9,10,14-16.
Tener en cuenta que la velocidad de crecimiento de los anaerobios estrictos varía
considerablemente: Mientras que Bacteroides fragilis crecerá bien después de 24 horas,
Mobiluncus o cepas de Porphyromonas necesitan 4 – 5 días y Actinomyces puede necesitar 1
– 3 semanas o más para producir colonias visibles en el pocillo. Si los cultivos son negativos
después de 2 – 3 días de incubación, volver a incubar en atmósfera anaerobia durante 2 – 3
días más. Si se sospecha Actinomyces, se deben inocular cultivos especiales que se
examinan después de 1, 2 y finalmente 3 semanas de incubación.
El medio no es selectivo específicamente de organismos anaerobios estrictos. Cuando se
incuba en atmósfera anaerobia, en este medio crecerán también organismos facultativos. Por
consiguiente es importante comparar el resultado de los cultivos anaerobios con los de una
placa incubada en atmósfera aerobia si se obtienen cultivos mixtos.
BD CDC Anaerobe Agar with 5% Sheep Blood no contiene glucosa ni otros azúcares. Por
tanto, los organismos muy asacarolíticos, tales como los lactobacilos y determinados
clostridios sacarolíticos crecerán muy lentamente en este medio. BD Schaedler Agar with
Vitamin K1 and 5% Sheep Blood es el medio de preferencia para el aislamiento no selectivo
de dichos organismos.

Son altos el número y la variedad de especies bacterianas que actúan como agentes
infecciosos. Por tanto, antes de utilizar sistemáticamente el medio para microorganismos de
reciente descripción o raramente aislados, el usuario debe analizar su conveniencia mediante
cultivos puros del microorganismo en cuestión.

REFERENCIAS
1. Dowell, V.R., Jr., G.L. Lombard, F.S. Thompson, and A.Y. Armfield. 1977. Media for
isolation, characterization, and identification of obligately anaerobic bacteria. CDC
laboratory manual. Center for Disease Control, Atlanta.
2. Dowell, V.R., Jr., and T.M. Hawkins. 1987. Laboratory methods in anaerobic bacteriology.
CDC laboratory manual. HHS Publication No. (CDC) 87-8272. Centers for Disease Control,
Atlanta.
3. Rodloff, A.C., P.C. Appelbaum, and R.J. Zabransky. 1991. Cumitech 5A, Practical
anaerobic bacteriology. Coordinating ed., A.C. Rodloff. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
4. Isenberg, H.D. (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
5. Starr, S.E., G.E. Killgore, and V.R. Dowell, Jr. 1971. Comparison of Schaedler agar and
Trypticase soy- yeast extract agar for the cultivation of anaerobic bacteria. Appl. Microbiol.
22:655-658.

PA-256506.02 -3-
6. Gibbons, R.J., and J.B. MacDonald. 1960. Hemin and vitamin K compounds as required
factors for the cultivation of certain strains of Bacteroides melaninogenicus. J. Bacteriol.
80:164-170.
7. Wilkins, T.D., S.L. Chalgren, F. Jimenez-Ulate, C.R. Drake, Jr., and J.L. Johnson. 1976.
Inhibition of Bacteroides fragilis on blood agar plates and reversal of inhibition by added
hemin. J. Clin. Microbiol. 3:359-363.
8. Holdeman, L.V., E.P. Cato, and W.E.C. Moore (ed.). 1977. Anaerobe laboratory manual,
4th ed. Virginia Polytechnic Institute and State University, Blacksburg.
9. Engelkirk, P.G., J. Duben-Engelkirk, and V.R. Dowell, Jr. 1992. Principles and practice of
clinical anaerobic bacteriology. Star Publishing Co., Belmont, Calif.
10. Summanen, P., E.J. Baron, D.M. Citron, C.A. Strong, H.M. Wexler, and S.M. Finegold.
1993. Wadsworth anaerobic bacteriology manual, 5th ed. Star Publishing Co., Belmont,
Calif.
11. Miller, J.M., and H.T. Holmes. 1995. Specimen Collection, transport, and storage. In:
Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of
clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
12. Murray, P.R., and D.M. Citron. 1991. General processing of specimens for anaerobic
bacteria. In: A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and H.J. Shadomy
(ed.), Manual of clinical microbiology, 5th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
13. Forbes, B.A. and P.A. Granato. 1995. Processing specimens for bacteria. In: Murray, P. R.,
E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
14. Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.). 1995. Manual
of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
15. Thomson Jr., R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen Collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
16. Chapin, K.C., and T.-L. Lauderdale. 2003. Reagents, stains, and media: bacteriology. In:
Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of
clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

ENVASE Y DISPONIBILIDAD
BD CDC Anaerobe Agar with 5% Sheep Blood
Nº de cat. 256506 Medios en placa listos para usar, 20 placas

INFORMACIÓN ADICIONAL
Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD.

BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16
Reception_Germany@europe.bd.com

BD Diagnostic Systems Europe

Becton Dickinson France SA
11 rue Aristide Bergès
38800 Le Pont de Claix/France
Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292 http://www.bd.com

BD, BD logo, Trypticase, Stacker, Port-A-Cul and GasPak are trademarks of Becton, Dickinson and
Company
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
 2003 Becton, Dickinson and Company

PA-256506.02 -4-