Procedimiento experimental para la recuperabilidad de fluorescencia por difusividad membranal:

Preparación de medio con lavado de solución salina HBSS, con el fin de mantener limpio el medio,
mas sin embargo la preparación del medio de cultivo indicadamente para mantención activa celular
es necesario adecuar el medio con sustratos indicados en el protocolo reportado en “efectos de
laser cercano a los infrarojos focalizados en la fluorescencia de las membranas celulares marcadas”
o en el ingles Effects of near infrared focused LASER on the fluorescence of labelled cell membrane.

Es posible que la preparación de medio de cultivo con sustratos no sea requerida en el instante, el
cuál no preocupe la actividad celular para un tiempo prolongado ya que el experimento será para
una sencilla prueba dependiendo de los tiempos que se medirán a medida que va aumentando la
potencia del LASER para recolección de datos de la emisión de fluorescencia, hasta el marcaje
blanco.

¿Afecta el sustrato la recuperación de la fluorescencia?

Pasos experimentales:

Paso 1: proliferar el agregado del colorante FM-464 sobre la célula para visualizar la adsorción,
mediante el cual se mide la proporción de los FM-464 como marcador molecular adsorbido a la
membrana, cuyo previo experimento la proporción total del marcador molecular se hará sin célula
eucariótica, con el propósito de medir la intensidad luminosa de la proporción total como referencia
de una muestra blanco. La proporción del marcador FM- 464 adsorbido a la membrana celular por
afinidad a ella es α, +nótese que la medición de las proporciones de marcadores libres en el medio
que no son adsorbidas en la membrana es (1-α).

El contenido total de marcadores libres y adsorbidos corresponde a la concentración heterogénea

o la proporción total de marcadores (nv). Comprendemos que la intensidad de luminiscencia
depende proporcionalmente de la eficiencia cuántica. Esta última se define como el cociente entre
el flujo de fotones que inciden y son absorbidos por los electrones del marcador FM- 464, cuya
respuesta de emisión es a una frecuencia mas alta, en previos estudios reportado en el artículo
Effects of near infrared focused LASER on the fluorescence of labelled cell membrane. Nota: precisar

La eficiencia cuántica: definida a través de la fluorescencia, es la taza de fotones absorbidos con

respecto a los fotones emitidos, dada el decaimiento de la fluorescencia a través de la emisión, es
cuando alcanza la eficiencia cuántica. Las tazas constantes T y Km son las que fluctúan la tasa.

El factor α es una consecuencia o efecto que depende de la propiedad de las interacciones

intramoleculares cuyos movimientos aleatorios entre las moléculas es llamados efecto del
movimiento browniano, en función de la tensión superficial que toda superficie homogénea posee
y que depende de la temperatura que fluctúa la membrana junto con la presión, cabe recalcar que
este efecto del movimiento browniano estimula la difusividad de la membrana la cual afecta el
transporte de los marcadores hasta homogenizar por diferencia de concentraciones.

Paso 2.
medida que focalizamos con pinzas ópticas a una proporción de área en la sección transversal a la
membrana celular, se harán detalladas lecturas de intensidad del marcador hasta provocar el
blanqueamiento a medida que aumentamos la potencia.+