INFORME N°3 DE LABORATORIO VIRTUAL

HAROLD JESÚS FAJARDO ROMERO

ING. DIANA SANCHEZ FORERO

UNIVERSIDAD DE SAN BUENVENTURA SECCIONAL CARTAGENA

FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERIA QUIMICA
CARTAGENA D T y C – BOLIVAR
2018
 INTRODUCCIÓN
En el siguiente informe de laboratorio se hablará sobre los resultados alcanzados en el
funcionamiento de un sistema de cultivo microbiano tipo batch, en la producción de
Acetobacter suboxydans para la bioconversión de sorbitol a sorbosa.
Los cultivos discontinuos se emplean generalmente para cultivar células para la
producción deseada de metabolitos, ya que es simple e implica la menor cantidad de
mano de obra y equipos en comparación con otros modos de cultivo, sin embargo, estos
cultivos funcionan como sistemas cerrados y, por lo tanto, presentan condiciones de
crecimiento altamente dinámicas y tienen menos rendimiento y productividad del
producto deseado.
 OBJETIVOS

 Estudiar el crecimiento del lote y la cinética de producción de A. suboxydans y

establecer los parámetros cinéticos clave mediante la simulación del modelo y el
experimento.
 FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA
Bioconversión de sorbitol a sorbosa.
La bioconversión de sorbitol en sorbosa es un paso intermedio en la producción comercial
de ácido L-ascórbico (Vitamina-C) (Kulhanek, 1970, Bourdant, 1990). Implica la oxidación
microbiana de D-sorbitol a L-sorbosa por Acetobacter suboxydans. La oxidación química
de D-sorbitol conduce a la formación de ambos enantiómeros de sorbosa, mientras que la
oxidación microbiana produce solo L-sorbosa y, por lo tanto, es necesario centrarse en la
optimización de la fermentación para la producción económica de sorbosa.
La fermentación de sorbosa discontinua está severamente inhibida por el sorbitol. La tasa
de oxidación de sorbitol disminuye al aumentar la concentración inicial de sorbitol
(Damodaran y Subramanian, 1951, Bonomi et al., Srivastava y Lasrado, 1998). Se ha
observado que la oxidación completa de sorbitol con -en un período de tiempo razonable
es posible solo hasta - a una concentración inicial de sorbitol de 200 g / L hay una fuerte
disminución en los rendimientos de sorbose cuando las concentraciones iniciales de
sorbitol están por encima del límite (Rosenberg et al 1993).
 PROCEDIMIENTO

 Mantener Los cultivos en agar inclinado con la composición (g / l): sorbitol,

5,0; polvo de extracto de levadura, 5.0; dihidrogenofosfato de amonio, 3.0; sulfato
de magnesio, 1.0; agar 20. El pH inicial debe mantenerse como 6.0. Tomar
muestras después de crecimiento 48 horas a 30 º C y preservar los cultivos a 4 º C.

 Transferir un bucle lleno de microorganismos desde la inclinación a un medio de

10 ml en tubos de ensayo con la composición (g / l): sorbitol, 5,0; polvo de extracto
de levadura, 5.0; dihidrogenofosfato de amonio, 3.0; sulfato de magnesio, 1.0; pH
6.0. Los tubos de ensayo se incubarán a 30 º C durante 72 h.

 Los inóculos en crecimiento del tubo de ensayo se transfieren luego a matraces de

1,0 litros de capacidad que contienen 100 ml de medio de composición (g / l)

 Los matraces se incuban en un agitador rotativo a 30 ºC y 250 rpm.

 La transferencia subsiguiente de inóculos del matraz de agitación al fermentador

tiene que hacerse cuando la concentración de biomasa en el matraz de agitación
es de aproximadamente 2,8 a 3,0 g / l.

 Para el cultivo de lotes microbianos, el medio se prepara y se llena en el

biorreactor. El inóculo de crecimiento activo se transfiere del matraz de agitación
al biorreactor. La velocidad de aireación y la velocidad de agitación deben
mantenerse a 2,2 vvm y 700 rpm, respectivamente. La temperatura debe
mantenerse a 30 º C y el pH a 6.0 mediante la adición automática de NaOH 3 N y
HCl 3 N.

 Se toman muestras intermedias para evaluar la concentración de biomasa, el

sustrato no convertido (sorbitol) y el producto (sorbosa).

 Las concentraciones de sorbitol y sorbosa deben medirse por HPLC, usando una
columna supelcosil de 25 cm X 4.6 cm equipada con detector RI y usando
acetonitrilo-agua (75:25) como eluyente con un caudal de 1 ml / min a
temperatura ambiente.
 PREGUNTAS
1. ¿Modelo no estructurado puede describir?
R/ B) Fase de registro del cultivo microbiano.
2. ¿Los aceptores finales de electrones en el cultivo An-aerobio son?
R/ A) Intermedios de la ruta metabólica.
3. ¿Por lo general se aplica el cultivo por lotes alimentados?
R/ A) Producto inhibido fermentaciones.
4. ¿Características de crecimiento equilibrado?
R/ B) Valores constantes de biomasa ADN, ARN, etc.
5. ¿D-Sorbitol a bio-conversión de L-Sorbose es posible por?
R/ B) Cultivo microbiano solamente.
6. ¿Características de cultivo por lotes?
R/ A) Alto tiempo de no producción y baja productividad.
7. ¿Las funciones de mantenimiento en la celda incluyen?
R/ D) Todas las anteriores, sustrato consumido para la renovación del material
celular, sustrato consumido para la movilidad de la célula, mantenimiento de
pH intracelular.
8. ¿La masa celular no es el verdadero reflejo de la actividad celular cómo?
R/ A) Consiste tanto en células vivas como muertas
9. ¿La ventaja del modelo no estructurado es?
R/ C) Es mejor capacidad de predicción en las condiciones dinámicas.
10. ¿La fase de retraso del cultivo podría reducirse?
R/ D) Todas las anteriores, tomando cultura exponencialmente creciente,
tomando un gran tamaño de inóculo, tomando el mismo medio en el
biorreactor que el del matraz de sacudidas.
 CONCLUSIÓN
El cultivo tipo batch nos permiten obtener expresiones para µ, de manera que nos ayuda a
adelantarnos de cuál será la expresión en función de las variables de operación. La
velocidad de formación de biomasa y productos será siempre inversamente proporcional
al tiempo de incremento.
 REFERENCIAS

 http://iitd.vlab.co.in/?sub=63&brch=177&sim=648&cnt=1