DOI 10.

1007 / s00784-017-2072-8

ARTÍCULO ORIGINAL

andamio potencial novedoso para la ingeniería de tejidos periodontales

Raquel Osorio 1 y Camilo Andrés Alfonso Rodríguez 2 & Estrella Osorio 1 y

Antonio L. Medina-Castillo 3 & Miguel Alaminos 2 & Manuel Toledano-Osorio 1 y
Manuel Toledano 1

Recibido: 27 Junio ​2016 / Aceptado: 7 Febrero 2017

# Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2017

Resumen arquitectura, las membranas propuestos puede ser adecuado para la proliferación celular.

Objetivo El objetivo del estudio es la caracterización de la novela de calcio y

electrospunmatrices zinc-cargado para ser utilizado para la regeneración Relevancia clínica La capacidad de las matrices de zinc-cargado para promover la
periodontal. precipitación de depósitos de fosfato de calcio, junto con su observada no toxicidad y
materiales y métodos Una membrana a base de polimetacrilato de metilo era de su química de la superficie lo que permite la unión de proteínas covalente, puede
calcio o zinc cargado. Matrices se caracterizaron morfológicamente por fuerza ofrecer nuevas estrategias para la regeneración periodontal.
atómica y microscopía electrónica de barrido y mecánicamente sondearon por un
nanoindentador. Se evaluó la precipitación con fosfato cálcico Biomimetic sobre
los tejidos poliméricos. pruebas de viabilidad celular se realizaron utilizando Palabras clave La regeneración. Calcio. El zinc. Nanopolymers. Los andamios
fibroblastos mucosa oral. Los datos se analizaron mediante pruebas
KruskalWallis y de Mann-Whitney o ANOVA y StudentNewman-Keuls
comparaciones múltiples.

resultados Zinc y la carga de calcio en matrices no modificaron su morfología
pero aumentaron propiedades nanomecánicos y disminuyeron nanorrugosidad.
Se observó precipitación de calcio y fosfato en las superficies de la matriz de
especímenes zincloaded. Se encontraron Matrices para ser no tóxico para las
células en todos los ensayos. Calcio y andamios de zinc-cargado presentan un
efecto citotóxico muy bajo.
conclusiones Zinc-loadedmembranes permiten la viabilidad celular y la precipitación
mineral promovido en condiciones fisiológicas. Basándose en las propiedades
nanomecánicos probado y andamio
* Raquel Osorio
rosorio@ugr.es
1 Instituto de Investigación de IBS, Facultad de Odontología, Colegio Máximo de la Universidad
de Granada, Campus de Cartuja s / n, 18017 Granada, España
Introducción
regeneración periodontal complejo de hueso-ligamento tiene, en muchos casos, un
resultado clínico impredecible y sigue siendo un reto en odontología. El uso de
tissueengineeredmatrices reabsorbibles para inducir la formación de hueso, cuando
se necesita soporte adicional, no siempre tiene éxito. Una limitación importante es la
incapacidad para ejercer un control espacio-temporal sobre el proceso de
cicatrización de heridas [ 1 ]. La mayoría de las membranas reabsorbibles utilizado
(por ejemplo, colágeno, polilactida-co-glicolida, y policaprolactona) y sustitutos de
injerto óseo (por ejemplo, hidroxiapatita (HAp) y otros fosfatos de calcio) muestran
una tasa relativamente rápida de biodegradación. Debe tenerse en cuenta que el
período de cicatrización del hueso alveolar, después de la regeneración periodontal
o después de la extracción, por lo general necesita 6 a 12 meses. Actualmente, los
materiales reabsorbibles empleado puede ser una desventaja, ya que los
comportamientos de disolución no son tan duradera como se requiere [ 2 ]. Además,
algunos productos de degradación de estos materiales reabsorbibles tienen un pH
bajo, que pueden no ser citocompatible [ 1 , 2 ], Y también podrían alterar los procesos
de remineralización [ 1 ].

2 Instituto de Investigación de IBS, Tissue Engineering Group, Departamento de

Histología de la Universidad de Granada, 18012 Granada, España

3 NanoMyP, escisión Empresa fromUniversity de Granada. Edificio Incluso cuando mucha investigación se lleva a cabo sobre membranas
BIC-Granada, Av. Innovación 1, 18016 Armilla, Granada, España Clin Oral Invest reabsorbibles periodontales, politetrafluoroetileno

(PTFE), un polímero sintético no reabsorbible, representa todavía el estándar de oro
para los clínicos, debido a su previsibilidad superior si se compara con membranas
reabsorbibles [ 3 ]. Sin embargo, PTFE posee desventajas importantes tales como la
baja adhesividad para las células; ausencia total de la capacidad de conectar al
tejido óseo y la disponibilidad para la osteointegración, sin formación de una capa
intermedia de tejido conjuntivo; y la falta de propiedades antibacterianas [ 3 ].
Una matriz de éxito para la regeneración ósea debe ser similar a la morfología
del hueso natural. hueso natural es un híbrido de tejido inorgánico-orgánico
compuesto de nanocristales de hidroxiapatita y fibras de colágeno (con diámetros
que van de 50 a 500 nm) montado en una malla porosa, con poros interconectados
[ 4 ]. Hueso está nanoestructurada, por lo que los materiales de tamaño nanométrico
debe ser la mejor opción para los sustitutos óseos. Las ventajas de estos
nanomateriales residen en su alta porosidad y proporción de área a volumen de
superficie alta que mejore la adsorción de proteínas (es decir, fibronectina,
vitronectina, laminina, y colágeno), que mediar en las interacciones de la superficie
celular [ 5 ].
membranas de polímeros nanoestructurados basados ​nuevas onpol ym
ethylmethacrylatearep ROPUESTO. Polimetilmetacrilatos (PMMA) son polímeros
no reabsorbibles pero biocompatibles, que han sido ampliamente utilizados para
clínicamente prótesis FIX para hueso o para la vertebroplastia, lentes intraoculares,
cementos óseos ortopédicos, cráneo reparación de defectos, la reconstrucción
mandibular, entre otros, debido a su compatibilidad con los tejidos excelente [ 6 , 7 ].
solución polimérica presentado puede ser hilado. En el proceso de electrohilado,
se crean las nanofibras distribuidos al azar. nanofibras poliméricas son andamios
adecuados para aplicaciones de ingeniería de tejidos. Electrohilado representa un
método fiable para la fabricación de filamentos largos continuos de nanofibras con
un diámetro que varía de 50 a 1000 nm. nanofibras electrohiladas poseen las
ventajas de una relación muy alta de superficie a volumen y tamaños de poro que
van desde varias decenas de micrómetros [ 5 ].
PMMA muestra interactividad débil contra células de los tejidos y promueve la
formación de tejido fibrótico [ 7 ]. Para mejorar la interacción tejido-biomaterial, y por
lo tanto la integración del tejido, se han empleado previamente estrategias tales
como la modificación de propiedades de la superficie. modificación de la superficie
química se ha propuesto para mejorar las propiedades de superficie. Se puede
obtener mediante la adición de grupos químicos funcionales o iones bioactivos.
Mejora de la capacidad osteogénica [ 8 ] Y el aumento de osteoconductividad [ 9 ] Se
han asociado con el uso de materiales bioactivos de calcio y que contienen zinc.
Estos iones pueden también ayuda para superar las infecciones crónicas, como el
calcio y el zinc se ha demostrado que poseen actividades antimicrobianas
significativas [ 10 , 11 ]. Por lo tanto, se añadieron zinc y calcio en nuestras matrices
de polímero.
El objetivo del estudio es el diseño y la caracterización de un nuevo
bioactivo y la membrana nanoestructurado citocompatible cargado con calcio
o zinc para la regeneración periodontal y el hueso.
Clin Invest oral
materiales y métodos
Preparación de tejidos artificiales
nanoestructurados membranas fueron adquiridas de NanoMyP (Granada, España). Theywere
fabricado a través de electrospinning, con una mezcla polimérica comercial (PolymBlend®). Sus
superficies fueron entonces modificados por funcionalización química. PolymBlend® se compone
de una mezcla de dos copolímeros de alto peso molecular: metacrilato de metacrilato de
metilo-cohydroxyethyl (peso molecular medio (Mw) de 200 kDa, índice de polidispersidad (PDI)
<2,5) y acrilato de metilo-acrilato de cohydroxyethyl (Mw promedio 2.000 kDa , PDI <1,5). El
porcentaje de los monómeros hidroxilados en la mezcla de polímeros depende de la relación en la
que los dos copolímeros se mezclan. La proporción recomendada para el procesamiento por
electrospinning es de 1: 1, que corresponde a 41% de monómeros hidroxilados. PolymBlend® ha
sido optimizado a fondo para la producción por electrohilado de esteras no tejidas de nanofibras
con propiedades mecánicas y fisicoquímicas adecuadas, tales como alta resistencia a la abrasión,
alta resistencia a la tracción, alta resistencia de rotura, una flexibilidad adecuada y elasticidad,
facilidad de manejo, de alta resistencia a los ácidos y bases, y resistencia a la temperatura. Las
membranas fueron cargados con calcio o zinc y se incubaron a temperatura ambiente durante 3
días. Se sometieron a agitación continua en diferentes soluciones acuosas de ZnCl Las membranas
fueron cargados con calcio o zinc y se incubaron a temperatura ambiente durante 3 días. Se
sometieron a agitación continua en diferentes soluciones acuosas de ZnCl Las membranas fueron
cargados con calcio o zinc y se incubaron a temperatura ambiente durante 3 días. Se sometieron a
agitación continua en diferentes soluciones acuosas de ZnCl 2 o CaCl 2
(Que contiene zinc o de calcio a 40 ppm) (pH 6,5), con el fin de alcanzar el equilibrio
de adsorción de iones metálicos. Entonces, se centrifugaron las suspensiones
(60min, 12000 rpm, dos ciclos) y las matrices se separaron del sobrenadante. Para la
activación previa de la superficie, el OH-matriz, Zn-matriz, y las superficies de
Ca-matriz se hicieron reaccionar con una solución tampón de carbonato de sodio
(333 mM; pH = 12,5) durante 2 h y suavemente lavó con agua. Por lo tanto, debido a
la hidrólisis parcial de enlaces éster, los grupos carboxilo se dispusieron en sus
superficies [ 7 ].
Microscopía de fuerza atómica (AFM) y microscopía electrónica de barrido
de emisión de campo (FESEM) caracterización de la superficie
El proceso de formación de imágenes se llevó a cabo en el modo de grabación,
utilizando un AFM (Nanoscope V, Instrumentos Digital, Veeco Grupo Metrología, Santa
Barbara, CA, EE.UU.) con un escáner piezo-verticales comprometido calibrado. Una
punta de nitruro de silicio de 10 nm de radio se une al extremo de un voladizo oscilante
que entró en contacto intermitente con la superficie en el punto más bajo de la
oscilación. Los cambios en la posición vertical de la punta de AFM en las frecuencias de
resonancia cerca de 330 kHz siempre que la altura de las imágenes registradas como
regiones brillantes y oscuras. Tres de 20 × 20 μ m imágenes digitales se registraron
desde cada superficie, con una velocidad de barrido lento (0,1 Hz). Las mediciones se
realizaron en una celda húmeda, en condiciones hidratadas. Para cada imagen, cinco
cajas aleatorios (5 μ m × 5 μ m) se crearon para examinar superficie
Clin Invest oral

nanorrugosidad (SRA, en nanómetros). diámetros de las fibras y fibra para ejemplo, para una sonda esférica, la teoría de Hertz de contactos predice [ 15 ]:
rangos de distancia de la fibra también se midieron usando un software
específico (Nanoscope Software versión V7). Para diámetros de las fibras, las
mediciones se corrigieron para la ampliación punta por la ecuación e = 2 r, dónde mi
g ðDÞ ¼ 4 R 1 = 2 re 1 = 2 re 2 Þ
es el error en la dimensión horizontal y r es la punta ' s radio [ 12 ]. ANOVA y 3 re 1 - v 2 TH:
Student-NewmanKeuls se realizaron comparaciones múltiples ( p < 0,05).
caracterización adicional de superficie se realizó por FESEM (GEMINI, Carl
En esta ecuación, R es el radio de la sonda esférica y ν
es de Poisson ' relación S de la muestra analizada.
Zeiss SMT, Alemania) a 2,5 Kv,
Como se mencionó anteriormente, en experimentos de nano-DMA, una fuerza

oscilatoria se superpone a una fuerza cuasiestático:

3,5-mm de distancia de trabajo. El microscopio estaba unido a un sistema de
análisis de dispersión de energía (EDX). El análisis elemental se realizó a una
F ¼ F q þ F UN sen 2 π pie re Þ; re 3 Þ
distancia de trabajo de 15 mm (Inca 300 y 350, Oxford Instruments, Oxford,
UK). con t el momento. Bajo esta fuerza impuesta, la profundidad de indentación
toma la forma siguiente:

estática acelular en la prueba de bioactividad in vitro

re ¼ re q þ re UN sen 2 π pie
re - δ TH: re 4 Þ

Matrices se empaparon en 20 ml de solución de fluido corporal simulado Esto significa que la profundidad de indentación también oscila alrededor de un valor
(SBFs) [pH 7,45] en frascos estériles durante 7 días [ 13 , 14 ]. Reactivos por cuasiestático, con la misma frecuencia que la fuerza de oscilación y retardados por un
1000 ml de SBFs fueron las siguientes: 8,035 g de NaCl, 0,355 g de NaHCO 3, 0,225retardo de fase δ. En el límite de F UN « F q,
g de KCl, 0,231 g de K 2 HPO 4 · 3H 2 O, 0,311 g de MgCl 2 · 6H 2 O, 39 g de HCl 1 podemos ampliar la Ec. ( 1 ) A una Taylor de primer orden de aproximación, para obtener:
M,
0,292 g de CaCl 2, 0,072 g de Na 2 ENTONCES 4, 118 g de Tris, y de 0 a 5 ml de HCl 1
M para ajustar el pH final. Después del secado, las superficies se analizaron por F q þ F UN sen 2 π re
pie Þ ¼ g D q mi

FESEM a 2,5 kV, una distancia de trabajo de 3,5 mm, y el análisis elemental se
þ sol 0 re q E * D UN sen 2 π pie -reδ TH: re 5 Þ
realizó por medio de un EDX unido a la FESEM, a una distancia de trabajo de 15
mm.
En esta ecuación, sol ' es la primera derivada de sol y MI* es el complejo
módulo dinámico indentación. Ahora, los términos timedependent pueden igualar
evaluación de la propiedad nanomecánica
y cambiar el origen de tiempos, a escribir:

Nanomecánicas asignaciones de propiedades se llevaron a cabo utilizando un

nanoindentador Hysitron TI Premier (Hysitron, Inc., Minneapolis, MN) equipado con
F UN sen 2reπ pie þ δ Þ ¼ sol 0 re q E * D UN sen 2 π pie re TH: re 6 Þ
nano-DMA III, un software comercial de nano-DMA. Módulo de asignación de las
muestras se llevó a cabo mediante la imposición de una consigna de fuerza Ahora, la fuerza de oscilación puede descomponerse en dos términos, el
cuasiestático, término en fase, F ', y el término fuera-de-fase, F "
F q = 2 μ N, a la que una fuerza sinusoidal de amplitud [ dieciséis ]:
F A = 0.10 μ N y la frecuencia f = 200 Hz se superpone. El desplazamiento resultante
(deformación) en el sitio de sangrado se controló como una función del tiempo. Los F UN sen 2reπ pie þ δ Þ ¼ F UN cos δ sen 2 πre
pie th th F UN pecado δ 2 cosreπ pie Þ ¼

datos de las regiones de aproximadamente 20 × 20 μ m de tamaño se recogieron ¼ F0 re

UN sen 2 π pie
th th F " UN 2 cos π piere Þ ¼ F0þ F "

usando una frecuencia de exploración de 0,2 Hz. Las muestras se escanearon en re 7 Þ

una condición hidratada.

Luego, a partir de esta descomposición, dos módulos dinámicos se pueden extraer:

En condiciones de equilibrio (aplicación de una fuerza cuasiestático), el módulo

de muesca de la muestra ensayada, MI, se puede obtener mediante la aplicación de
UN
diferentes modelos que relacionan la fuerza de indentación, F, y profundidad, D [ 15 ]. mi 0 ¼ MI* cos δ ¼ F UN cos δ ¼ F0 ; re 8 Þ
sol 0 re q re UN sol 0 re q re UN
La mayoría de estas teorías asumen proporcionalidad entre la fuerza y ​el módulo de
muesca:
que es el en-fase módulo de almacenamiento (elástico) o.

F ¼ g Dð Þ mi ⇒ mi ¼ F re 1 Þ mi " ¼ MI* pecado δ ¼ F UN pecado δ ¼ F " UN ; re 9 Þ

g ðDÞ sol 0 re q re UN sol 0 re q re UN

dónde g (D) es una función de la profundidad de indentación, que depende de que es el fuera-de-fase módulo de pérdida (viscoso) o. Tenga en cuenta la posición del

la geometría de la sonda del penetrador. por retraso de fase, δ, en estas ecuaciones.


Estos coeficientes están directamente relacionados con los parámetros medidos,
sin ningún supuesto en particular, salvo la consideración del sistema que consta de la
muestra y la punta del instrumento como un simple oscilador impulsado en
condiciones estacionarias.
Los datos obtenidos fueron sometidos a ANOVA y StudentNewman-Keuls
comparaciones múltiples ( p < 0,05).
análisis de viabilidad de la célula
Se realizó Establecimiento de cultivos primarios de fibroblastos de mucosa oral.
Diez biopsias de la mucosa oral humanos normales con un volumen promedio de
8 mm 3 fueron obtenidos de donantes sanos en la Facultad de Odontología de la
Universidad de Granada. Siempre se obtuvo el consentimiento informado por
escrito, y el protocolo de investigación fue aprobado por la Junta de Revisión
Institucional. Para obtener cultivos primarios de fibroblastos humanos de la
mucosa bucal, los tejidos fueron enzimáticamente de-epithelized y la lámina
propia se digirió en una mezcla de Dulbecco ' s Eagle modificado ' s medio (DMEM)
y 2 mg / ml Clostridium histolyticum colagenasa I (Gibco BRL Life Technologies,
Karlsruhe, Alemania). fibroblastos separada separado se recogieron por
centrifugación y se expandieron en matraces de cultivo que contiene DMEM
suplementado con 10% suero de ternero fetal (FCS) y 1% de solución de
antibiótico-antimicótico (concentración final 100 U / ml de penicilina G, 0,10 mg /
ml de estreptomicina y 0,25 μ g / ml de anfotericina B) (todos de Sigma-Aldrich,
Steinheim, Alemania). Las células se incubaron a 37 ° C en 5% de dióxido de
carbono bajo condiciones de cultivo estándar. El medio se cambió cada 3 días, y
las células se subcultivaron en una solución de
0,5 g / l de tripsina y 0,2 g / l EDTA a 37 ° C durante 10 min. Para todos los experimentos, se
utilizaron células procedentes de los tres primeros pasos de estos cultivos celulares de fibroblastos
de mucosa oral humana [ 17 ].
Catorce grupos de estudio se analizaron en este trabajo: 0,2, 0,4, 1 o 2 mg
de OH-matriz, Zn-matriz, y Ca-matriz, controles positivos - las células cultivadas
en DMEM sin matrices - y controles negativos - las células tratadas con 2% de
Triton X-100 (Sigma, St. Louis, MO). Triton X-100 es un compuesto químico que
se ha descrito anteriormente para producir efectos de alta citotóxicos. En todos
los casos, se analizaron las células después de 24 h de exposición de las
células a cada condición de cultivo [ 17 ].
La viabilidad celular se evaluó mediante tres técnicas diferentes:
1. La muerte celular, determinado por integridad de la membrana nuclear,
se evaluó mediante la cuantificación del ácido desoxirribonucleico liberada
(ADN) a los medios de cultivo. Se obtuvieron los sobrenadantes de cada
muestra, y 10- μ l alícuotas se diluyeron diez veces en agua destilada libre
de agua de nucleasa (Ambion-Life Technologies, Austin, TX, EE.UU.). El
ADN, en el medio, se cuantificó espectrofotométricamente (SmartSpec
Plus, Bio-Rad, Hercules, CA, EE.UU.) a longitudes de onda en el intervalo
de 260 - 280 nm. Los valores medios y las desviaciones estándar de tres
experimentos independientes se presentan aquí para cada grupo
experimental.
Clin Invest oral
2. La lactato deshidrogenasa (LDH) ensayo (Roche,
Alemania) detecta la cantidad de LDH, enzima liberada por las células con
membranas dañadas como indicador de la muerte celular. Las células se
incubaron con diluciones de partículas previamente preparadas, y LDHwas
cuantificaron en el sobrenadante correspondiente a cada grupo experimental.
Con el fin de evitar interferencias de partículas con los meaurements, los
sobrenadantes celulares se transfirieron después de la centrifugación (10 min,
200 × sol) en una nueva placa de 96 pocillos, se llevó a cabo y el ensayo LDH.
Para cada grupo experimental, se tomaron cinco determinaciones
independientes.
3. Mediante el examen de la función esterasa citoplasmática y celular
integridad de la membrana con un método basado en la fluorescencia usando el
kit Live / Dead comercial (Life Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.). Este utiliza
el método de calceína-AM, que se metabolicallymodified por células vivas para
un pigmento verde, y homodímero de etidio-1, que tiñe los núcleos de células
muertas en rojo. Después de la incubación de las células con cada biomaterial,
los sobrenadantes se desecharon y las células se lavaron con PBS, se
incubaron con la solución Live / Dead de 15 min como se indica por el
fabricante, y se lavaron con PBS. Las muestras fueron luego observadas por
microscopio de fluorescencia (Nikon Eclipse 90i, Nikon, Japón). Para cada
condición experimental, se tomaron cinco imágenes. Las imágenes fueron
procesadas con ImageJ software (MacBiophotonics, Ontario, Canadá),
desarrollado en la Universidad de McMaster, con el fin de cuantificar el número
de glóbulos rojos (muertos) y verdes (en vivo). Para cada condición, se tomaron
cinco determinaciones independientes y se analizó una media de 1000 células.
resultados promedio y desviación estándar normalizadas se calculan teniendo en
cuenta los resultados obtenidos para los controles positivos como la mortalidad 0% (100%
de supervivencia) y los obtenidos para los controles negativos como la mortalidad 100%
(0% de supervivencia).
Se utilizaron las pruebas de la U de Mann-Whitney y de Kruskal-Wallis. La
significación estadística se fijó en p < 0.05.
resultados
caracterización AFM y FESEMmatrix
imágenes de AFM de las tres matrices diferentes se muestran en la Fig. 1 .
nanofibras solapadas y distribuidas al azar, como resultado del proceso de
fabricación de electrohilado, se pueden observar. tamaños de fibra, fibra a fibra,
distancias y rugosidad de la superficie se muestran en la Tabla 1 . media y la
desviación estándar (SD) de tamaños de nanofibras, en nanómetros, variar desde
302,40 (SD 19.13) a 312,72 (SD 28.66); y no se encontraron diferencias entre
los grupos ( p = 0,25). Estas nanofibras aparecían agrupados inmicrofibers con
tamaños medios similares que van from2.05 (SD0.30) a 1,97 (0,18 SD) nm ( p = 0,29).
Como fibras se distribuyen al azar, fibra a distancias de fibra estaban en una
Clin Invest oral

Figura 1 imágenes de AFM de la superficie ' s matrices. un OH-matriz. si Ca-matriz. y todas las superficies presentes morfología similar. nanodeposits irregulares se distribuyen sobre las
C Zn-matriz. se pueden observar nanofibras solapadas y distribuidas al azar. No hay diferencias superficies de Zn-fibra
en los tamaños de fibra se encuentran entre los grupos,

amplia gama, entre 110 y 11,5 μ metro. Diferencias significativas ( p < Se
encontraron 0,001) entre la superficie de rugosidad media (SRA) de OH-matriz
[137,07 (SD 21.84) nm], Zn-matriz [108,40 (SD 16.17) nm], y Ca-matriz [82,74
(SD 19.64) nm]. FESEM imágenes de matrices se presentan en la Fig. 2 un - C.
El tamaño de la fibra era de aproximadamente 300 nm de diámetro. Morfología
y distribución aleatoria de fibras, que se puede observar, no se alteraron por el
calcio o la carga zinc sobre matrices de fibras electrohiladas.
Se observaron depósitos rara vez en las muestras. Las huellas de calcio se
encontraron en los espectros EDX (Fig. 2 d, e (Ep1)). En Camatrices, se encontró un
aumento del diámetro de nanofibras y nanofibras pierde su apariencia lisa.
calciumdeposits irregulares se distribuyeron uniformemente a lo largo de superficies
de nanofibras. El calcio también se identificó después de análisis EDX (Fig. 2 f, g
(Ep2)). En muestras de Zn-matriz, el diámetro de nanofibras fue altamente aumentó
(de 300 a aproximadamente 500 nm). Fibras pierden el buen aspecto de su
superficie. Nanodeposits de mineral (100 nm) fueron distribuidos aleatoriamente
sobre las superficies de nanofibras. El calcio y el fósforo se encontraron en los
espectros EDX sobre superficies de nanofibras (Fig. 2 h (Ep3)). Numerosos

estática acelular en la prueba de bioactividad in vitro aglomeraciones de otros nanocristales esféricas (más grande que 200 nm) se
identificaron sobre la superficie Zn-matriz. El calcio, fósforo, zinc y se encontraron

FESEM imágenes de matrices antes y después de 7 días de inmersión se presentan después de un análisis elemental de estas cristal

en la Fig. 2 . Después de la inmersión, se evidenciaron diferencias entre grupos. En

OH-matrices, algunos redondeada

tabla 1 media y las desviaciones estándar (DE) de

los tejidos ' rugosidad, diámetro de la fibra, y la fibra diámetro de diámetro de Fibra a fibra distancias ( μ- Nuevo nanorrugosidad superficie (SRA

a la gama de distancia de la fibra a la superficie microfibra ( μ) nanofibras (nm) Méjico) nm)

OH-matriz 2,05 (0,30) una 308,76 (23,73) A 8.5 μ a 120 nm 137,07 (21,84) α

Ca-matriz 1,97 (0,18) una 312,72 (28,66) A 11.5 μ a 110 nm 82,74 (19,64) β

Zn-matriz 2,05 (0,17) una 302,40 (19,13) A 8 μ a 110 nm 108,40 (16,17) δ

Estadísticas F = 1,24; p = 0.29 F = 1,39; p = 0.25 F = 25,76; p < 0,001

Misma letra indica que no hay diferencias significativas ( p < 0.05)


Figura 2 micrografías FESEM de tejidos se presentan en un OH-matriz. No hay rastros de elementos
inorgánicos se muestran en los espectros ( Ep0). si Ca-matriz. C
Zn-matriz. re y mi son superficie OH-matriz después SBFs inmersión durante 7 días. Se observaron algunos
depósitos redondeados rara vez en las muestras. Las huellas de calcio se encuentran en los espectros EDX ( EP1). nanofibras ( EP3). Numerosos aglomeraciones de otros nanocristales esféricas (más grande que 200
F y sol son Ca-matrices después de inmersión en SBFs. Nanofibras aumentaron en diámetro de
aproximadamente 50 nm y perdieron su apariencia lisa. depósitos de calcio irregulares se distribuyeron
uniformemente a lo largo de superficies de nanofibras. El calcio se identifica después de análisis EDX ( EP2). h
y yo corresponden a las de Zn-matrices después de inmersión en SBFs.
aglomeraciones (Fig. 2 i (Ep4)). En el EDX espectros presentado, se detectaron
cloruro y de sodio después SBFs inmersión; el magnesio es un elemento
contaminante del soporte de la muestra.
evaluación de la propiedad nanomecánica
Los medios y las desviaciones estándar de complejo, pérdida, y módulos de
almacenamiento se muestran en la Tabla 2 . Zn-matrices consiguen el más alto módulo
elástico o de almacenamiento seguido por Ca-matrices.
Clin Invest oral
diámetro de nanofibras es de aproximadamente 500 nm, y las fibras pierde el buen aspecto de su
superficie. Nanodeposits de mineral (100 nm) se distribuyen aleatoriamente sobre las superficies de
nanofibras. El calcio y el fósforo se encuentran en los espectros EDX sobre superficies de
nm) se identifican sobre la superficie Znmatrix. El calcio, fósforo, zinc y están incluidos en el análisis
elemental de estas aglomeraciones de cristal ( Ep4). En el EDX espectros presentado, cloruro de
sodio y se detectan después de SBFs inmersión; el magnesio es un elemento contaminante del
soporte de muestras
OH-matrices exhiben el más bajo [media y la SD en gigapascales obtenidos para
cada grupo fueron, respectivamente, 17,40 (5,36)> 13,31 (3,18)> 10,03 (4,46)].
La misma tendencia se observó e importancia de los daños y almacenamiento de
módulos. valores tan delta fueron más bajos para Ca-matriz [media 0,63 (SD
0,14)] y Zn-matriz [media 0,65 (SD 0,15)] sin diferencias entre ellos. OH-matriz
alcanza el valor más alto [media 1,07 (SD 0,52)]. Imágenes de nano-DMA
análisis en modo de escaneo para las matrices ensayadas se presentan en la
Fig. 3 .
Clin Invest oral

Figura 2 continuado.

pruebas de citotoxicidad en los armazones no cargadas y por encima de 80% en los grupos del calcio y
zinc-cargados. Todos los grupos experimentales alcanzaron la viabilidad
Los resultados de los ensayos de citotoxicidad se muestran en la Fig. 4 . Para las tres celular, significativamente diferente de los controles. Entre materiales
técnicas empleadas, todos los grupos experimentales fueron significativamente ensayados, las pequeñas diferencias existían como Ca-matrices eran más
diferentes de ambos controles. Se encontró ADN liberada al medio de cultivo a estar bajo citotóxicos que Zn-matrices ( p < 0,02) y ambos Ca y Zn matrices resultaron ser
5% - si normalizado con los grupos de control - para todos los tipos de tejidos y pesos (Fig. 4 menos citocompatible que OHmatrices ( p < 0.005 y p < 0,02, respectivamente)

un). De acuerdo con LDH cuantificación enzima en el medio de cultivo, valores
normalizados de los valores de liberación de LDH eran aproximadamente 25%, y
siempre bajo 30%, y resultaron similares independientemente del tipo de tejido o de peso
(Fig. 4 si). Y, por último, después de examinar la integridad de la integridad función
esterasa y la membrana celular citoplasmática con un método basado en la fluorescencia
(Live / Dead), fibroblastos humanos viabilidad se ha indicado anteriormente 90%
(Fig. 4 C). Imágenes de microscopía de fluorescencia representativos de cada
grupo experimental se presentan en la Fig. 5 . Después de analizar el daño
celular citotóxica inducida por los tres tejidos experimentales, se puede afirmar
que producían un grado insignificante de citotoxicidad (Figs. 4 y 5 ). Por lo tanto,
un efecto dependiente de la dosis no se observó en ninguno de los grupos
estudiados y pruebas aplicadas.

Tabla 2 Los medios y las desviaciones

estándar (SD) de módulos viscoelástico módulo complejo MI* módulo de pérdida mi Módulos de almacenamiento mi ' tan delta δ

dinámico de tejidos ensayados: módulo

complejo ( MI*), OH-matriz 10,03 (4,46) una 3,93 (2,04) A 6,29 (2,58) 1 1,07 (0,52) *
módulo de pérdida ( MI), Módulos de Ca-matriz 13,31 (3,18) b 5,29 (2,31) B 10,23 (3,03) 2 0,63 (0,14) +
almacenamiento ( mi ') ( GPa), y tan delta ( δ)
Zn-matriz 17.40 (5.36) c 6,60 (1,44) C 13,29 (5,25) 3 0,65 (0,15) +

Estadísticas F = 14,65; p < 0,001 F = 9,68; p < 0,001 F = 17,93; p < 0,001 F = 12,71; p < 0,001

Misma letra, número o símbolo indica que no hay diferencias significativas ( p < 0.05)
 Clin Invest oral

Fig. 3 análisis Nano-DMA, en scanningmode, de la superficie ' s matrices. un OH-matriz. si Ca-matriz. C Zn-matriz. Propertymaps corresponden a complejo ( MI*), pérdida ( MI), y módulo de almacenamiento ( mi '), respectivamente

Discusión producido por electrospinning tecnología. Biomateriales deben ser diseñados y

Se proponen las membranas nuevo polímero nanoestructurado a base de
polimetilmetacrilato a ser utilizado para la regeneración ósea guiada en
aplicaciones periodontales. Las membranas se componen de una serie de
nanofibras no tejidas
caracterizado basan en las necesidades de aplicación. Hay un número
impresionante de métodos adecuados para la caracterización de andamio. La
selección de métodos apropiados es difícil ya que no todos los métodos serán
relevantes en cada caso. Para las membranas presentados, un multi-parámetro
caracterización
Clin Invest oral

?? Fig. 4 una porcentaje medio normalizado de la liberación de ADN de humano

fibroblastos para el medio de cultivo para las diferentes matrices. se presentan los valores medios y las
desviaciones estándar de tres ensayos independientes para cada grupo. C + y C - son controles
positivos y negativos para la citotoxicidad, respectivamente. Todos los grupos experimentales fueron
significativamente diferentes de los controles. No se encontraron pequeñas diferencias entre las
matrices. si
porcentaje medio normalizado de la liberación de LDH de fibroblastos humanos al medio de cultivo
para los diferentes grupos. se presentan los valores medios y las desviaciones estándar de cinco
pruebas independientes para cada grupo. C + y
C - son controles positivos y negativos para la citotoxicidad, respectivamente. Todos los grupos son
significativamente diferentes de los controles. No se encuentran diferencias entre los tejidos
experimentales. C la viabilidad celular media de acuerdo con el ensayo Live / Dead en células de
fibroblastos humanos incubados con diferentes tejidos y controles. se presentan los valores medios y las
desviaciones estándar de cinco pruebas independientes para cada grupo experimental. C + y C - son
controles positivos y negativos para la citotoxicidad, respectivamente. Todas las matrices
experimentales alcanzan viabilidad celular más del 80% y son significativamente diferentes de los
controles. Entre los materiales ensayados, se encuentran pequeñas diferencias, Camatrices son más
citotóxicos que Zn-matrices, y ambos son menos citocompatible de OH-matrices

la superficie, después de SBFs inmersión [ 13 ]. Caracterización biológica se llevó a cabo

mediante la combinación de tres técnicas experimentales de cultivo celular diferentes:

citoplásmica (LDH) y nucleares (ADN) ensayos de integridad de la membrana y la función

Live / Dead citoplasmática esterasa y la integridad de la membrana celular [ 17 ]. A más

detallada en ensayo de cultivo celular in vitro para establecer si los marcadores óseos tarde

se observan, la capacidad de hacer espacio-en el sitio de implantación, y oclusividad celular

son también puntos importantes que se van a realizar en el futuro; esta investigación

requerirá modelos animales experimentales relevantes para el análisis [ 19 ].

El calcio y el zinc complejante sobre los tejidos poliméricos no modificaron

su morfología (Figs. 1 y 2 un - c), pero aumentó propiedades mecánicas y la
disminución de nanorrugosidad (Tablas 1 y 2 ). arquitectura Andamios influye en
gran medida andmigration unión de las células, y es una parte fundamental de
análisis de tejidos [ 20 ]. Se encontraron diferencias alcanzada en
nanorrugosidad entre los tres tejidos analizados, que van desde

82,74 a 137,07 nm. Estas diferencias pueden no ser crucial con respecto al

comportamiento de las células. Se ha informado de que la porosidad nanométrica que

van de 50 a 500 nm aumenta selectivamente la adsorción de proteínas (incluyendo la

fibronectina y la vitronectina), contribuyendo a la fijación de las células [ 21 ]. valores de

rugosidad obtenidos estuvieron dentro del rango de adhesión celular favorables se

informó anteriormente. Las células que crecen onmembranes que contienen poros entre 5

y 8 μ m mostraron aumento de la diferenciación osteogénica [ 20 ]. Estos tamaños de poro

con frecuencia se encuentran en los tejidos presentados, siendo aproximadamente el

es necesario: caracterización de la superficie (porosidad, tamaño de poro, y la rugosidad), 30% de los poros en cada tejido. El diámetro de nanofibras de testedmatrices es de

propiedades de superficie mecánicas, estática en la bioactividad in vitro, y la caracterización alrededor de 300 nm, que también es favorable para la fijación celular. Imitando

biológica mediante métodos de cultivo celular son requeridos [ 18 , 19 ]. AFM y una dinámica diámetros de nanofibras de colágeno se ha demostrado para mejorar la unión de células

nanoindentador fueron seleccionados ya que se han convertido en herramientas esenciales en los tejidos alrededor de 1,7 veces [ 21 ]. Incluso cuando los estudios específicos de

que permiten medir con precisión a escala nanométrica, la producción de imágenes de alta adhesión celular y la necesidad de proliferación se lleven a cabo, la hidrofilicidad de las

resolución, y que requieren poca o ninguna preparación de la muestra. La bioactividad in superficies ensayadas [ 22 ] Y nanorrugosidad son parámetros importantes que

vitro de un material se define por su capacidad de unión forma hueso con un hueso del promoverán la proteína de adhesión no específica y la unión celular a matrices

huésped, y se puede predecir a partir del fosfato de calcio (Ca / P) la formación de propuestos [ 7 , 21 ].

depósitos en su

La Fig. 5 Imágenes de microscopía de fluorescencia
correspondiente al análisis de la viabilidad celular
de acuerdo con el ensayo Live / Dead, en células de
fibroblastos humanos, se incubaron con diferentes
tejidos de 24 h. células verdes corresponden a
células vivas, mientras que las células muertas se
tiñen en
rojo. un, si, C, y re son células expuestas a 0,2,
0,4, 2, y 4 mg de tejidos. mi, F, sol, y h corresponden
a las células expuestas a 0,2, 0,4, 2, y 4 mg de
tejidos de calcio-cargado. yo,
j, k, y l se incubaron con las células
0,2, 0,4, 2, y 4 mg de tejidos
zincloaded
A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio que informa sobre
las propiedades dinámicas de los andamios nanomecánicas nanoestructurados
poliméricos para las membranas periodontales. tejidos de policaprolactona
electrohilado también se han propuesto como membranas periodontales [ 10 , 11 ]. Las
propiedades nanomecánicos de nanofibras de policaprolactona electrospun individuo
se informó anteriormente, llegando a la conclusión de que las propiedades mecánicas
de estas nanofibras son altos debajo de los de otras proteínas como nanofibras de
colágeno o fibrinógeno electrospun [ 23 ]. Sin embargo, la medición de propiedades de
nanofibras individuales no es totalmente fiable, ya que no se relaciona con el uso
clínico de estos materiales. Estas mediciones realizadas en una fibra individual no
tienen en cuenta la disipación de la fuerza debido a las interacciones moleculares
dentro de las fibras de la red y la disipación de la fuerza a través de los espacios
intersticiales y fluye [ 24 ]. Es difícil establecer comparaciones, debido a la falta de
estudios. matrices Probado logran significativamente diferente módulo de
almacenamiento dinámico siguiendo la tendencia: OH-matriz de 6,29 GPa (SD 2,58)
<Ca-matriz
10.23 GPa (SD 3,03) <Zn-matriz de 13,29 GPa (SD 5,25) (Tabla 2 , Higo. 3 ). módulos de
almacenamiento de Zn-matrices están dentro de la gama de los módulos de
nanoindentación de hueso trabecular calcificado, que son aproximadamente 15 GPa [ 25 ].
Estos valores altamente difieren del módulo de almacenamiento calculado para andamios
de colágeno altamente reticulada, que es de alrededor de 1 GPa [ 26 ]. La importancia de
estos resultados es apoyado por un reciente hallazgo que indica que el comportamiento de
las células y las células canmodify sustrato rigidez pueden investigar y responder a la
mecánica de matrices [fibrilares 27 ].
Los andamios tienen que realizar bajo estrés mecánico. Por lo tanto, ser capaz de
controlar y adaptar la integridad structuralfunctional se convierte en [cruciales 3 ]. La
mayor parte de los materiales propuestos recientemente tienen malas propiedades
mecánicas en comparación con los tejidos nativos que están apuntando a imitar o
reparación. Las fibras de colágeno, incluso cuando reforzadas por entrecruzamientos
covalentes [ 26 ], O policaprolactona [ 28 ] Son ejemplos claros.
Clin Invest oral
Zn-matrices consiguen el más alto módulo elástico o de almacenamiento (media 17.40 GPa,
SD 5,36) cuando se compara con el resto de los grupos (Tabla 2 , Higo. 3 ). Ellos presentaron
la mayor capacidad de almacenar energía potencial que se libera después de la
deformación. Disipación de energía dentro de las estructuras es de primordial importancia en
los sistemas dinámicos [ 29 ], Tales como la función oral, donde las estructuras orales
requieren amortiguación para absorber las ondas de choque y aliviar tensiones. Por lo tanto,
la mejora de las características de amortiguación se hace imprescindible para mejorar su
robustez y fuerza de resistencia. Durante el contacto, los materiales de bajo módulo
conducen a la concentración de tensión que resulta en la transferencia de energía (sin
disipación) de los tejidos a las estructuras adyacentes. Por lo tanto, pueden tener
implicaciones clínicas adversas. Una idea general del comportamiento de un material
viscoelástico puede obtenerse por el valor de la relación representada por bronceado δ, con δ
siendo el ángulo en el que el desplazamiento se retrasa la fuerza (Eq. ( 4 )). δ es una medida
de la relación de la energía disipada por el sistema a la energía almacenada en el sistema
que permite su retroceso elástico. Esto refleja lo bien que un material puede deshacerse de
la energía. Cuanto más bajo es de color canela δ es, mayor es la proporción de energía
disponible en el sistema, por retroceso [ 30 ]. Bronceado δ valores mayores de 1 representan
a los líquidos como las regiones, al contrario de bronceado δ valores menores que 1, que
representan gel comportamiento a sólido-como comportamiento como bronceado δ
se aproxima a cero [ 31 ]. Ca y Zn matrices alcanzan similares bronceado
δ los valores (0,6) (tabla 2 , Higo. 3 ), Siendo más favorables a la propagación de células como
recientemente publicado por Baker et al. [ 27 ].
SBFs son fluidos con concentraciones de iones casi iguales a los de plasma
sanguíneo humano y se emplean para la evaluación de la bioactividad de
biomateriales para la reparación del tejido duro. la deposición de zinc en los tejidos a
prueba promovió precipitación biomimético de los depósitos de Ca / P y la formación
de nanocristales HAp durante SBFs inmersión (Fig. 2 ). El proceso de Ca / P
depositionmay ser explicado como un fenómeno de superficie. Zinc complejación
sobre los tejidos facilitó grupo fosfato vinculante. estos fosfato
Clin Invest oral
grupos, en la superficie, tener bajo coordinados oxígenos, que conducen a superficies
reactivas que atraerán a los iones de calcio a partir de SBFs [ 32 ]. Esta deposición
biomimético de Ca / P es considerado como un método de recubrimiento inspirado
por el proceso natural de la biomineralización. tejidos de polímero / cerámica
alcanzado representan un tipo de armazón de material compuesto. Se pueden usar
como sustitutos de tejido óseo, ya que imitan en cierta medida la estructura de la
matriz extracelular del hueso natural. Biocerámicas son ineficaces en términos de
mecánica s ty tabi li, pero muestran capacidad osteoconductividad y de unión al
hueso. Por otra parte, los polímeros son biocompatibles y proporcionan propiedades
mecánicas adecuadas [ 5 ]. Por otra parte, debe considerarse que la Hap cristalina es
muy reabsorbe lentamente, y la mayoría de los sustitutos óseos basados ​en la Hap no
reabsorber o Resorb muy lentamente. Sin embargo, si HAp se precipita como
nano-HAP, que será más fácil de reabsorber, facilitando la regeneración del tejido
duro.
remineralización Biomimetic de los tejidos ensayados facilitará la regeneración
periodontal. HAp se ha utilizado anteriormente, no sólo para el hueso, sino también
para la regeneración periodontal. HAp facilita la formación de otro hueso de apatita
similares a materiales como carbonato de HAp y es capaz de estimular a las células,
que conduce a la fo rma ti en de hueso. Mo r eove r, HAp pr omo tes
osteoconductividad [ 33 ]. Osteoblastos, cementoblastos, y las células del ligamento
periodontal y de pulpa estimularon con extracelular Ca 2+ y PO 42 - aumento de la
proteína morfogenética ósea-2 expresión de ARNm [ 2 , 34 ]. En las células del
ligamento periodontal, factor de crecimiento fibroblástico-2 expresión génica y
proteica niveles (FGF-2) son también aumentada por incrementos en extracelular Ca 2+
concentración [ 35 ]. FGF-2 promueve la formación de hueso nuevo, tiene un efecto
mitogénico potente en cementoblastos y células del ligamento periodontal, y mejora
la regeneración del tejido periodontal. También acompañó a la formación de nuevo
hueso y el cemento con orientación funcional fibras del ligamento periodontal [ 35 ].
Los datos del presente estudio no identificó necrótico significativa y / o efectos
apoptóticos de los tejidos ensayados sobre fibroblastos humanos. Cuando se
emplean varios métodos de prueba, los resultados pueden a veces ser diferentes,
dificultando la interpretación de datos. Refleja y pone de relieve la importancia de
utilizar un enfoque de la batería de pruebas en la investigación citotoxicidad [ 36 ].
Si analizado juntos, se encuentra que los grupos experimentales diferían en gran
medida desde el control. Esto sugiere que los tejidos a prueba hicieron viabilidad
celular no altera en cualquiera de la dosis probado (Figs. 4 y 5 ) Y es probable que
sean seguros para el uso in vivo, en AGRE ntwithpreviousresults eme [ 1 7 , 3 7 ].
Polimetilmetacrilato (PMMA) se ha demostrado previamente ser [no citotóxico 7 ].
Teniendo en cuenta estos resultados y suponiendo que la disolución de estos
tejidos es improbable y monómeros no polimerizados están ausentes, todo
toxicidad observada no estará relacionada con las matrices como tales. Será
debido al calcio o zinc iones en sus superficies.
membranas de policaprolactona para la regeneración periodontal se han
cargado previamente con zinc y óxido de calcio nanopartículas. Los resultados que
se muestran de pie que la carga de calcio
de membranas poliméricas (menos de 15% en peso de partículas de CaO, con respecto
al peso total del polímero) no fue perjudicial para las células [ 11 ]. Sin embargo, el óxido
de zinc nanopartícula inclusión en los mismos polímeros (5 a 30% en peso de
nanopartículas de ZnO, con respecto al peso de polímero) aumentó membranas ' citotoxicidad
celular de una manera dependiente de la dosis. Se obtiene una reducción en la
viabilidad celular hasta el 50% [ 10 ]. Se puede concluir que la incorporación de cinc
iónico en el tejido hizo citotoxicidad ejercen menor que cuando zinc nanopartículas de
óxido se incorporan directamente en el biomaterial.
similitudes claras han sido descritos en potencial y condiciones entre las
células del ligamento derivado encía derivados y periodontales [proliferativa 38 ].
Por lo tanto, hay que destacar que se utilizó sólo una única línea celular, y
puede que no necesariamente extrapolarse a otros tipos de células.
tejidos presentados parecen superar las principales desventajas de los
polímeros sintéticos no reabsorbibles más utilizados en la regeneración periodontal
(membranas de PTFE). Son (i) baja adhesividad para las células debido a la alta
hidrofobicidad y (ii) la ausencia total de la capacidad de conectar al tejido óseo y la
disponibilidad para la osteointegración, sin formación de una capa intermedia de
tejido conjuntivo [ 3 ]. Además, el uso de iones metálicos, como agentes
antibacterianos, pueden también ayuda, ya que han demostrado actividades
antimicrobianas y antifúngicas significativas [ 10 , 11 ]. La regeneración periodontal
requiere el uso de andamios apropiados en un ambiente oral muy contaminada [ 38 , 39
]. También es importante subrayar que los andamios polymerbased / membranas
cargadas con ZnO Recientemente se han demostrado para mostrar no sólo
propiedades antibacterianas [ 40 ], Pero la proliferación celular también mejorada /
cicatrización de la herida [ 41 ]. Sin embargo, basado en la probada en estudios in
vitro, la investigación futura en vivo utilizando modelos animales relevantes que se
necesita para confirmar la eficacia de estas matrices.
La principal ventaja de la formulación química de las matrices presentadas
es que poseen una alta afinidad calciumbinding, que es esencial para la
diferenciación celular y la regeneración ósea. Por otra parte, la unión covalente
directa e inmovilización de una alta carga de casi cualquier tipo de biomolécula
(enzima, factores de crecimiento, anticuerpo, antígeno, antibiótico ...) en sus
superficies son posibles. Estos materiales fabricados por electrohilado son
polímeros sintéticos, y la mayoría de estos productos también se pueden
incorporar en el material de nanofibras [ 42 ]. Como los tejidos presentados son
no reabsorbible, ya se espera que los períodos de acción de estas sustancias, si
se compara con algunos otros materiales reabsorbibles comercializados (de 5 a
15 días) [ 2 , 42 ]. Sin embargo, si esta membrana añade ventajas clínicas a las
membranas existentes para la regeneración tisular guiada queda por determinar
en futuros estudios.
Cumplimiento de las normas éticas
Conflicto de intereses Los autores declaran que no tienen ningún conflicto de intereses.

Fondos Proyecto MAT2014-52036-P apoyado por el Ministerio de Economía y
Competitividad (MINECO) y el Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER).
Aprobación ética Todos los procedimientos realizados en el presente estudio, con seres
humanos, estaban de acuerdo con las normas éticas de la institucional y / o comité nacional
de investigación y con la Declaración de Helsinki 1964 y sus modificaciones posteriores, o las
normas éticas comparables. Este artículo no contiene ninguna estudios con animales
realizados por cualquiera de los autores.
Consentimiento informado El consentimiento informado se obtuvo de todos los individuos
los participantes incluidos en el estudio.
referencias
1. Ivanovski S, Vaquette C, Gronthos S, Hutmacher DW, Bartold PM (2014) andamios
multifásicos para ingeniería de tejido periodontal. J Dent Res 93 (12): 1212 - 1221.
doi: 10.1177 / 0022034514544301
2. Shimauchi H, Nemoto E, Ishihata H, Shimomura M (2013) Posibles andamios
funcionales para la regeneración periodontal. Japón Dent Sci Rev 49: 118 - 130.
doi: 10.1016 / j.jdsr.2013.05.001
3. SAMG, Pillai BRM (2014) Evolución de membranas de barrera en la regeneración
periodontal - son las membranas de tercera generación realmente aquí? J of Clin Diagn
Res 8:14 - 17. doi: 10.7860 / JCDR / 2014 /
9957.5272
4. Peng F, Yu X, Wei M (2011) In vitro rendimiento de la célula de hidroxi-
apatita partículas / poli (ácido L-láctico) andamios nanofibras con un excelente partícula
a lo largo orientación de nanofibras. Acta Biomater 7: 2585 - 2592. doi: 10.1016 /
j.actbio.2011.02.021
5. Gardin C, Ferroni L, Favero L, Stellini E, Stomaci D, Sivolella S, Bressan E, Zaaván B
(2012) biomateriales nanoestructurados para ingeniería tisular reconstrucción de
tejido óseo. Int J Mol Sci 13: 737 - 757. doi: 10.3390 / ijms13010737
6. lejía KW, Tideman H, Wolke JC, Merkx MA, Chin FK, Jansen JA (2013) la formación de
biocompatibilidad y hueso con poroso PMMA modificado en condiciones normales y
se irradia tejido mandibular. Clin Oral Implants Res 24 (Suppl A100): 100 - 109. doi: 10.1111 24. Fratzl P (2008) En: Fratzl P (ed) Colágeno: Estructura y mecánica. Springer Estados Unidos,
/ j.1600-0501.
2011.02388.x
7. Punet X, Mauchauffé R, Rodríguez Cabello JC, Alonso M, Engel
E, Mateos-Timoneda MA (2015) funcionalización Biomolecular para celular mejorada - interaccionestomadas de mujeres sanas antes y después de la menopausia. Calcif Tissue Int 90: 286 - 293.
materiales de poli (metil metacrilato) de superficie. Regen Biomat 2: 167 - 175. doi: 10.1093
/ rb / rbv014
8. Nandakumar A, Yang L, Habibovic P, van Blitterswijk C (2010) fosfato de calcio
recubierto matrices de fibra electrospun como armazones para ingeniería de tejido
óseo. Langmuir 26: 7380 - 7387. doi: 10. 1021 / la904406b
9. Seol YJ, KimKH, Kang YM, Kim IA, Rhee SH (2009) Bioactividad, respuestas de las
células pre-osteoblásticas, y evaluaciones osteoconductividad del electrohilado no
tejida telas de gel SiO2-Cao. J Biomed Mater Res BAppl Biomater 90: 679 - 687. doi: 10.1002
/ jbm.b.31334
10. Münchow EA, Albuquerque MT, Zero B, Kamocki K, Piva E, Gregory RL, Bottino MC
(2015) Desarrollo y caracterización de nuevas membranas electrospun
ZnO-cargado para la regeneración periodontal. Dent Mater 31: 1038 - 1051. doi: 10.1016
/ j.dental.2015.06.004
11. Münchow EA, Pankajakshan D, Albuquerque MT, Kamocki K, Piva E, Gregory RL,
Bottino MC (2016) Síntesis y caracterización de electrospunmatrices cargadas
con CaO para la ingeniería de tejido óseo. Clin Investig Oral 20: 1921 - 1933. doi: 10.1007
/ s00784-0151671-5
12. Osorio E, Toledano M, Aguilera FS, Tay FR, Osorio R (2010) Etanol húmedo unión
sensibilidad de la técnica evaluada por AFM. J Dent Res 89: 1264 - 1269. doi: 10.1177
/ 0022034510376403
Clin Invest oral
13. ISO 23317: 2012. Los implantes para cirugía - Evaluación in vitro de la capacidad de formación de
apatita de los materiales de implante. ISO-editor, Ginebra
14. Leonor IB, Balas F, KawashitaM, Reis RL, Kokubo T, Nakamura T (2009) Biomimetic
deposición de apatita en microesferas poliméricas treatedwith una solución de silicato
de calcio. J BiomedMater Res BAppl Biomat 91: 239 - 247. doi: 10.1002 / jbm.b.31395
15. Han L, Grodzinsky AJ, Ortiz C (2011) Nanomecánica de la matriz extracelular del
cartílago. Annu Rev Mater Res 41: 133 - 168. doi:
10.1146 / annurev-matsci-062910-100431
16. Macosko CW (1994) Reología: principios, medidas y aplicaciones. VCH, Nueva
York, p 568
17. López-López MT, Scionti G, Oliveira AC, Duran JD, Campos A, Alaminos M,
Rodríguez IA (2015) Generación y caracterización de nuevos biomateriales
sensibles al campo magnético. PLoS One 10: e0133878. dOI: 10.1371 /
journal.pone.0133878
18. Will J, Detsch R, Boccaccini AR (2013) En: Bandyopadhyay A, Bose S (eds)
estructurales y biológicas caracterización de andamios. Elsevier, Oxford, p 437
19. Zhang Y, Zhang X, Shi B, Miron RJ (2013) Las membranas para tisular guiada y la
regeneración ósea. Annals Oral y Maxillofac Surg 12: 10 - 17
20. Bru ¼ auskait mi I, Bironait mi D, E Bagdonas, Bernotien mi E (2016)
Andamios y células para la regeneración de tejidos: diferente de andamio tamaños de
poro-diferentes efectos celulares. Citotecnología 68: 355 - 369. doi: 10. 1007 / s10616-015-9895-4
21. Woo KM, Chen VJ, Ma PX (2003), la arquitectura de andamiaje Nano-fibroso aumenta
selectivamente la adsorción de proteínas contribuye a la unión celular. J Biomed Mater
Res A 67: 531 - 537. doi: 10.1002 / jbm.
a.10098
22. Ramon-Marquez T, Medina-Castillo AL, Fernandez-Gutierrez A, Fernandez-Sanchez JF
(2016) A biosensor óptico novedoso para la determinación directa y selectiva de
serotonina en suero por fosforescencia temperatura surfaceroom sólido. Biosens
Bioelectron 82: 217 -
223. doi: 10.1016 / j.bios.2016.04.008
23. Salehi S, Bahners T, Gutmann JS, Gao SL, Mäder E, Fuchsluger TA (2014)
Caracterización de las propiedades estructurales, mecánicas y nanomecánicos de
PGS electrospun / fibras PCL. RSC Adv 4: 16.951. dOI: 10.1039 / C4RA01237B
Nueva York, p 131
25. Polly BJ, Yuya PA, Akhter MP, Recker RR, JA Turner (2012) las propiedades intrínsecas del
material de hueso trabecular mediante pruebas de nanoindentación de las biopsias
doi: 10.1007 / s00223-0129575-8
26. Xu B, Chow MJ, Zhang Y (2011) Experimental y estudio de modelado de los andamios de
colágeno con los efectos de la reticulación y la alineación de la fibra. Int J Biomat 2011: 1 -
12. doi: 10.1155 / 2011/172389
27. Baker, BM, Trappmann B, Wang WY, Sakar MS, Kim IL, Shenoy VB, Burdick JA, Chen CS
(2015) unidades de reclutamiento de fibras mediadas por células de la matriz
extracelular mechanosensing en microambientes fibrilares de ingeniería. Mater Nat 14:
1262 - 1268. doi: 10.1038 / nmat4444
28. Baker, SR, Banerjee S, BoninK, GutholdM (2016) La determinación de las propiedades
mecánicas de electrohilado poli- ε- caprolactona (PCL) nanofibras utilizando AFM y una
novedosa técnica de fibra de anclaje. Mat Sci Engineer C 59: 203 - 212. doi: 10.1016 /
j.msec.2015.09.102
29. Agrawal R, Nieto A, Chen H, Mora M, Agarwal A (2013) nanoescala características de
amortiguación de los nanotubos de nitruro de boro y nanotubos de carbono reforzado con
materiales compuestos poliméricos. ACS Appl Mater Interfaces 27: 12052 - 12057. doi: 10.1021
/ am4038678
30. Espino DM, Shepherd DET, Hukins DWL (2014) propiedades viscoelásticas de bovino
rodilla cartílago articular joint: dependencia de espesor y la frecuencia de carga.
BMC Musculoskeletal Disorders, 15:
205. doi: 10.1186 / 1471-2474-15-205
Clin Invest oral
31. HH Winter (1987) ¿Puede el punto de un polímero de reticulación de gel de ser detectado por el sol
'- sol " ¿Transversal? Polym Sci Eng 27: 1698 - 1702. doi: 10.1002 / pen.760272209
32. Pietak AM, Reid JW, Stott MJ, Sayer M (2007) El silicio sustitución en los materiales
biocerámicos de fosfato de calcio. Biomateriales 28: 4023 - 4032. doi: 10.1016 /
j.biomaterials.2007.05.003
33. Chai YC, Carlier A, Bolander J, Roberts SJ, Geris L, Schrooten J, Van Oosterwyck H,
Luyten FP (2012) puntos de vista actuales sobre la osteogenicidad de fosfato de calcio
y la traducción en las estrategias eficaces de regeneración ósea. Acta Biomater 8: 3876 -
3887. doi: 10.1016 / j. actbio.2012.07.002
34. Tada H, Nemoto E, Kanaya S, Hamaji N, Sato H, Shimauchi H (2010) Elevado
extracelular calcio aumenta la expresión del gen morfogenética ósea proteína-2 a
través de un calciumchannel y ERKpathway en células de pulpa dental humana.
Biochem Biophys Res Commun 394: 1093 - 1097. doi: 10.1016 / j.bbrc.2010.03
35. Kanaya S, Nemoto E, Sakisaka Y, Shimauchi H (2013) Calciummediated aumento de la
expresión de factor de crecimiento fibroblástico 2acts a través de NF κ B y PGE2 / EP4
vías de señalización del receptor en cementoblastos. Bone 56: 398 - 405. doi: 10.1016 /
j.bone.2013.06.031
36. Riss TL, Moravec RA (2004) El uso de múltiples puntos finales de ensayo para investigar los efectos del
tiempo de incubación, la dosis de toxina, y la densidad del chapado en ensayos de citotoxicidad
basados ​en células. Desarrollar ENSAYO Drogas Technol dos y cincuenta y uno - 62. doi: 10.1089 /
154065804322966315
37. Bock N, Riminucci A, Dionigi C, Russo A, Tampieri A, Landi E, Goranov VA,
Marcacci M, Dediu V (2010) A nueva ruta en el hueso
la ingeniería de tejidos: andamios biomiméticos magnéticos. Acta Biomater 6: 786 - 796.
doi: 10.1016 / j.actbio.2009.09.017
38. Santamaría S, Sánchez S, Sanz M, García-Sanz JA (2016) Comparación de ligamento
periodontal y la encía mesenquimáticas derivadas de las células madre para terapias
regenerativas. Clin Invest oral. dOI:
10.1007 / s00784-016-1867-3
39. Bottino MC, Arthur RA, Waeiss RA, Kamocki K, Gregson KS, Gregory RL (2014) los
sistemas de administración de fármacos nanofibras biodegradables: efectos de la
ronidazol conocido y ciprof loxacin en periodontopatógenos y bacterias orales
comensales. Clin Investig Oral 18: 2151 - 2158. doi: 10.1007 / s00784-014-1201-x
40. Augustine R, Dominic EA, Reju I, Kaimal B, Kalarikkal N, Thomas S (2014) membranas
polycrapolactone electrospun incorporados con nanopartículas de ZnO como
sustitutos de la piel con una mejora de fibroblastos proliferación y cicatrización de
heridas. RSC Adv 4: 24777 -
24785. doi: 10.1039 / C4RA02450H
41. Augustine R, Malik HN, Singhal DK, Mukherjee A, Malakar D, Kalarikkal N, Thomas S
(2014) Electrospun policaprolactona / ZnO nanocompuesto membranas como
biomateriales con propiedades de adhesión celular antibacterianos y. J Polym Res
21: 1 - 17. doi: 10.1007 / s10965-013-0347-6
42. Ranjbar-Mohammadi M, Zamani M, Prabhakaran MP, HajirBahrami S, Ramakrishna S
(2016) electrohilado de PLGA / nanofibras de goma de tragacanto que contienen
hidrocloruro de tetraciclina para la regeneración periodontal. Mater Sci Engineer C
58: 521 - 531. doi:
10.1016 / j.msec.2015.08.066