practica 2

PREPARACION DE MATERIAL Y MEDIOS DE CULTIVO

DANIELA IBARRA MALDONADO, MISAEL MONDRAGÓN HERNÁNDEZ, MARÍA FERNANDA
RODRÍGUEZ BRAVO
DIVISIÓN DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS/UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO, GUANAJUATO,
MÉXICO.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

OBJETIVO

El alumno empleara las técnicas más adecuadas para la esterilización del material que se usa en
el laboratorio de bacteriología y Microbiología y conocerà las condiciones para trabajar en
ambientes estériles.

FUNDAMENTO

Un medio de cultivo está constituido por una mezcla de agua y sustancias que en conjunto
proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los microorganismos. La
composición de los medios de cultivo varía en función del grupo microbiano que se pretende
estudiar, y la preparación del medio depende de la complejidad química, el estado físico y otras
condiciones requeridas.

Existen medios de cultivo comerciales empleados para el desarrollo de los microorganismos más
comunes, sin embargo, en muchas ocasiones se requiere preparar el mismo mediante la mezcla
de sus componentes.

Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con material y
medios de cultivo estériles. En Microbiología la esterilización se define como “el proceso
mediante el cual se eliminan todos los microorganismos de un objeto, medio o superficie” y su
aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivo a ser
empleados. Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor, filtración, radiaciones
y aplicación de gas de óxido de etileno.

RESUMEN

En esta sesión antes de comenzar la practica el profesor comenzó dando una breve explicación
de lo que se realizaría en el laboratorio. También dio una explicación acerca de los medios de
cultivo, en que consisten y como prepararlos.

Siendo la primera vez para mucho realizando este tipo de prácticas, nos explico los cuidados y
el manejo adecuado de las cajas Petri cerca del mechero.
Por último, antes de empezar la practica nos demostró como inocular correctamente para no
contaminar nuestros cultivos como mantenerte siempre cerca del mechero y no hablar mientras
trabajamos ya que es muy probable que este llegue a contaminarse.

Una vez explicado todo el proceso, se puso en marcha la practica; se inició preparando el agar
nutritivo, en un matraz Erlenmeyer se agregó 5.75 g del medio y fue aforado a 100 ml. Después
se tapó con un tapón hecho con algodón y aluminio el cual el profesor indicó como realizarlo
también se colocó un trozo de cinta testigo la cual solo cambia de color cuando se encuentra en
determinadas condición y vapor.

Tapado el matraz se precedió a esterilizar el medio en autoclave. Terminado el tiempo de

esterilización, se sacó el matraz de la autoclave con ayuda de una franela, dejándolo reposar y
agitando suavemente. Posteriormente, cerca del mechero se quitó el tapón y vaciando la
solución dentro de las cajas Petri, este paso se realizo cuidadosamente para que no fuera
contaminado. Después de unos minutos se gelificaron las placas de Petri dejándolas con la tapa
hacia abajo.

Terminado todo el proceso, se dejaron las cajas Petri incubando a 37ºC. Pasando 24 horas las
cajas fueron revisadas para verificar cuales de ellas habían sido contaminadas.

Por otra parte, se esterilizaron 9 tubos de ensaye. Comenzamos añadiendo a cada tuvo 5 ml de
agua destilada con ayuda de una pipeta, después se colocó un tapón a cada uno de los tubos de
ensaye, pero únicamente sobreponiendo los tapones. Se metieron los tubos de ensaye a un
recipiente metálico y se cubrieron con un trozo de cinta testigo. Se metieron a la autoclave
dejándolos durante 15 minutos.

Por último, lavamos nuestras manos y el material que utilizamos.

RESULTADOS
Una vez realizado el procedimiento, el medio de cultivo se dejó incubar 24 horas,
aproximadamente. Después de este tiempo, se examinó cada medio de cultivo y se verificó que
no hubiera señales aparentes de microorganismos en ninguna de las 10 cajas de petri. Con esto
comprobamos un buen desempeño en la metodología seguida. De forma que estos medios de
cultivo pueden ser posteriormente empleados para prácticas posteriores.

OBSERVACIONES
En la primera parte, el punto clave fue cuidar que la autoclave no llegara a la presión crítica en
el barómetro, y cuando aumentaba más de lo requerido se le disminuía la cantidad de calor
apagando uno o los dos mecheros. Dentro de los 15 minutos se tuvo que apagar un mechero
cuando se llegó a la presión requerida.

El matraz con el medio de cultivo se había disuelto parcialmente (aún se veían sólidos) antes de
esterilizar, y después de la esterilización se agitó nuevamente para homogeneizar.
Al vaciar el agar nutritivo a las cajas Petri se tomaron las precauciones de trabajar en la zona de
esterilidad, y se flameaba la boca del matraz entre cada llenado, además de flamear levemente
el tapón de algodón, para evitar contaminaciones

En la segunda parte, los tubos con tapa se dejaron cerrados parcialmente (flojos) y se
introdujeron a la auto clave en una lata y al terminar la esterilización se cerraron de manera
adecuada, posteriormente se llevaron al refrigerador.

DISCUSION DE RESULTADOS
En esta práctica realizamos medios de cultivo, los cuales son utilizados en microbiología para
obtener colonias bacterianas de muestras problemas. Para obtener una muestra adecuada y
que podamos estudiarla adecuadamente es necesario tener medios estériles para que en
nuestra muestra únicamente tengamos la muestra problema que queremos analizar y no del
medio exterior, por lo que es muy importante trabajar en un medio estéril, esto se logra gracias
al mechero, por eso es importante tener el material cerca del mechero. También es importante
seleccionar el medio de cultivo adecuado para la selectividad de nuestro organismo o su
crecimiento, existen dos tipos de medios de acuerdo con su composición; naturales o complejos:
Son aquellos en los que la composición es químicamente desconocida o no esta definida y por
lo tanto no puede ser constante. Estos se elaboran con ingredientes de naturaleza como tejidos,
sueros, etc. Y Sintéticos: Estos medios se preparan añadiendo concentraciones precisas de
compuestos orgánicos o inorgánicos o sea se conoce la composición exacta.

En esta práctica uno de los equipos importantes fue la autoclave, el cual es un equipo que
emplea vapor de agua saturado, a una presión de 15 libras que permite alcanzar una
temperatura de 121ºC dentro de la cámara. El tiempo de esterilización usualmente es de 15
minutos. Las ventajas que trae el uso de la autoclave es que tenemos un rápido calentamiento,
la buena penetración, el corto tiempo de esterilización, el bajo deterioro del material expuesto
y la economicidad.

CONCLUSIÒN

CUESTIONARIO

BIBLIOGRAFIA