ESCUELA SUPERIOR

POLITÉCNICA DE
CHIMBORAZO
FACULTAD DE
CIENCIAS
QUÍMICA ANALÍTICA
Ing. SOLEDAD NUÑEZ.
 UNIDAD V
TÉCNICAS
CROMATOGRÁFICAS DE
SEPARACIÓN
La cromatografía es una técnica que permite separar,
aislar e identificar los componentes de una mezcla de
compuestos químicos.

Los componentes de la mezcla a separar invierten un

tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con
lo que se produce la separación.

La separación se lleva a efecto en una columna tubular

rellena de un sólido poroso finamente dividido, el cual
puede actuar como fase estacionaria propiamente
dicha como soporte de una fase estacionaria líquida.

Estos tres tipos de cromatografía se basan en los mismos

principios fundamentales, y se conocen
respectivamente como cromatografía en columna, en
papel y de capa fina.
Los métodos cromatográficos se pueden clasificar según la
forma en que la fase móvil y la fase estacionaria se pongan
en contacto.

En la cromatografía en plano, la fase estacionaria se fija

sobre una placa plana o a los intersticios de un papel; en
este caso la fase móvil se desplaza a través de la fase
estacionaria por capilaridad o por gravedad.

La técnica más usada es la cromatografía líquida de alta

resolución(HPLC), por su sensibilidad, fácil adaptación a las
determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la
separación de especies no volátiles y su aplicación a
sustancias de primordial interés en la industria,
LUGAR QUE OCUPA LA CROMATOGRAFÍA EN
LA CARACTERIZACIÓN DE MATERIALES
 DESCRIPCIÓN GENERAL Y VARIABLES DE LA
CROMATOGRAFÍA
Cromatografía. Los
componentes a separar se Fase estacionaria. Es una de Fase ligada. Una fase
distribuyen entre dos fases, las dos fases que forman un estacionaria que está unida
una de las cuales está en sistema cromatográfico. de forma covalente a las
reposo mientras que la otra Puede ser un sólido, un gel o partículas de soporte o a la
se mueve en una dirección un líquido. pared interior de la columna
definida.

Fase inmovilizada. Una fase

Fase móvil. Fluido que se Eluir. Proceso en el que la
estacionaria que está
filtra a través o a lo largo del fase móvil se desplaza a lo
inmovilizada sobre las
lecho estacionario, en una largo de la fase estacionaria
partículas del soporte o
dirección definida. Puede transportando los
sobre la pared interior de la
ser un líquido. componentes a separar.
columna
 DESCRIPCIÓN GENERAL Y VARIABLES DE LA
CROMATOGRAFÍA
Componentes
Efluente Muestra Soluto
de la Muestra

Disolvente Zona Cromatograma Cormatografiar

Cromatógrafo
CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS
CROMATOGRÁFICOS
 CLASIFICACIÓN
Las técnicas cromatográficas pueden clasificarse según
diferentes criterios: atendiendo al modo como las fases se
ponen en contacto y atendiendo a fundamento del proceso
de separación. En este último caso en definitiva se trata de la
naturaleza de las fases y del tipo de interacciones que tienen
lugar entre los solutos y las fases utilizadas.

A continuación veremos la clasificación atendiendo al

fundamento de la separación (naturaleza de las fases y tipo
de interacciones.
 CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS

Cromatografía de
adsorción: la fase
estacionaria sólida retiene
a los solutos por un doble
efecto de adsroción física y
química.
Cromatografía de cambio
iónico: el sólido retiene a los
solutos gracias a
atracciones electrostáticas.
Cromatografía de
exclusión: la fase
estacionaria es un material
poroso, que retiene a las
moléculas en función de su
tamaño
 CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS

Cromatografía de afinidad o de fases

Cromatografía de reparto: la fase
enlazadas: la fase estacionaria es
estacionaria es un líquido
generalmente un polímero de tipo
inmovilizado sobre un material inerte
líquido inmovilizado sobre un sólido
sólido que sólo actúa de soporte.
inerte por enlaces covalentes.
 CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA CLÁSICA
La cromatografía liquida “clásica” se lleva a cabo en una
columna generalmente de vidrio, la cual esta rellena con la
fase líquida. Luego de colocar la muestra en la parte
superior, se hace fluir la fase móvil a través de la columna por
efecto de la gravedad.

Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones,

el tamaño de las partículas de fase fija se fue disminuyendo
hasta el tamaño de los micrones, lo cual genero la
necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la
fase móvil.
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA CLÁSICA
 CROMATOGRAFÍA DE GASES (FASE MÓVIL
GASEOSA)

Cromatografía de adsorción Cromatografía de partición

(o cromatografía gas-sólido)
la fase estacionaria es un
sólido finamente dividido,
que retiene a los solutos por
adsorción.
o reparto la fase
estacionaria es un líquido
retenido por impregnación
o por enlace sobre un sólido
inerte.

Cromatografía en
columna: la fase
estacionaria se introduce
en un tubo estrecho a
través del cual se hace
pasar la fase móvil.
Cromatografia en papel
CROMATOGRAFÍA DE FLUIDOS
SUPERCRÍTICOS
Cromatografía de
Cromatografía plana: la adsorción o CLS: Se basa Cromatografía líquida por Cromatografía por
fase estacionaria se en la afinidad de exclusión o CE: separa intercambio iónico o CII:
coloca en un soporte adsorción. Es la forma solutos según el peso Separa solutos según la
plano. clásica de la molecular. carga iónica.
cromatografía de líquidos.
Cromatografía en capa
fina
 CLASIFICACIÓN
La gran variabilidad de los métodos cromatográficos se debe a
las diferentes condiciones que pueden utilizarse para separar los
componentes de una sustancia. Todas estas técnicas tienen en
común la existencia de una fase estacionaria a través de la cual
fluye una fase móvil, así como la presencia de un mecanismo
de inyección de la muestra y un mecanismo de detección de
los diferentes componentes separados.
 CLASIFICACIÓN
TIPO FASE ESTACIONARIA FASE MÓVIL
Sólido inerte como gel
Líquido - sólido Disolventes
de sílice o alúmina
Intercambio Resina cambiadora Soluciones
iónico acuosas

Líquido absorbido en un
Líquido – líquido Líquido
soporte sólido

Película de líquido
Gas – líquido absorbida sobre un Gas
soporte sólido