EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE EXTRACTOS

ETANÓLICOS Y ACUOSOS DE PROPÓLEO PROCEDENTE DE SANTA ROSA

DE CABAL SOBRE ​Staphylococcus aureus

Octavio Tamayo Toro

Universidad tecnológica de Pereira

RESUMEN

Las abejas son organismos de gran importancia por su papel biológico y las actividades
económicas que de ellas derivan; ya que se pueden obtener productos como miel, jalea real
y propóleo. Siendo este último una sustancia compuesta por una gran cantidad de
componentes químicos como bálsamos, aceites, polen, vitaminas, minerales y proteínas
que le confieren propiedades terapéuticas.

Por tanto el estudio está basado en la obtención de extractos acuosos y etanólicos de

propóleo, para posteriormente evaluar su actividad antibacteriana sobre ​Staphylococcus
aureus, ​microorganismo patógeno y resistente a la penicilina.

Se obtuvo un rendimiento de sólidos solubles mayor para el extracto etanólico y se observa

más efectividad en la actividad antibacteriana a partir del mismo extracto. Por tanto se
sugiere la profundización en el estudio del extracto etanólico de propóleo con fines
investigativos y terapéuticos

Palabras Clave​: Propóleo, extractos etanólicos, extractos acuosos, actividad antibacteriana,

Staphylococcus aureus.

INTRODUCCIÓN

Staphylococcus aureus es una bacteria misma puede acarrear diferentes

presente en la microbiota normal de los afecciones de tipo cutáneo, digestivo,
humanos, pero una infección por la ocular o respiratorio. La importancia del
análisis de dicha bacteria radica en la
gran distribución de la misma; ya que se
reproduce de manera rápida en cualquier
ambiente, desarrollándose y por medio de
su metabolismo produce toxinas, las
cuales usualmente son resistentes a la
penicilina que es el antibiótico más usado,
causando enfermedades producidas por
infecciones, que hasta el día de hoy son
la causa más recurrente de infecciones
que requieren servicio médico
especializado. Partiendo de ello la
implementación de nuevas alternativas
para ser usadas en el tratamiento de
infecciones toma importancia, además
ampliando en las distintas líneas de
investigación el uso compuestos de origen
natural se presenta con más fuerza en la
actualidad debido a las ventajas que estos
presentan.
El propóleo es una sustancia resinosa
elaborada por las abejas melíferas (Apis
mellifera) a partir de los brotes y
exudados de ciertas plantas. Una vez
colectado, el material es enriquecido con
secreciones salivares y enzimáticas [1]
Usado contra los microorganismos
patógenos; la presencia de esta sustancia
al interior de la colmena proporciona un
ambiente inadecuado para el crecimiento
de bacterias y otros microorganismos.[2]
Se caracteriza por estar compuesto en un
55% de resinas y bálsamos aromáticos,
30% de ceras, 10% de aceites esenciales y
5% granos de polen. [3] Se destaca la
presencia de compuestos del tipo
flavonoidales como, las flavonas,
flavones y las flavononas. Se han
reportado alrededor de 38 flavonas, 12
derivados del ácido benzoico, 14
derivados del alcohol cinamílico y el
ácido cinámico, 12 componentes entre
alcoholes, cetonas y fenoles, 7 terpenos,
11 esteroides, 7 azúcares y 2
aminoácidos. [4] Una de las propiedades
más importante del propóleo es su
actividad antimicrobiana, la cual se le
atribuye fundamentalmente a los
flavonoides. [5] Los extractos de
propóleo han sido evaluado sobre
bacterias grampositivas y gramnegativas,
encontrándose una mayor efectividad
sobre las primeras. [6]
Para evaluar la actividad antibacteriana
del propóleo, este es preparado en
extractos etanólicos y acuosos por medio
de una extracción Soxhlet, posteriormente
se evalúa un parámetro como el
rendimiento del extracto soluble total para
cada solvente, obteniéndose mayor
rendimiento en el alcohólico. Para
verificar la efectividad bactericida se
emplea el método de inhibición mínima
microbicida; donde se obtiene actividad
favorable en ambos extractos siendo
mayor en el etanólico debido a la afinidad
de los componentes del propóleo con este
solvente.
MATERIALES Y MÉTODOS
Obtención muestras de propóleo
Se realiza la colecta de propóleo
proveniente del municipio de Santa Rosa
de Cabal (4°52′02″N 75°37′16″O) del
apiario la esperanza, en el periodo de
castración, en el cual se realiza la
extracción de los productos de interés
económico como la miel y jalea real. de
manera que se reúna un total que oscile
entre 150 - 500 g para así tener muestras
representativas.
preparación extractos etanólicos y
acuosos
Se debe pesar 20 gramos de propóleo, el
cual se transfiere a un matraz balón de
250 mL y se le adicionan 200 mL de
etanol al 80 % y se somete a reflujo en
un equipo soxhlet durante una hora, al
cabo de ese tiempo se detiene el reflujo y
se filtra a través de papel de filtro
Whatman No.40, se separa el filtrado y el
sólido residual se somete nuevamente a
reflujo con 200 mL del solvente a
emplear, el nuevo filtrado obtenido se
reúne con el anterior, siendo este total el
extracto final. La preparación de estos
extractos se realiza por triplicado. Se
procede de la misma manera y empleando
volúmenes iguales para la preparación del
extracto acuoso, empleando agua
desionizada.
Determinación de rendimiento de
sustancias solubles totales
​Los extractos totales finales se
transfirieren al matraz de un rotavapor
tipo Büchi y se mantienen en evaporación
hasta la desaparición del solvente. El
sólido obtenido se somete a secado en
estufa a 70 °C durante 2 horas, para
obtener el denominado extracto blando
total. El cálculo del rendimiento de
propóleo estudiado, se realiza empleando
la
ecuación:
Donde
P: es el peso de extracto seco (g)
m: es el peso de muestra (g)
Evaluación de la actividad
Antimicrobiana
​ os microorganismos empleados en el
L sucesivamente con los tubos restantes
estudio pertenecen al cepario del
laboratorio CENBIOTEP de la
universidad tecnológica de Pereira, siendo
certificadas por el mismo. Se trata
entonces de S. aureus ATCC 25923. Las
cepas son conservadas en refrigeración a
4°C en gelosa especial ( marca BBL).
Antes de realizar la determinación del
efecto antimicrobiano del extracto de
propóleo, se debe verificar la viabilidad
de estas evaluando el crecimiento en agar
BHI. [8]
​La evaluación del efecto microbicida de
los diferentes extractos sobre la especies
bacteriana, se realiza empleando el
método de Inhibición Mínima
Microbicida reportado por Chiong y col
[9] y modificado por Rojas [10] de tal
forma qué: se prepara una serie de tubos
en la cual el primero contenga 2 mL de
caldo nutritivo a doble concentración y
los demás contengan la misma cantidad
de caldo a simple concentración. Al
primer tubo se le añaden 2 mL de extracto
de propóleo al 3% (30 mg/mL) de éste se
toma una alícuota de 2 mL que se añade
al tubo siguiente y así se procede
hasta desechar los últimos 2 mL. De esta
forma la concentración del extracto de
propóleo en cada tubo va disminuyendo,
y se evalúa frente a la concentración del
extracto.
Tratamiento estadístico
Los rendimientos promedios de sólidos
solubles totales de las tres réplicas
realizadas tanto para los extractos
etanólicos y acuosos de propóleo a
estudiar , se compararon empleando la
prueba t de Student para medias con un
nivel de confianza del 99%.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Para la determinación del rendimiento de
sustancias solubles totales para la muestra
muestra de propóleo empleando etanol y
agua como solventes:
En la tabla 1 se muestran los resultados
obtenidos en cuanto al porcentaje de
sólidos solubles totales (rendimiento) en
ambos extractos por triplicado y el color
observado en la obtención de los mismos.
Asis[3] la coloración del propóleo
depende de la vegetación existente en las
zonas donde se ubican las colmenas, por
tanto al ser la muestra tomada del mismo
lugar, los colores observados para los
extractos son iguales, por tanto se infiere
que los solventes no interfieren en este
parámetro cualitativo.
En cuanto al rendimiento se obtienen
valores superiores en el total de sólidos
solubles extraídos con el etanol que al
utilizar agua como solvente, lo cual se
corrobora al encontrarse una diferencia
significativa entre los mismos al aplicar la
prueba t de Student con un 99% de
confianza , según se muestra en la tabla 2.

Tabla 1 Resultados de la determinación los Tabla 2 Resultados obtenidos al realizar la

rendimientos de los extractos etanólicos y acuosos comparación de los rendimientos mediante el
de propóleo. estadístico t de Student.

Extracto Rendimientos Color Extracto Promedio Varianz t

(triplicado) a

Etanólico -18 Café Etanólico 17.16 1.083 6,90

-17,5 oscuro
-16 Acuoso 11,36 0,522

Acuoso -11 Café

-12,2 oscuro Respecto a la efectividad antimicrobiana
-10,9
en la tabla 3 se observan resultados de
los valores de Concentración Mínima
Podría destacarse un mismo patrón de
Bactericida para S. aureus empleando los
coloración. Esto es esperado ya que según
extractos alcohólicos y acuosos de
propóleo colectado. Como se muestra en
esta tabla las concentraciones requeridas
para inhibir a las bacterias fue menor para
de los extractos etanólicos que para los
acuosos, lo que indica que los primeros
son más efectivos.
Tabla 3 valores de la concentración mínima
bactericida obtenidos al evaluar las tres réplicas
los extractos acuosos y etanólicos S. aureus
Se expone como la concentración mínima
bacteriana para los extractos etanólicos
fue inferior , por tanto más efectiva.
Pudiéndose explicar esto debido a la
composición ya mencionada del propóleo
que posee flavonoides y estos son muy
solubles en etanol.[11] Por tanto están en
mayor proporción en dicho extracto. Otro
factor que posiblemente esté asociado al
resultado y la actividad antimicrobiana
del propóleo es el tipo de flavonoides
presentes. Lo que requeriría estudios
posteriores para confirmar o rechazar
dicha hipótesis.
CONCLUSIÓN
Los extractos Acuosos y etanólicos de
propóleo presentan actividad
antimicrobiana sobre Staphylococcus
aureus,siendo este último más efectivo.
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