Revista Politécnica ISSN 1900-2351, Año x, Número x, páginas xx-xx, 20xx

CAUSAS DE INFECCIONES ESPINALES POST-OPERATORIASPREVENCION DE INFECCION POR Commented [MM1]: Todavía les toca cambiar el titulo
STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS EN LA ETAPA PREVIA A LA INERVENCION QUIRURGICA muy general ahora
Formatted: Centered
Formatted: Number of columns: 1, Force equal colum
1 width
Andres Felipe Sanabria Diaz (andresf.sanabriad@rcci.edu.co) , Carlos Andrés BustosAndrés Bustos
Garay (carlosa.bustosg@ecci.edu.co) 2 Formatted: Font: Bold

1
 Revista Politécnica ISSN 1900-2351, Año x, Número x, páginas xx-xx, 20xx

RESUMEN

Presentar un método de prevención de propagación e Infección por staphylococcus epidermis en los Formatted: No underline
pacientes que serán sometidos a una intervención quirúrgica de cualquier tipo.

ABSTRACT Formatted: English (United States)

PREVENTION OF INFECTION BY STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS IN THE STAGE PREVIOUS TO
SURGICAL INERVENTION Formatted: Font: (Default) Arial, Bold, Italic
Formatted: Justified
To present a method of prevention of propagation and infection by epidermis staphylococci in patients
Formatted: Font: Bold, Italic, English (United States)
who will be presented to a surgical intervention of any kind.
Formatted: Font: (Default) Arial, Bold, Italic
Se debe tener el resumen en español e inglés, los cuales incluirán los objetivos principales de la investigación, Formatted: Justified
alcance, metodología empleada, resultados principales y conclusiones. El resumen debe ser claro, coherente
Formatted: No underline
y sucinto, para lo cual se sugiere revisar y verificar datos, sintaxis, ortografía, no caer en erratas y no incluir
ecuaciones, figuras, tablas ni referencias bibliográficas. El resumen es máximo de 150 palabras y debe reflejar Formatted: English (United States)
fielmente el contenido del artículo. Su redacción debe estar en tercera persona.

Palabras clave: Cirugía, Infección, Métodos, Pruebas, PCR, Staphylococcus ps. Vitek, WiderPalabra Formatted: No underline
clave1, palabra clave2, palabra clave3.
Formatted: Font: Bold, Italic
Formatted: Space After: 10 pt, Tab stops: Not at -0.
Keywords Surgery, Infection, Methods, Tests, PCR, Staphylococcus ps. Vitek, Wider
Formatted: Font: Bold, Italic
: Keyword1, keyword2, keyword3.
Keywords, corresponden a la traducción precisa al inglés, de las palabras clave ya presentadas en español, Formatted: Font: Bold, Italic, No underline
deben ir en cursiva. Formatted: Font: Bold, Italic
Formatted: Font: Bold, Italic, No underline
Éstas ayudan a identificar los temas o aspectos principales del artículo y son importantes para su indexación
en bases bibliográficas. Deben ser entre tres y cinco, entre ellas pueden incluirse frases cortas que describan Formatted: Font: (Default) Arial, Bold, Italic
tópicos significativos del artículo. Se recomienda utilizar los términos de los tesauros especializados de las Formatted: English (United States)
disciplinas correspondientes.

Recibido: xx de febrero de 20xx. Aceptado: xx de Junio de 20xx

Received: February xx, 20xx Accepted: June xx, 20xx

TÍTULO DEL ARTÍCULO EN INGLÉS Formatted: English (United States)

ABSTRACT

Abstract, corresponde a la traducción precisa al inglés, del resumen ya presentado en español, debe ir en
cursiva.

Keywords: Keyword1, keyword2, keyword3.

1
 Revista Politécnica ISSN 1900-2351, Año x, Número x, páginas xx-xx, 20xx

Keywords, corresponden a la traducción precisa al inglés, de las palabras clave ya presentadas en español,
deben ir en cursiva.

2
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3
 Revista Politécnica ISSN 1900-2351, Año x, Número x, páginas xx-xx, 20xx
1. INTRODUCCIÓN
Staphylococcus epidermidis es un coco Gram
positivo, coagulasa negativa de flora normal de
piel, pero se asocia con infecciones crecientes de
piel y anexos, esta alta frecuencia de infección
probablemente se deba a los mecanismos
elaborados para colonizar las superficies del
catéter y/o cuerpos extraños, además es causal de
infecciones profundas en huéspedes
inmunocompetentes. (universidad de la republica,
2006) Los procedimientos más largos, el uso de
instrumentos espinales y el injerto óseo aumentan
la tasa de infección. Los factores de riesgo
modificables incluyen malnutrición,
hospitalizaciones prolongadas, uso prolongado de
un catéter permanente, fumar y obesidad. (Juan
José Picazo de la Garza, 2017 ) Es esencial
abordar estos factores lo mejor posible para
promover un resultado favorable. Los factores de
riesgo no modificables generalmente disminuyen la
respuesta inmune e incluyen el uso crónico de
corticosteroides, síndrome de inmunodeficiencia
adquirida (SIDA), artritis reumatoide y tumores
malignos. (Juan José Picazo de la Garza, 2017 ).
Si bien se puede hacer poco para mitigar estos
riesgos, es importante informar a los pacientes
sobre su mayor susceptibilidad a las infecciones
durante la toma de decisiones para la cirugía.
(Xinlian Zhang, 2018)
S. epidermidis representa el agente causal más
frecuente de infecciones de dispositivos médicos
permanentes, como los catéteres intravenosos
centrales o periféricos (CvC) (Rogers, 2009).
considerado el agente causal de diferentes
entidades clínicas, tales como: Infecciones
urinarias intrahospitalarias, osteomielitis,
endocarditis de válvula nativa, bacteriemia en
pacientes inmunosuprimidos, endoftalmitis
después de cirugía ocular, infecciones de
dispositivos médicos o cuerpos extraños (catéteres
endovenosos, fístulas para hemodiálisis, catéteres
de diálisis peritoneal, marcapasos, articulaciones
protésicas, injertos vasculares, válvulas cardiacas
4
protésicas e implantes de mama) (GARCIA APAC
Coralith, 2003).
Estas infecciones generalmente comienzan con la
introducción de bacterias de la piel del paciente o
del personal sanitario durante la inserción del
dispositivo y han aumentado en número,
probablemente debido al mayor uso de tales
dispositivos ( National Nosocomial Infections
Surveillance, 2004) (N.P.O'Grady, 2002). Las
infecciones del torrente sanguíneo ocurren en al
menos 4 a 5 de cada 1,000 inserciones de CvC
realizadas en pacientes en cuidados intensivos en
los Estados Unidos; al menos el 22% de estas
infecciones son causadas por S. epidermidis (
National Nosocomial Infections Surveillance, 2004)
(N.P.O'Grady, 2002). En Colombia durante el año
2013 se presentaron 419 agentes causales de
infección post operatoria en adultos, epidermidis
fue catalogado como el causal en el 36.2% de los
casos en UCI y 31.9% de los casos en
UCI/Intermedia. (Instituto nacional de salud, 2013). Formatted: Font: (Default) Arial, 10 pt, Spanish
(Colombia), Do not check spelling or grammar
Formatted: Keep with next
Ilustración 1 :Agentes Causales de infecciones post Formatted: Caption
operatorias. Instituto Nacional de Salud. Aplicativo Web IAAS-
Sivigila. 2013.
Además, S. epidermidis puede estar alojado en
prótesis articulares, injertos vasculares, salas de
cirugía, existen pocos tratamientos no invasivos
cuando se presenta una infección por invasión de
este microorganismo, y dichas infecciones
Commented [MM2]: Hace más sentido colocar este
requieren cirugías de reemplazo. En el Reino unido párrafo más arriba en el texto (por ejemplo continuando e
S. epidermidis se ha aislado en 36%de cirugías de párrafo 2 donde citan Rogers 2009)
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cadera y 49% de infecciones de artroplastia de
rodilla. ( National Nosocomial Infections
Surveillance, 2004).
Cabe destacar el hecho de que S. epidermidis no
suele causar infecciones graves lo que genera un
interrogante de por qué es ventajoso para esta
especie mantener un bajo nivel de virulencia.
Massey et al. han desarrollado un modelo
matemático que describe cómo para una especie
con un alto nivel de transmisión asintomática, como
S. epidermidis, las cepas avirulentas superan a las
cepas virulentas, mientras que para las especies
en las que la transmisión asintomática es baja,
como la S. aureus, las cepas virulentas compiten
con las cepas avirulentas.
S. epidermidis era considerado un microorganismo
sin mayor interés clínico, pero con el pasar de los
años y sus niveles de sensibilidad antimicrobiana
ha convertido en un patógeno importante (von Eiff,
2001)
Además, S. epidermidis puede estar alojado en
prótesis articulares, injertos vasculares, salas de
cirugía, derivaciones del sistema nervioso central e
infecciones cardíacas (Rogers, 2009) (M, 2009) .
considerado el agente causal de diferentes
entidades clínicas, tales como: Infecciones
urinarias intrahospitalarias, osteomielitis,
endocarditis de válvula nativa, bacteriemia en
pacientes inmunosuprimidos, endoftalmitis
después de cirugía ocular, infecciones de
dispositivos médicos o cuerpos extraños (catéteres
endovenosos, fístulas para hemodiálisis, catéteres
de diálisis peritoneal, marcapasos, articulaciones
protésicas, injertos vasculares, válvulas cardiacas
protésicas e implantes de mama) (GARCIA APAC
Coralith, 2003).
Este modelo se basa en el supuesto de que S.
epidermidis es más fácilmente transmisible que S.
aureus. Los autores explican que esta suposición
es válida debido a la colonización generalizada de
S. epidermidis en el epitelio humano mientras que
S. aureus es flora normal de nasofaringe y de
zonas húmedas como pliegues inguinales y axilas,
(universidad de la republica, 2006).
5
Con los avances del siglo XIX en cuanto asepsia y
antisepsia las complicaciones infecciosas
posquirúrgicas siguen siendo un tema de interés
clínico, presentándose en un 5-12% de los
procedimientos (Calvet, 2016).
Las infecciones posquirúrgicas se pueden
presentar por la incisión quirúrgica y dependen del
lugar intervenido, del tipo de cirugía, de la técnica
quirúrgica, del estado inmune y nutricional del
paciente, además la presencia de cuerpos
extraños como prótesis, catéteres, etc., favorecen
la infección por microorganismos. Otro método de
infección se debe a las técnicas de desinfección del
material quirúrgico y en muchos casos a la
presencia de infecciones intrahospitalarias. Commented [MM3]: No entiendo porque creen que es
(N.P.O'Grady, 2002) info es necesaria?
Estas infecciones intrahospitalarias constituyen un
importante problema de salud pública a nivel
mundial. Las infecciones de las heridas quirúrgicas
representan el 24% de las infecciones
intrahospitalarias. (Salvatore L. Augello Díaz . Katia
Hernández González ., 2017)
La mayoría de infecciones en cirugía son por Commented [MM4]: Se están repitiendo
microorganismos de la flora cutánea, del lugar de
Commented [MM5]: M es el nombre del primer autor?
intervención o por bacterias exógenas procedentes
del personal sanitario o del medio ambiente.
(N.P.O'Grady, 2002).
Diaz S. en el 2015 reporta en un estudio sobre
enfermedades intrahospitalarias en los sitios de
infección, predomino la infección de la herida
quirúrgica en un 48.43% seguido de las infecciones
del sistema nervioso central 31.25%. (Salvatore L. Commented [MM6]: Hace más sentido colocar este
Augello Díaz . Katia Hernández González ., 2017) párrafo más arriba en el texto (por ejemplo continuando e
párrafo 2 donde citan Rogers 2009)
Commented [MM7]: Ya hablaron de completamente o
cosa y vuelven y hablan del modelo matemático, presten
atención a coherencia de su texto
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Los Staphylococcus sp (ODD G. BRAKSTAD,l 2* y neonatos. (Gladys Pinilla. Angela Bautista., 2017) Field Code Changed
KJETILL AASBAKK,2 AND JOHAN A. (Gladys Pinilla. Angela Bautista.).
Formatted: Font: (Default) Arial, 10 pt, Spanish
(Colombia), Do not check spelling or grammar
Commented [MM9]: Año de esta ´publicacoón?,

Figura 1 desarrollo del biofilm en Staphylococcus epidermidis. La unión al material no revestido depende
principalmente de la hidrofobicidad de la superficie celular, mientras que las proteínas de superficie dedicadas
median la adhesión a los dispositivos cubiertos por la matriz del huésped. Después de la adhesión a la superficie,
el exopolisacárido (por ejemplo, poli-N-acetilglucosamina (PNAG), también conocido como PIA), proteínas
específicas (Bap (también conocidas como Bhp) y Aap) y macromoléculas accesorias (como los ácidos teicoicos)
ayudan a las células agregación. Los mecanismos de maduración, estructuración y desprendimiento de biopelículas
son poco conocidos, pero posiblemente implican la expresión controlada por detección de quórum de péptidos
similares al detergente y la actividad proteolítica en las capas expuestas de la biopelícula. El perfil de expresión
génica es notablemente diferente en el biofilm comparado con el modo de crecimiento planctónico e incluye la
regulación a la baja de los procesos celulares básicos. PSM, modulina soluble en fenol.

MAELAND2, 1992)., están altamente relacionados

con infecciones intrahospitalarios y han
desarrollado mecanismos de resistencia
antimicrobiana, S. aureus y S. epidermidis se
comportan como oportunistas y al ser capaz de
formar biopelícula por estar en piel (S. epidermidis)
pueden ingresar fácilmente a tejidos durante la
implantación de dispositivos médicos. estudios han
mostrado que la infección sobre material protesico
se desarrolla en dos fases: inicialmente desarrolla
factores de adhesión que facilitan su adherencia a
superficies de polímero de la prótesis por
interacciones hidrofonicas, proteínas (SSP-1, SSP-
2 Bhp) y polisacáridos (PS/A) de la pared celular
bacteriana, seguido prolifera y sus factores de
virulencia interactuar con proteínas para unirse a
la matriz extracelular del huésped como a
fibrinógeno, fibronectina, colágeno, vitrionectina y
laminina y así generar la biopelícula sobre las
superficies plásticas, actual como una barrera de
protección, lo que es un factor de importancia
bacteriana en infecciones en inmunocompetentes
La biopelícula o biofilm se describe como la
comunidad de microorganismos que crecen
embebidos en una matriz de exopolisacárido y se Commented [MM8]: Mejor solo hablar de S. epidermid
adhieren a una superficie inerte o a un tejido vivo,
(J.Leiva, 2005)
Staphylococcus epidermidis es un microorganismo
comensal prominente que coloniza de manera
ubicua en la piel humana y en las superficies de la
mucosa. Esta bacteria ha sido considerada como Commented [MM10]: Ya lo dijeron varias veces en la
relativamente inocua porque desempeña un papel pagina anterior
importante en el mantenimiento de una flora
cutánea saludable; además se caracteriza por su Commented [MM11]: También lo han dicho
multirresistencia a los antibióticos como, penicilina,
meticilina, macrólidos, fluoroquinolonas. (José Commented [MM12]: Cita bibliográfica a esta
David Tafur, 2008) sin embargo, también es una información?
de las causas más frecuentes de infecciones Formatted: Font: (Default) Arial, 10 pt, Spanish
relacionadas con la cirugía y, por lo tanto, es (Colombia), Do not check spelling or grammar
reconocido como un importante patógeno
oportunista. S. epidermidis tiene la capacidad de

6
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Figura 2 desarrollo del biofilm en Staphylococcus epidermidis. La unión al material no revestido depende
principalmente de la hidrofobicidad de la superficie celular, mientras que las proteínas de superficie dedicadas
median la adhesión a los dispositivos cubiertos por la matriz del huésped. Después de la adhesión a la superficie,
el exopolisacárido (por ejemplo, poli-N-acetilglucosamina (PNAG), también conocido como PIA), proteínas
específicas (Bap (también conocidas como Bhp) y Aap) y macromoléculas accesorias (como los ácidos teicoicos)
ayudan a las células agregación. Los mecanismos de maduración, estructuración y desprendimiento de biopelículas
son poco conocidos, pero posiblemente implican la expresión controlada por detección de quórum de péptidos
similares al detergente y la actividad proteolítica en las capas expuestas de la biopelícula. El perfil de expresión
génica es notablemente diferente en el biofilm comparado con el modo de crecimiento planctónico e incluye la
regulación a la baja de los procesos celulares básicos. PSM, modulina soluble en fenol.

producir biopelículas mediada por el operón icaA-
DBC, que podrían
ayudar a que se adhieran a dispositivos médicos,
incluidos catéteres intravasculares, válvulas
protésicas y lentes artificiales. Después de que la
bacteria ingresa genera la biopelícula la cual
genera un sistema de protección de los
antimicrobianos y del sistema inmune. para poder
erradicar dicho patógeno es indispensable el retiro
del material extraño. (rafael franco, 2014). Figura
(12).
no existe ningún método por el cual se pueda
detectar rápidamente la existencia de la bacteria en
epidermis de la zona donde se realizará la
intervención, instrumental o area para evitar la
propagación durante la etapa operatoria; por lo
tanto, es necesario desarrollar un método de
detección rápida.
En intervenciones quirúrgicas puede generar
contaminación de los implantes si no cuenta con
unas condiciones de asepsia adecuadas, esta se
puede evitar mediante quimioprofilaxis quirúrgica y
la utilización de quirófanos con flujo laminar. El
tratamiento antimicrobiano en general no consigue
la erradicación de la biopelícula, pero se utiliza
como medida preventiva mitigar las bacterias que
puedan atravesar al torrente sanguíneo. este
tratamiento inicialmente es de amplio espectro y
seguido debe ser sustituido por antibiótico
especifico. pero se ha identificado que son pocas
las infecciones que logran resolverse
Figura 1 desarrollo del biofilm en Staphylococcus
epidermidis. La unión al material no revestido depende
principalmente de la hidrofobicidad de la superficie
celular, mientras que las proteínas de superficie
dedicadas median la adhesión a los dispositivos
cubiertos por la matriz del huésped. Después de la
adhesión a la superficie, el exopolisacárido (por
ejemplo, poli-N-acetilglucosamina (PNAG), también
conocido como PIA), proteínas específicas (Bap
(también conocidas como Bhp) y Aap) y
macromoléculas accesorias (como los ácidos teicoicos)
ayudan a las células agregación. Los mecanismos de

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maduración, estructuración y desprendimiento de ADN)para la detección de esta bacteria pero estos

biopelículas son poco conocidos, pero posiblemente se aplican cuando el paciente presenta síntomas
implican la expresión controlada por detección de de infección por Staphylococcus.y RFLP Commented [MM14]: que es?
quórum de péptidos similares al detergente y la
(Maritza Angarita MerchánI, 2017). Estos son los
actividad proteolítica en las capas expuestas de la
biopelícula. El perfil de expresión génica es métodos utilizados actualmente:
notablemente diferente en el biofilm comparado con el
modo de crecimiento planctónico e incluye la regulación
a la baja de los procesos celulares básicos. PSM,
modulina soluble en fenol. Commented [MM13]: resumir este texto más corto

satisfactoriamente, y de igual manera pueden ser

recurrentes. (J.Leiva, 2005)

Los métodos de identificación microbiano son de Figura 2 3 STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS en

bastante duración, el estándar de oro para tinción de Gram
diagnóstico es la siembra en cultivos
1. SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN WIDER
microbiológicos y pueden ser detectados
fácilmente por el metodométodo de tinción de gran
La identificación de organismos mediante ésta
(Figura 3)
técnica se realiza por medio de paneles
comerciales de pruebas bioquímicas, en el caso de
duran de 24 a 48 horas, con sensibilidad limitada
Staphylococcus sp. Se utilizan los paneles ‘MIC/ID’
de igual manera el antibiograma y por ser muestras
Gram Positivos C094-31 /W/Rev.1. Para ello se
de difícil obtención pueden contaminarse
inocula se una suspensión de cada
fácilmente dando falsos positivos, por lo que no son
microorganismo equivalente a 0.5 Macfarlán en
suficientes para su identificación, además se
cada uno de los pocillos del papel. Posteriormente
utilizan pruebas bioquímicas y enzimáticas que
se inocula a 37°C durante 16 horas. En ese
alargan el proceso de reconocimiento. Como tal, no
tiempo, diferentes reacciones químicas tienen
existe ningún método por el cual se pueda detectar
lugar en cada ensayo lo que produce alteraciones
rápidamente la existencia de esta bacteria en el
en el pH. Esto genera un perfil específico para cada
tejido para evitar la propagación durante la etapa
microorganismo. (Figura 3.) (Xinlian Zhang, 2018)
operatoria; por lo tanto, es necesario desarrollar un
método de detección rápida para evitar
procedimientos e invasiones por cirugía.

Existen métodos moleculares que ayudan a

detectar con mayor eficacia y seguridad la
presencia de microrganismos y de igual manera su
nivel de resistencia, para así tomar un
medicamento eficaz que mitigue los efectos de
dichos microrganismos. Como lo son PRC,
secuenciación, hibridación de sondas de DNA,
RAPD (Polimorfismo amplificado aleatorio

8
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Figura 34. Panel de identificación y sensibilidad
WIDER
2. SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN VITEK 2
La identificación de microorganismos por el
sistema Vitek 2, se basa en la realización de
diferentes pruebas bioquímicas. El procedimiento
se lleva a cabo a partir de una suspensión
bacteriana equivalente a 0,5 Macfarlán en solución
salina, para identificación del género
Staphylococcus ps. se emplearon las tarjetas de
identificación Gram positivos (GP).(Figura 3.)
Figura 5. Tarjetas de identificación y sensibilidad de
Staphylococcus sp. VITEK
teniendo en cuenta el periodo de incubación del
Staphylococcus sp. de aproximadamente de 1 a
6 horas, con éste proceso permite que minimizar
los tiempos de identificación, los cuales se debe
realizar cada 15 minutos, para luego ser llevados
al espectrofotómetro y realizar su análisis hasta
completar el estado de incubación de la muestra.
(Duarte C. Oliveira and Hermínia de Lencastre,
2002)
3. ELECTROFORESIS EN CAMPO
PULSADO
Determinación del patrón electroforético por
electroforesis en gel en campo pulsado (PFGE). La
técnica de PFGE permite resolver fragmentos de
ADN de gran tamaño, incluso cromosomas. Las
variaciones que ocurren naturalmente en la
9
secuencia de ADN entre individuos de la misma
especie da como resultado variaciones en los sitios
de reconocimiento de enzimas de restricción de
manera que mientras en unos individuos existe un
determinado sitio de reconocimiento, en otros está
ausente. La combinación de digestión con enzimas
de restricción y PFGE permite diferenciar unos
individuos de otros ya que su perfil electroforético
es distinto y se observa directamente. Para la
realización de esta técnica se siguieron los pasos
que se muestran a continuación. (Muñoz, 2017)
(Muñoz, 2017).
4. AMPLIFICACIÓN POR PCR
Se realiza la amplificación por PCR, en un
termociclador utilizando un ADN polimerasa Taq
recombinante (AmpliTaq, Perkin-Elmer Cetus
Corp., Norwalk, Connecticut).
La mezcla de reacción consistieconsiste en 50 pl.
de lisado, 10 p.1 de lOx tampón de amplificación
de PCR (Tris-HCl 200 mM [pH 8.3], KCl 500 mM,
MgCl2 15 mM, gelatina [0.1 p / vol] al 0.1%, 0.5%
Tween 20), 2.0 p.1 de cada cebador (20 p.M de
solución madre), 10
p.l de los trifosfatos de desoxinucleósidos (1 mM
cada uno en stock) solución, 0.4 pl de AmpliTaq (5
U / p.l de solución madre), y 25.6 pl de agua doble
destilada. El aceite mineral (50 p.l) era añadido a
las mezclas para inhibir la evaporación. Un total de
37 los ciclos de PCR se realizaron en las siguientes
condiciones: ADN desnaturalización a 94 ° C
durante 1 min, recocido de cebado a 55 ° C para
0,5 min, y la extensión del ADN a 72 ° C durante
1,5 min. después del ciclo final, la reacción se
terminó manteniéndola a 72 ° C durante 3,5 min.
Los productos de la PCR se almacenaron en el
Formatted: Numbered + Level: 1 + Numbering Style
ciclador en 4 ° C hasta su recogida. Electroforesis
1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at:
en gel de agarosa. T (ODD G. BRAKSTAD,l 2* 0.25" + Indent at: 0.5"
KJETILL AASBAKK,2 AND JOHAN A.
MAELAND2, 1992)
Todos los métodos anteriores tienen una duración
superior a 6 horas y están enfocados en realizar un
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diagnóstico al paciente, La prevención de la

infección es de suma importancia. Existe poca
evidencia de buena calidad para guiar lo anterior.
Esta es la importancia de hacer un estudionuestra
propuesta, es para la prevención de la propagación
de Staphylococcus epidermidis en la etapa
temprana, esto se puede lograr realizando
controles en: la zona epidérmica del paciente
donde se realizará la intervención, el área donde
se realizará (mesa de cirugía) y en el instrumental
a utilizar..
proporcionar información adecuada sobre las
concentraciones de bacterias.

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importancia de hacer un estudio para la prevención

de la propagación de Staphylococcus epidermidis
La prevención de la infección es de suma bacteria [1] [as2] y su tratamiento en la etapa
importancia. Existe poca evidencia de buena temprana.
calidad para guiar lo anterior. Esta es la

2. MATERIALES Y MÉTODO Commented [MM15]: Tienen que mencionar que

muestra van a recolectar, si va a ser de la piel, si va a ser d
Para optimizar y garantizar los resultados en menos superficie de instrumentos, si van a tener diferentes grup
tiempo, hacer que la ventana de diagnóstico de la si van a comparar resultados de diferentes pruebas.
bacteria de manera eficiente se propone realizar
pruebas cruzadas con distintos métodos de
identificación, de los cuales se destaca.

SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN WIDER

Figura 3. Panel de identificación y sensibilidad
La identificación de organismos mediante ésta WIDER
técnica se realiza por medio de paneles comerciales
de pruebas bioquímicas, en el caso de
Staphylococcus sp. Se utilizan los paneles ‘MIC/ID’
Gram Positivos C094-31 /W/Rev.1. Para ello se
inocula se una suspensión de cada microorganismo
equivalente a 0.5 Macfarlán en cada uno de los
pocillos del papel. Posteriormente se inocula a 37°C
durante 16 horas. En ese tiempo, diferentes
reacciones químicas tienen lugar en cada ensayo lo
que produce alteraciones en el pH. Esto genera un
perfil específico para cada microorganismo. (Figura
3.) (Xinlian Zhang, 2018)

SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN VITEK 2

Figura 4. Tarjetas de identificación y sensibilidad de
Staphylococcus sp. VITEK
La identificación de microorganismos por el sistema
Vitek 2, se basa en la realización de diferentes
teniendo en cuenta el periodo de incubación del
pruebas bioquímicas. El procedimiento se lleva a
Staphylococcus sp. de aproximadamente de 1 a 6
cabo a partir de una suspensión bacteriana
horas, con éste proceso permite que minimizar los
equivalente a 0,5 Macfarlán en solución salina, para
tiempos de identificación, los cuales se debe realizar
identificación del género Staphylococcus ps. se
cada 15 minutos, para luego ser llevados al
emplearon las tarjetas de identificación Gram
espectrofotómetro y realizar su análisis hasta
positivos (GP).(Figura 3.)
completar el estado de incubación de la muestra.
(Duarte C. Oliveira and Hermínia de Lencastre,
2002)

ELECTROFORESIS EN CAMPO PULSADO

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Determinación del patrón electroforético por
electroforesis en gel en campo pulsado (PFGE). La
técnica de PFGE permite resolver fragmentos de
ADN de gran tamaño, incluso cromosomas. Las
variaciones que ocurren naturalmente en la
secuencia de ADN entre individuos de la misma
especie da como resultado variaciones en los sitios
de reconocimiento de enzimas de restricción de
manera que mientras en unos individuos existe un
determinado sitio de reconocimiento, en otros está
ausente. La combinación de digestión con enzimas
de restricción y PFGE permite diferenciar unos
individuos de otros ya que su perfil electroforético es
distinto y se observa directamente. Para la
realización de esta técnica se siguieron los pasos
que se muestran a continuación. (Muñoz, 2017)
(Muñoz, 2017).
ESTUDIO GENOTÍPICO OBTENCIÓN DE
PERFILES ELECTROFORÉTICOS
Se realizó un estudio de clonalidad de todas las
cepas de SALR aisladas, mediante PFGE. Se
muestran los perfiles obtenidos para las cepas en
estudio tras realizar la electroforesis de campo
pulsado
Figura 5. Gel de campo pulsado, se muestran los perfiles
electroforéticos obtenidos correspondientes a la cepa de
interferencia NTC 8325
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AMPLIFICACIÓN POR PCR
Se realizó la amplificación por PCR, en un
termociclador (Coy Laboratory Products Inc., Ann
Arbor, Michigan) utilizando un ADN polimerasa Taq
recombinante (AmpliTaq, Perkin-Elmer Cetus Corp.,
Norwalk, Connecticut).
La mezcla de reacción consistió en 50 pl. de lisado,
10 p.1 de lOx tampón de amplificación de PCR (Tris-
HCl 200 mM [pH 8.3], KCl 500 mM, MgCl2 15 mM,
gelatina [0.1 p / vol] al 0.1%, 0.5% Tween 20), 2.0
p.1 de cada cebador (20 p.M de solución madre), 10
p.l de los trifosfatos de desoxinucleósidos (1 mM
cada uno en stock) solución, 0.4 pl de AmpliTaq (5 U
/ p.l de solución madre), y 25.6 pl de agua doble
destilada. El aceite mineral (50 p.l) era añadido a las
mezclas para inhibir la evaporación. Un total de 37
los ciclos de PCR se realizaron en las siguientes
condiciones: ADN desnaturalización a 94 ° C durante
1 min, recocido de cebado a 55 ° C para 0,5 min, y
la extensión del ADN a 72 ° C durante 1,5 min.
después del ciclo final, la reacción se terminó
manteniéndola a 72 ° C durante 3,5 min. Los Commented [MM16]: En futuro porque lo están
productos de la PCR se almacenaron en el ciclador proponiendo apenas
en 4 ° C hasta su recogida. Electroforesis en gel de
agarosa. T (ODD G. BRAKSTAD,l 2* KJETILL
AASBAKK,2 AND JOHAN A. MAELAND2, 1992)
3. ARESULTADOSPLICACIÓN DE
PROTOCOLO
El conjunto de cebadores sintetizado para este
estudio permitió la PCR. Amplificación de un
fragmento de gen cuando las cepas de S. aureus
fueron Se lisan y amplifican por 35, 37 o 40 ciclos.
encontramos que 37 Los ciclos fueron óptimos.
Incrementos en el tiempo de recocido desde 0.5. a 2
min y el tiempo de extensión del cebador de 1,5 a 2
min lo hizo no aumenta la sensibilidad del método.
La figura 1 muestra los resultados obtenidos cuando
algunas cepas de referencia de S. aureus y no s.
estafilococos aureus fueron probados en el PCR Las
cepas de S. aureus fueron amplificadas, mientras
que las no S. Las cepas de aureus no lo fueron. El
producto de la PCR apareció como una sola banda
de ADN con un tamaño cercano al de la banda de
267 pb. del pBR322 HaeIII DNA digest (Fig. 7A).
Este tamaño es cerca del tamaño esperado de 279
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pb para el producto de PCR. Repita la prueba de

algunas de las cepas que examinamos. Mostró los
mismos resultados. Una sonda de ADN de 33 meros
correspondiente a una secuencia del gen nuc
ubicada entre los sitios de los dos cebadores
hibridados a los productos de PCR por Southern
Análisis de transferencia (Fig. 7B). Este hallazgo
confirmó el gen nuc origen de los productos
amplificados.
Sensibilidad. El límite inferior para la detección de S.
aureus se examinaron células bacterianas o ADN
aislado por PCR. UNA suspensión de S. aureus
Foggi se diluyó en solución salina, y las bacterias
fueron contadas por microscopía de
epifluorescencia y determinación de la Unidad
Formada por Colonias UFC. La amplificación que
resultó en niveles detectables de producto de PCR
se logró cuando un mínimo de se lisaron 6 UFC de
células de S. aureus; esto correspondió a 14 células
determinadas por microscopía de epifluorescencia
(Fig. 6A). Al repetir la prueba de células viables de
S. aureus, el límite de detección osciló entre 5 y 20
UFC. Límites de detección similares fueron
observado cuando otras cepas de S. aureus (Wood Figura 7. Electroforesis en gel (A) y análisis de
46 y V8) fueron examinados. Se aisló ADN de S. transferencia Southern (B) de Productos de PCR
aureus Foggi, Serialmente diluido en solución salina, amplificados a partir de aproximadamente 100 células de
y utilizado como plantilla. Los resultados mostrados S. aureus. Foggi (carril 1).
(Fig. 6B) que 0,69 pg. de ADN purificado en la
reacción la mezcla fue el mínimo necesario para
obtener una PCR detectable producto. (O G Dentro de las metodologías propuestas
Brakstad, 2002) encontramos las pruebas de PCR, como el test más
apropiado para el seguimiento e identificación del
staphylococcus sp. por el tiempo mínimo de
adquisición de datos del orden de minutos, los
cuales superan en calidad de optimización de
resultados.
En el análisis de resultados obtenidos con cada una
de las técnicas, desde todos los puntos de vista
económicos, de practicidad, velocidad y
confiabilidad de las muestras, se puede concluir que
el método de amplificación por PCR, es el más
adecuado para el proyecto. Del cual podemos
Figura 6. Electroforesis en gel de productos de PCR proponer un protocolo de verificación antes de cada
amplificados a partir de diluciones en serie de células de cirugía tanto en pacientes como la verificación del
S. aureus Foggi (A) y ADN de S. aureus purificado (B) material quirúrgico. Commented [MM17]: o se necesita ustedes están
proponiendo los métodos, de donde entonces salen estos
resultados?
Antes de ingresar al paciente a la sala de cirugía se
le puede tomar una pequeña muestra del área donde
se le practicará la intervención. Con el método de
PCR, en cuestión de minutos se obtiene resultados

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positivos o negativos de la presencia del
Staphylococcus.
En cuanto al instrumental quirúrgico, éste previo a su
uso se le aplican diferentes técnicas de
esterilización, del cual se debe rotular con
respectivos datos, tales como fechas, lote, personal
a cargo, método de esterilización entre otros.
La propuesta ya teniendo identificada la metodología
más adecuada, lograr introducir como requisito de
protocolo para la identificación temprana del
patógeno en salas de cirugía sería poder tener un
lugar adecuado para realizar in situ estas pruebas,
aleatoriamente del instrumental utilizado, con el fin
de minimizar al máximo el riesgo de contagio con
Staphylococcus sp. De hecho, sería una propuesta
pionera en nuestro país la cual contaría con el
personal e instalaciones apropiadas e idóneas para
la toma de muestras.
4. DISCUSIÓN (O ANÁLISIS DE RESULTADOS)
La discusión debe considerar los resultados en
relación con las hipótesis formuladas en la
introducción y el lugar del estudio en el contexto de
otros trabajos. Las secciones de Resultados y
Discusión (o análisis de resultados) pueden ser
combinadas.
5.4. CONCLUSION
Finalmente, se propone que al azar de tome un
instrumental de determinado lote, aplicarle el
amplificador de PCR, realizar el respectivo cultivo. Y
esperar a resultados.
Las conclusiones son obligatorias y deben ser
claras. Su contenido no debería duplicar
substancialmente el resumen. Deben expresar el
balance final de la investigación o la aplicación del
conocimiento o temática tratada. Se discute sobre
las implicaciones del estudio y la relevancia que
tiene para el área del conocimiento. Se sugiere no
concluir más cosas de las que los resultados
permitan. En esta sección se suelen mencionar
también los trabajos futuros que se pueden realizar
en el tema.Como es bien sabido en toda institución
prestadora de los servicios de salud en Colombia, se
14
rige por normativas de control de epidemias las
cuales se manejan bajo los programas de
tecnovigilancia y farmacovigilancia por parte del
Invima y las secretarias de salud locales, con el fin
de reducir al máximo los casos de eventos adversos.
Nuestro proyecto está enfocado en ser herramienta
importante dentro de los protocolos de control en las
salas de cirugía para el Staphylococcus sp.
6. AGRADECIMIENTOS
Los reconocimientos de personas, subvenciones,
fondos, etc., deben ser breves. Esta sección es
obligatoria para artículos de investigación, en esta
parte del artículo el autor hace un reconocimiento a
las personas o instituciones que le ayudaron en sus
investigaciones. Se citan becas e instituciones que
financian la investigación: firmas comerciales,
entidades oficiales o privadas, asociaciones de
profesionales y operarios. Esta sección es opcional
para artículos de reflexión.
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