Bacteriología – 07 – Patogenos que ingresan x via transcutánea

Contamos con una 1era linea de defensa en contra del ingreso de microorganismos, estas son:
1) Piel: fx de cubierta profecta, barrera mecanica ante agentes ext y ademas glas secretan susts microbicidas
2) Barreras muco-cutaneas: (tejidos no queratinizados, recubren cavidades humedas y algunos organos) estan
asociados a glas secretoras de liquido espeso (mucus). Ejemplos: mucosa oral, nasal, rectal, vaginal, etc…
Fx inmunologica de las mucosas:
- Expulsion mecanica de objetos extraños.
- Secrecion de enzimas antimicrobianas defensivas (lizosima, lactoferrina…)
- Accion inmunologica de la Flora normal de la piel (tb secretan susts bactericidas)
- Secrecion de sustancias con capacidad de destruccion de elementos y organismos extraños

Sin embargo, estas barreras pueden alterarse, dando lugar a infecciones por via transcutanea que sino no
tendrian cabida...(x erradicacion de flora normal; quemaduras; cirugias; enferms de piel; lesiones cortantes, etc)
Bacterias “oportunistas” que pueden ingresar por via percutánea por alteracion de barreras muco-cutaneas son:
Sta. aureus; Str. pyogenes; Staphylococcus coagulasa-; Pseudopmonas aeruginosa; Acinetobacter spp;
Otros bacilos G- no fermentadores de glucosa; Clostridium tetani; Leptospira interrogans; etc…

Staphylococcus coagulasa-negativo - (G+)

Son cocos G+ en racimo; Varias especies de Staphylococcus: s.epidermidis; s.saprophyticus; s.haemolyticus, etc.
Pertenecen a flora normal de la piel, pero producen patologias endogenas oportunistas cuando hay
ruptura de barreras muco-cutaneas. Ppalmente patos intrahospi en neonatos y gente c/ impl. (x hacer biofilm!!)
Adhesinas afimbricas (no polimericas) de tipo sdr: union a HdC de cels / union a prots libres / a endot.

Acinetobacter spp. - (G-)

Bacilo G-; no fermenta glucosa; inmoviles; oxidasa-; catalasa+; contienen endotoxinas pero no exotoxinas
Es un ‘oportunista intrahospitalario’que puede producir:
a) Neumonias; b) Bacteriemias; c) Infecciones de piel y partes blandas; d) Infecciones urinarias

Otros bacilos G- no fermentadores de la glucosa de importancia clinica

Genero Stenotrophomonas: especie mas frecuente, S. maltophilia. Ambiental y oportunista, produce
infecciones intrahospitalarias en inmunosuprimidos:
 Infecciones de heridas; Neumonias; infecciones de cateteres y sepsis.

Genero Burkholderia: B. cepacia. Amb y oportunista en inmunosuprs o pacientes c/ fibrosis quistica, da:
 infecciones pulmonares y sepsis.

Clostridium tetani - (G+)

Bacilo G+; anaerobio estricto; esporulado (larga supervivencia en el medio ambiente)
No es invasivo; puede ingresar x piel y mucosas a traves de heridas, etc... Agente etiologico de Tetanos
Produce una Neurotoxina secretada localmente pero que actua a nivel del SNC:
 Tetanoespasmina (Toxina espasmogénica termolábil):
Bloqueo presinaptico de liberacion de NT en neuronas inhibitorias (motoneuronas y Renshaw) de
medula espinal y tronco encefalico  se pierden señales inhibitorias de motoneuronas gamma 
predominio de actividad excitatoria de motoneu alfa  perdida de coordinacion, hipertonia y
contracturas generalizadas  Paralisis espastica.
Leptospira interrogans
Espiroqueta aerobia, con extremos ganchosos; es muy fina para ser vista al microscopio optico comun. Se
encuentra gralmente en orina de animales infectados. Produce diversas (aunque c/ sintomas similares) enfermedades
diseminadas de origen zoonotico (la mas grave de ellas es la icterohemorragica, conocida como enf. De Weil)
Principales factores de virulencia:
- Toxinas: LPS; Esfingomielinasa y Fosfolipasa C (ambas pueden hemolisar); Citotoxinas tisulares
- Adhesinas: Adherencia a celulas epiteliales y celulas renales; adherencia a fibronectina.

Pseudomonas aeruginosa - (G-)

Bacilo G-; aerobio estricto; no fermenta glucosa (a diferencia de las enterobacterias, que sí). Produce 2 sideroforos.
Se adhiere mediante fimbrias tipo 4 (codificadas x genes pil; union a gangliosidos) sus receptores son expuestos
por neuramidinasas bacterianas que producen clivaje previo de acido sialico. // (puede formar biofilm ¡!)
Y tb se adhiere x adh.afimbricas lectinas PA-IL y PA-IIL, q’ pueden dar citotox en linfos y mucosa respi
Produce amplia variedad de patologias:
1) Alteracion de barreras cutaneas  infeccion de piel y partes blandas
2) Colonizacion de vias aereas sups  Neumonias intrahospitalarias
3) Sonda vesical o malformaciones vesico-ureterales  Infecciones urinarias
4) Sepsis
Toxinas extracelulares de P. aeruginosa:
a) Exotoxina A: de tipo A-B; necrotizante, inhibe la sintesis proteica ADP-ribosilando un factor de
elongacion; es secretada por sistema de secrecion tipo 3 (?).
b) Elastasa: proteolitica; degrada elastina, IgG, IgA y colageno. Inhibe rta inmune de IFN y cels NK.
c) Fosfolipasa C: degrada lipidos; puede dañar mbs celulares y digerir el surfactante pulmonar.

Biofilms o Biopeliculas: Comunidades de microorganismos adheridos a un tejido vivo o una

superficie inerte embebidos en una matriz de exopolisacaridos.

Etapas de su formacion:
1 – primera incrustacion bacteriana a la superficie
2 – Celulas incrustadas proliferan y se van estimulando entre sí
3 – El contacto cel a cel estimula formacion de microcolonia y sintesis de exopolisacarido
4 – Maduracion del biofilm, mas sintesis de exopolisacarido y continuacion de la replicacion.
5 – Diferenciacion de las celulas  liberacion y diseminacion de las bacterias.

¿Para qué sirve?...

Ej 1: Biofilm en Staphylococcus coagulasa-negativo:
 Predispone a infeciones relacionadas con dispositivos como cateteres y protesis o tejidos vivos.
 Expresion del cluster genetico ica (inter-cellular adhesin)
 Componente: exopolisacarido de adhesion intercelular (PIA)
 Proteccion vs sistema inmunitario y agentes antimicrobianos/ticos, ya que no penetran exopoli!
Ej 2: Biofilm en Pseudomonas aeruginosa:
 Favorece adherencia, evasion inmune y a accion de antimicrobianos / antibioticos
(esto es xq leucocitos, al igual que antibioticos, no pueden penetrar exopolisacaridos y llegar a bacts!)
Estrategias utilizadas por las bacteria para producir patologia…
1) Biofilm: en Pseudomona aeruginosa y Staphylococcus coagulasa negativo

2) Adherencia a superficies biologicas o fomites:

 Fimbrias (adhesinas polimericas): union a recepts epiteliales
 Adhesinas afimbricas (no polimericas): union a HdC en epit; Prots libres o adheridas; union a endot

3) Captacion de nutrientes esenciales: Sideróforos: proteinas quelantes, captan hierro extracelular. El Fe es

transportado al citoplasma por un complejo proteico de membranas (ATP dpte) reducido y utilizado. (P. aeruginosa)

4) Produccion de toxinas:
 Toxina estructural o Endotoxina bacteriana: LPS de toda G-, potente inductora de shock septico.
 Toxina secretadas extracel que generan daño local: pueden causar citotox; destruccion tis; proteolisis;
lipolisis; inactivacion de componentes del sist.inm // fx: favorecen captacion de nutrientes y diseminacion
 Toxinas inyectables a traves de Sist.Secrec q’ generan daño local: muchas a traves del SSTT.
 Toxinas secretadas localmente pero que actuan a distancia: como Neurotoxina de Clostridium tetani.

5) Autorregulacion de la expresion genetica: Sistemas de “Quorum Sensing” (o fenomeno de autoinducc)

El Quorum sensing es un mec de control de expresiones geneticas dependiente de la densidad celular.

(de esta manera la bacteria puede saber si está rodeada de otras bacterias iguales a ella)
 Funciona a traves de sustancias autoinductoras enviadas como señales al medio extracelular.
Con alta densidad de bacts (y alta [] extracel de autoinductores), se disparan mecs de activ. transcripcional!

Ejemplos de genes regulados x quorum sensing:

- genes agr en S. coagulasa negativo: actividad pro-inflamatoria, inductores de sepsis, etc…
- gen de elastasa en P. aeruginosa: actividad proteolitica y modulatoria del sistema inmune.

6) Persistencia y cronicidad: formacion de “Variantes Puntiformes” (small colony variants)

Son colonias pequeñas, auxótrofas (c/ defeciencias nutricionales) y c/ resistencia aumentada a gentamicina
Dificilmente erradicables y pueden revertir a fenotipo normal. Favorecen persistencia y cronicidad por:
- Mejor internalizacion en cels eucariotas (lo que les confiere mejor resistencia al sistema inmune)
- Aumento de la adherencia a los tejidos.
- Resistencia a algunos antimicrobianos como aminoglucósidos.

Bacteriología – 08 – Patogenos que ingresan x via urogenital

 ¿Cómo ingresan bacts al
Tracto Urinario?
- Via descendente:
Bacts transportadas en sangre
y capaces de hacer ciclos de
bacteriemia.
(Leptospira spp; S. typhi)
- Via ascendente:
Bacterias que colonizan
region perineal y periureteral

Infc via ur baja = Cistitis

Infc ii alta = Pielonefritis

Mecanismos de defensa inespecificos p/ evitar infeccion urinaria: (gracias a ellos no siempre hay infecc)
 Flujo de orina  Arrastre de los microorganismos
 Composicion de la orina  Alta [] glicoprot Tamm-Horsfall, urea y ac. Organicos no disociados
 Bajo pH y Alta o Baja osmolaridad
 Accion de esfinter  impide entrada de bacterias a la uretra
 Superficie mucosa  Efecto de antiadherente de la capa de mucopolisacarido; barrera; IgAs.

Para la posibilidad de infecciones deben tenerse en cuenta:

* Alteraciones anatomica, fx’s o de mecs de defensa; tiempo p/ multipl; y ppal factores de virulencia!!
La severidad de la infeccion urinaria es reflejo de la virulencia bacteriana:
- Cepas que causan bacteriuria asintomatica  expresan pocos factores de virulencia.
(adhesion labil al uroepit; reproduccion; eliminacion por orina  no hay lesion inflamatoria.)
- Cepas que causan enfermedades severas  expresan todos los factores de virulencia.
(adhesion labil/fuerte; reproduccion; daño epitelial c/ lesion inflamatoria.)

ITU’s (infecciones del tracto urinario) producidas por: E. Coli (90%; pero c/ facts de patogen!); Proteus spp;
Staphylococcus saprophyticus; Streptococcus grupo B; Klebsiella spp; Enterobacter spp; Candida spp.

Muestra representativa: Orina. Considerar…

- Precauciones para la toma: Correcta higiene genital; 1ª orina de la mañana pero no el 1er chorro
(porque el 1er chorro viene conteniendo la flora normal, y la idea es que la muestra a estudiar este libre de ella)
- Condiciones de conservacion: Recipiente esteril  guardar en heladera y llevar en hielera

E. coli uropatogena - (G-)

A la derecha el esquema muestra como E. coli comensal en
intests se convierte en un microorganismo uropatogenico.
Se transmite desde el recto hacia las vias, y x transferencia
de genes adquiere factores de patogenicidad que le dan la
capacidad de causar infeccion urinaria. (fago y plasmido)
 Factores de patogenicidad de
Escherichia coli uropato:
¿Porq’ la bacteria necesita de
las adhesinas fimb y af?:
Para poder adherirse y luego no
ser barrida por el flujo de orina
que correrá por allí.

Varios genes de facts.pato estan

codificados en Islas de
Patogenicidad (llamadas I a X)

Perdida de PAI-II (fimbrias)

determina perdida de nefropato

 Adhesinas fimbricas:
 Tipo 1: adherencia a capa uromucoide (prot Tamm-Horsfall) // Union labil xq recept se renueva!
 Fimbrias P: adherencia a globosidos de epitelio renal // Union firme asociada a pielonefritis!
 Adhesinas afímbricas: Hemaglutinina Dr; Adhesina F
 Flagelos peritricos: Ag flagelas H, motilidad.
 Sideroforos
 Capsula: Ag K; mayor resistencia a la fagocitosis y accion del complemento
 Matrix exopolisacarida: Permite estructurarse en biofilms!
 LPS: Ag O; tox induce liberacion de citoquinas proinflamatorias
 Hemolisinas: daño tisular; liberacion de Fe

Tracto genital
Infeccion genital Endogena
Es causada x Flora normal
(ej. vaginosis)
Infeccion genital Exogena
(de transmision sexual [ITS])
(ej: uretritis/cervicitis; Sifilis)

¿Qué infecciones causan?

1) Infeccion perinatal:
(durante el paso x canal parto)

- Portacion: S. agalactiae (grupo B); L. monocytogenes; E. coli; Ureaplasma urealyticum

- Infeccion: Neisseria gonorrhoeae; Mycoplasma genitalium; Chlamydia trachomatis D-K

* Streptococcus agalactiae (grupo B): Capsula; C5a peptidasa (menos quimiotaxis); Hialuronidasa;
Bhemolisina (daño a tejidos); Factor camp (prot termoestable difusible – es importante p/ diagnostico)
* S. agalactiae: Muestra  profilaxis sepsis neonatal // hacer hisopado vaginal y perianal en embarazo 35-37s
2) Uretritis y Cervicitis
 N.gonorrhoeae – exudado abundante y purulento
 Chlamydia trachomatis; Ureaplasma urealyticum; Mycoplasma genitalium – exud. menor y mucoide

Muestras representativas:
- Mujer: Hisopado de cervix y fondo de saco
- Hombre: Hisopado ureteral // primer chorro de orina (p/ Mycoplasma)

Neisseria gonorrhoeae - (G-)

Diplococo G-; oxidasa+ (como todas neisserias); el unico HdC que fermenta es la glucosa.
Penetracion de la bacteria a la capa submucosa induce un fuerte influjo de PMN  Piógeno

- Entrada y colonizacion
de distintas superficies mucosas:
Uretra masculina; cervix fem; epitelio
intestinal (sexo anal); epitelio faringeo
(sexo oral); conjuntiva (en neonato)

- Establecimiento:
PILI: Adherencia inicial a cel epit.
OMP: Proteinas de mb.ext
 Por I: desbalance osm y lisis de bact
 Por II: Opa. Union firme. Invasion
 Por III: RMP. Enmascara Ag.
 Prot receptora transferrina y lactoferr.

- Patogenesis:
Adherencia a epitelio uretral…
Endocitosis  Transcitosis 
Fagocitosis por macrofagos y PMN
LPS y exoenzimas producen daño cel
Por destruccion de epitelio y tambien
de fagocitos, hay mas diseminacion y
un “exudado infeccioso”.

N. gonorrhoeae tiene variacion antigénica cambiando la composicion de aa de, p.ej, las adhesinas, para
poder así tener mejor adhesion y evadir al sistema inmune.
Tambien hace cambio de fase, ya que la
expresion de ciertas prots de supf es “encendida” o “apagada” con alta frecuencia. (p/ evadir inmun)

Otros factores de patogenicidad:

- Lipooligosacarido (LOS): Actividad de endotoxina. Resistencia al suero. Ac Sialico da resist a fagos.
- Peptidoglicano: induce respuesta inflamatoria por lisis bacteriana
- IgA Proteasa: Destruye IgA

Individuos pueden “reinfectarse”, ya q’: se genera (solo?) respuesta humoral; hipervariabilidad de antigeno
Mycoplasma genitalium y Mycoplasma hominis
Pleomorficos; Ausencia de pared celular; Resistentes a beta-lactamicos; Genoma pequeño (por lo cual
carecen de capacidad de sintetizar precursores para la biosintesis de proteinas y acidos nucleicos) , Mb cel con
colesterol y esteroles esenciales; Daño: genera H2O2 que induce stress.ox en el huesped y daña su mb.
(este mec de daño es potenciado gracias a que la bacteria, por algun mec, logra inhibir la catalasa del huesped¡!)

- Mycoplasma spp. -
.

Factores de virulencia: …Consecuencias…

Adherencia intima a cel huesped,
Organela de adherencia
previa a la fusion de membrana
Generacion de H2O2 y rads. Superox. Estrés oxidativo y daño en mb.cel
Competencia y deplecion de nutrientes Interrumpe estabilidad y fx’s cels
Secrecion de enzimas (fosfolipasas,
Ruptura de tejido y
ATPasas, hemolisinas, proteasas,
aberraciones cromosomales
nucleasas) al interior del huesped
Variacion antigénica Evasion de sistema inmune
Estadios de latencia y cronicidad;
Residencia intracelular
Mecanismo de evasion inmune.

…Repaso…

E. coli uropatógena
- Colonizacion y establecimiento: Fimbrias tipo 1 y P
- Diseminacion y multiplicacion: Motilidad x flagelos peritricos; Sideroforos
- Evasion: Capsula y Matriz exopolisacarida
- Daño: LPS y Hemolisinas (Islas de patogenicidad)

N. gonorrhoeae
- Pili
- OMP: PorI, Opa; RMP; Prot receptora transferrina y lactoferrina
 Variacion antigenica y Cambio de fase
- LOS
- IgA proteasa
- Peptidoglicano
Bacteriología – 09 – Patogenos que ingresan x via genital

.
Agente Enfermedad Lesion
Ulcera genital (chancro)
Treponema pallidum Sifilis 1ª
(indoloro, no supura)
Chancroide Pápula pustular y ulcerada
Haemophylus ducreyi
(chancro blando) (dolorosa y supurativa)
Chlamydia Linfogranuloma Pequeña ulcera o vesicula.
trachomatis venereo (Cura y no deja cicatriz!)

Causan infecciones del tracto genital y son las ppales causas bactrs de lesiones en piel/mucosas genitales

 T. carateum (distribucion geografica limitada)  Pinta, enfermedad de Pinto o Carate

 T. pallidum subespecie pallidum (mundialmt)  Sifilis
 T. pallidum subespecie pertenue (india/china)  Pian o Frambesia
 T. pallidum subespecie epidemicum (limitado)  Bejes o Sifilis endemica

Treponema pallidum (subespecie pallidum) - (G-)

Espiroqueta G-; metabolismo Aerobio; No puede cultivarse en medios bacteriologicos (se hace en testic. conejo)
Amplia distribucion mundial; Transmicion sexual, vertical o por inoculacion; no hay portadores sanos; Dx x Ac.
No produce exotoxinas; es altamente movil; no resiste altas temperaturas ni desecacion.

Periodos en que se divide la Sifilis sin tratamiento…

 Incubacion (3-90d) – Contacto sexual
 Sifilis 1ª ( 3-4 sem) – Aparicion del Chancro
 Silencio (3s-6mes) – Curacion espontanea de chancro
 Sifilis 2ª (3-10sem) – Lesiones 2ª‘s diseminadas
 Latencia (<30años) – Curacion espontanea de lesiones
 Sifilis 3ª (>30años) –Lesiones 3ª’s  Discapacidad / muerte

Toma de muestra: impronta material transudado seroso de lesion

- Factores de virulencia:
 Adhesina apical: se une a fibronectina e induce endot para rta. Inflam
 Evasion de mecs de INMI/A x enmascaramiento (capa anfolítica) con: fosflips y prots de huesped
 LPS con muy baja actividad endotoxina
 Alta motilidad (promueve cruce de cepas tisulares) y Hialuronidasa  Diseminac. e invasion multiples tejidos

(Se puede dar Infeccion Congenita, ya que la infeccion se puede transmitir por via transplacentaria por
una madre enferma y sin tratamiento.)
Haemophilus ducreyi - (G-)
Agente etiologico de Chancro blando o Chancroide: enfermedad ulcerativa genital de transmicion sexual.
A diferencia de sifilis, la infeccion gralmente se limita a los genitales externos (50% c/ glio inguinal infc)
No produce elastasa, lecitinasa, lipasa o colagenasa (enzimas extracelulares)
Aunque el diagnostico es generalmente clinico (Dx Chancro, Herpes); Toma de muestra: De ulceras.

- Factores de virulencia:
 LPS que carece del tipico Ag O caracteristico de los patogenos entericos (LOS)
 Prots captadoras de hierro  Citotoxina probablemente responsable de la lesion  Hemolisina

Chlamydia trachomatis - (G-)

Bacts intraceles obligadas xq no tienen citocromos p/ sint ATP. Diseminan x contacto o aerosoles; Poseen ciclo de
replic c/ dos estadios (cuerpo infeccioso o elemental / c. replicativo o reticulado); Unico reservorio = Hombre

Serovariedad = diferentes Ag // Biovariedad = diferentes caracteristicas bioquimicas y fisiologicas

De acuerdo a caracts fisiologicas se diferencias 3 biovariedades: Biovar Pneumonitis (en raton)… y

Biovar Linfogranuloma venereo (LGV)  Invade tejido linfatico (4 serovars)
Biovar Tracoma (en el hombre)  Invade cels epiteliales de mucosa (15 serovars)
serova (Se diferencias x afinidad a tejidos)
biovar Enfermedad Caracteristicas
.
r
A-C Infeccs oftalmicas Tracoma Toma de muestra: Hisopado de
Tracoma Infeccs del tracto Uretritis; Cervicitis uretra, endocervix (tener cels)
D-K
.
Genital inf y sup. Epidermitis, etc…
Lesion transitoria Toma de muestra: Secrecion
Linfogranuloma
LGV L1,2,3 Linfadenopatia supur purulenta del bubon o glio infec
Venereo (LGV) Anormalidades drenj

C. trachomatis L1-L3 en neonatos de madres infectadas  Conjuntivitis oculoglandular; posible ulcera corneal

- Factores de virulencia: Son compartidos por todas las Chlamydias…

Cuerpo Elemental (CE)
(o infeccioso)
Tamaño: 0.3 um
ARN:ADN contenido = 1:1
Es infectante ¡!
Adaptado para vida extracel
Induce su propia endocitosis
Metabolicamente inactivo
Cuerpo Reticulado (CR)
(o replicativo)
Tamaño: 0.5 – 1.0 um
ARN:ADN contenido = 3:1
No es infectante ¡!
Adaptado para vida intracel
No induce su endocitosis
Metabolicamente activo
Envolturas de los c. elements y reticulares:
* mbpl y mb.ext como G-; espacio
periplasmico; carecen de peptidoglicano
* Proteinas ricas en cisteina
* Ppal prot c/ mayor entrecruzamiento es
la MOMP: interrelacionan c/ otras CRP
(Omc-A y Omc-B) p/ formar el COMC

- Union y entrada:
 MOMP recepts de manosa en cel huesped
 Chlamydia unidas a AC: receptores para FC
  MOMP y OmcB se unen a moleculas de heparina: recepts de los sulfatos de heparina de cel huesped

- Ciclo de vida: Todo el ciclo completo dura entre 48 – 72 hrs.

En la cel huesped el CE se reorganiza a CR dentro de la vacuola de inclusion. El CR crece y se replica
por fision binaria.
Despues de un tiempo de progenie en fase exponencial, el CR se comienza a diferen-
ciar a CE con la sintesis de prots como OmcB y OmcA, simil histonas Hc1/2 (p/ compactar cromosoma)
Los CE se liberan al exterior ya sea x fusion de la mb de inclusion c/ la mb. del huesped, o por lisis cel.

La interaccion vesicular de la vacuola de inclusion tiene como objetivo evitar formacion de fagolisosoma!
Endosomas no se fusionan con lisosomas; marcadores de union ausentes; expansion de la vacuola de inclusion;
fusion con vesiculas conteniendo esfingomielina (p/ crecer) derivadas de Golgi durante exocitosis 
Durante su ciclo en la vacuola de inclusion, transporta proteinas a traves de sus membranas.
Las prots Inc (inclusion) son ancladas en el entorno de la mb.vacuolar, proyectandose al citoplasma de
la celula huesped, donde interfieren con el sistema de señalizacion celular  muchas señales de
transduccion, incluyendo controles del ciclo celular y señales de transduccion mitogénicas.

Otras proteinas de Chlamydia se liberan al citoplasma de la celula huesped:

 CPAF (Chlamydia proteosome-like activity factor): cliva factores de transcripcion eucariotas
para la expresion de Ag por los complejos mayores de histocompatibilidad I y II.
 CADD (Chlamydia protein associating with death domains) induce liberacion de bact x apoptosis!

Resumen…
Como se dijo, Chlamydias carecen de citocromo, no pueden sintetizar ATP; Son metabolicamente dependientes
del huesped, por lo cual se los llama “parasitos energeticos”; tb tienen la particularidad de acumular glucogeno.
Bacteriología – 10 – Diagnostico microbiologico y sensibilidad a antibioticos

El diagnostico microbiologico directo puede ser por: observacion al microscopio; cultivo; deteccion de
componentes bacterianos o Ag; deteccion de secuencias bacterianas especificas…
O puede ser un diagnostico indirecto por deteccion de Ac sericos.

Toma de muestras clinicas representativas:

- En sitios no contaminados c/ Flora normal: Biopsia / Sangre o LCR / Orina (puncion suprapubica)
- En sitios contaminados c/ Flora normal: Orina (miccion) / Esputo / Materia fecal

Dx directo: Tecns de identificacion de Ag bacterianos …

Tipo de muestra Tº ambiente Heladera
.

Sangre X Deteccion de componentes

Bacteria Bact o Ag… Tecnica:
Orina X -

LCR X Streptococcus spp.

Aglutinacion
Esputo y Respis X (Chlamydia) (hisopado de fauces)
Exudado Genital (N.gonorrho..) X
Haemophilus influenzae b
Exds. Faringeos X Aglutinacion
(Puncion lumbar - LCR)
Exds. Oculares X
Exd. Piel/bland X Neisseria meningitidis
Aglutinacion
Materia fecal X (Puncion lumbar - LCR)
Muestras anaerob X
Chlamydia spp. ELISA o
(hisopado vaginal) Aglutinacion
Diagnostico microbiologico directo:
- examen microscopico en fresco: puedo detectar hematies; leucocitos; epitelios; Candida spp.
- examen microscopico en fresco: Gram; Ziehl-Nielsen (mycobacters); Giemsa (bacts intracels); etc…
- Cultivo: - Medio liquido  enriquecer (es selectivo ya que deja crecer a algunas bacts y otras no)

- Medio solido  aislar (se usan para aislar las bacts una vez que fueron enriquecidas)
- Medios selectivos y Diferenciales  Los diferenciales ponen en evidencia alguna caract fenot
(agar chocolate) (Levine; McConkey)

- Identificacion bacteriana por – Pruebas bioquimicas (catalasa+/-; fermentacion de HdC, etc…)

- Identificacion de Ag bacts por Serotipificacion (si sospecho importacion)
(uso Ac especificos para detectar Ag de la superficie de la envoltura bact)

Resumen del diagnostico microbiologico Directo:

1) Cultivo
2) Aislamiento (identificacion)
3) Microorganismo patogeno
4) Pruebas de susceptib. a antibioticos

Objetivos de la prueba de susceptibilidad a antibioticos:

 Determinar la sensibilidad a un determinado antibiotico
 Determinar la eficacio de un antibiotico

Antibiograma de difusion (metodo de Kirby & Bauer)

Se usa para determinar sensibilidad a un antibiotico. Se hace de rutina!
En agar con bacts se agregan discos con antibioticos, que difundiran inhibiendo a la bact alrededor.
Luego hay que medir el halo de inhibicion alrededor y ver en la tabla si es sensible, etc…
En que bacts se hace?: Bacts de crecimiento rapido (enterobacts; staphylococcus; P. aeruginosa) o
bacterias fastidiosas (N. gonorrhoeae frente a penicilina G; S. pneumoniae frente a oxacilina, etc)
Resultados posibles: Bacts sensibles / Bacts de susceptibilidad intermedia / Bacts resistentes.

Hay dosis de antibiotico que son Bacteriostaticas y dosis (y drogas) que son Bactericidas. Las
primeras, p.ej, pueden inhibir el ciclo cel; las segundas, indefectiblemente destruyen las bacts.
La osteomielitis, al igual que endocarditis o meningitis, son enfermedades graves que requieren sí o sí para su
tratamiento concentraciones bactericidas del antibiotico utilizado . ¿Cómo sé esa concentracion?  CIM/CBM
Curva muerte
CIM ( [] inhibitoria minima) / CBM ( [] bactericida minima)

Medio solido (metodo patron): se puede utilizar para cualquier bacteria  de rutina!
CIM
Medio liquido (solo p/ bacts de crecimiento rapido) solo luego de ella puedo hacer CBM.

CBM  No rutina

CIM: Concentracion de antibiotico mas baja requerida p/

Inhibir el crecimiento bacteriano (todos los tubs = [bacts])
Para el tratamiento de infecciones sistemicas la dosis del
antibioticoen suero debe ser 3 a 5 veces valor de CIM ¡!

La CBM me sirve p/ saber la minima [] de Antibiotico

necesaria para ser totalmente bactericida (lisar bactrs)

¿Cuándo se pide una CBM? (no rutina)

Ante infecces sistemicas graves como
meningitis, endocarditis u osteomielitis
Que informacion obtengoendel
Porque?: Porque CBM/CIM
esos casos es ¿?
preci-so
 Si el sí
valor
o sí es menor obactericida
actividad igual a 2 =de
antibiotico
antb! bactericida
 Si el valor es mayor a 2 = antibiotico bacteriostatico

Curva de muerte: cuanto tiempo tarda el antibiotico en causar la muerte de las bacterias .  No rutina!
Se realiza para tener una estimacion mas dinamica de la accion bactericida de un antibiotico.
Obtengo tb informacion del efecto sinergico de 2 antibioticos/antagonista/indiferente (investigacion)
(Otra forma de evaluar la CIM es por medio del E-Test, realizado en medio solido con tirita c/ antbtco.)
PBS (poder bac-
tericida del suero)

Se utiliza para calcular la

concentracion adecuada de
antibiotico (en 1 paciente) con
poder bactericida, ya que
suero influye en accn.

Fx: la utilidad de todo esto es poder ajustar la dosis de un

antibiotico durante el tratamiento  No de rutina!

Eficacia de un antibiotico se mide de varias maneras, por ejemplo:

● ABC (area bajo la curva) ● Tiempo por encima de la CIM ● Efecto postantibiotico (EPA)
● Poder bactericida del suero (PBS) ● Curva de muerte
 Bacteriología – 11 – Anexo - Teoricos

1 - Taxonomia
Requiere 100% de O2 para vivir
El O2 se utiliza como aceptor de
Aerobio obligado
Electrones en el metabolismo.
El O2 es requerido p/ sint ATP.
Crecen mejor con poca [] de O2.
No pueden usarlo como acept e-
Microaerofilicos
Generalmente carecen de catalasa
Y varian cantidad de enz SOD.
Pueden crecer en toda atmosfera
Si no hay O2 muestran un meta-
Anaerobio facultativo bolismo fermentativo.
Si hay O2 el metab es mixto.
Alta tolerancia a cambios atmos
El O2 es toxico. No crecen c/ el
Diferentes especies varian en su
Anaerobio obligado
Sensibilidad al oxigeno.
Carecen de superoxido dismut.

Requieren por lo menos 10% de CO2

Cádmicos
para poder vivir y crecer.

“Especie bacteriana”: categoria q circunscribe un grupo geneticamente coherente de cepas / aislamientos

individuales que comparten un alto grado de similaridad en caracteristicas independientes.

2 - Interaccion

Vector: Medio por el cual se transmite un microorg:

 Biologico //  Mecanico: Inanimado (fomites) o Animado

Entrada: No todo encuentro culmina en una entrada. Existen diferentes vias de transmicion:
Via aerogena (aerosoles); Oral/Fecal; Urogenital; Transconjuntival; Cutanea / Transcutanea;
Sanguinea; Vertical (transplacentaria y perinatal)

Concepto de enfd de transmisible… “exog” = tétanos; “endog” = peritonitis por ruptura del apendice ileo-cecal.
Enfermedad emergente: ej: SIDA; Legionarios… // Re-emergente: TBC, Dengue, etc…
3 – Genetica bacteriana I

Bacts poseen nucleo funcional, pero no verdadero, ya que no tienen carioteca. Zona citoplasmatica es
nucleoide. ADN doble cadena cerrado circular superenrollado gracias a ADN girasa y símil histonas,
que no estan asociadas a la mayor parte del cromosoma, dejando genes más accesibles a ARN pol.

El cromosoma bact forma una unidad de replicacion independiente y dentro de la bact existe toda la
maquinaria para su replicacion autonoma. Toda unidad de replicacion se denomina “replicon” y, por
ende, el cromosoma bacteriano es un replicon.

Otros integrantes del genoma bacteriano:

- Plasmidos: molec de ADN extracromosomal q se replica en independientemente del cromosoma.
El plasmido puede recombinarse con el cromosoma por RecA en sitios de insercion “IS” cromosomales.

- Transposones: elemento genetico que se caracteriza por su capacidad de moverse dentro del genoma
bacteriano (pueden recombinarse en diferentes sitios del cromosoma, y pueden formar parte de plasmidos)
Porta genes estructurales (codifican prots), ademas de los genes necesarios para su propia movilizacion,
la cual gralmente es independiente del sistema de recombinacion de la celula bacteriana.
Fx’s: Tanto el cromosoma bacteriano como los plasmidos pueden adquirir nueva info mediante la
insercion de los transposones. Contribuyen a mutaciones por adicion: insercion de un nuevo transposon
o por delecion: perdida de un transposon. (no solo codifican genes de resistencia antimicrob, tmbien toxinas)

- Secuencia de insercion (IS): Secuencia de nucleotidos capaz de transponerse al igual que los
transposones, pero carecen de genes estructurales.
Fx’s: mantienen dinamica del cromosoma: modifican la expresion de genes, promueven reordenamientos, pueden
actuar como vectores de genes no transponibles, ofrece sitios de insercion p/ plasmidos en el cromosoma.

- Integrones y genes cassettes: Los genes cassettes son elementos moviles constituidos por dos
componentes funcionales: un gen y un sitio de recombinacion; existen bajo dos formas: libres en forma
circular, o integrados al genoma. Fx: forma eficaz de empaquetar info genetica.

- Integron: elemento genetico presente en plasmidos y transposones que permite la insercion de

diferentes genes individuales y les ofrece un promotor para que se expresen. Codifican una enzima que
actua en la recombinacion de los genes individuales (integrasa)
Fx’s: contribuyen a la evolucion de los plasmidos y transposones.

- Bacteriofagos (o fagos): Virus que infectan bacts y cumplen un ciclo de multiplicacion dentro de la
cel bact, pudiendo conducir a la lisis de la misma. (bact debe tener recept para el virus, sino no entrara)
Fx: Fago puede integrarse al genoma: “ciclo lisogénico”. El fago está en “estado de lisogénesis” o de
“profago”, formar parte estable del genoma bacteriano. La celula bacteriana puede desarrollar nuevas
caracteristicsa geneticas codificadas por el profago!

Concepto de diversidad clonal: una especie bact está compuesta por diferentes clones. Un clon se define
como el conjunto de bacts que derivan de un acestro en comun, como resultado de una misma cadena de
replicacion. Bacteriologicamente hablando, cepa es sinonimo de clon.
4 – Genetica bacteriana II

Variacion genetica como control de la expresion de genes que codifican factores de patogenicidad, lo
cual depende de señales que la bacteria recibe del medio circundante una vez q’ halla al huesped.
Estas señales para expresar pueden ser: temp; osmol; [O2]; [Fe]; etc… y puede regularse expresion de genes por:
- amplificacion en el numero de copias
- Variacion de fase: inversion de segmentos geneticos, cambiando promotor de lugar p/ expresar o no.

* Transferencia de informacion genetica intra e inter especies

Transferencia horizontal de genes: una bact patogena para un determinado huesped emerge de
ancestros no patogenos mediante la adquisicion de factores de patogenicidad codificados por genes
portados en bacteriofagos, transposones, plasmidos o mediante la incorporacion de fragmentos de ADN
“extraño” a su especie en su genoma mas que por la mutacion de sus genes preexistentes.

- Isla de patogenicidad (PAI): Bloques de ADN que codifican factores de patogenicidad que son
adquiridos generalmente por transmicion horizontal. (Plasmidos pueden ser vectores de estos bloques o
pueden estar en cromosoma; portan genes de fats vir; posen contenido de G+C diferente de resto del genoma)

La transferencia de la informacion genetica inter e intra especies se realiza mediante:

 Transformacion natural consiste en la captura de ADN extracel (cromosomal o plasmidico) por la
celula bacteriana y su incorporacion en forma heredable para las cels hijas.
 Conjugacion: es el mecanismo de transferencia de genes de una bacteria a otra mediante el pasaje de
plasmidos. Es un mec muy efectivo p/ la diseminacion de plasmidos entre bacts G-; G+ y entre ambas.
(Transposon conjugativo: gralmente insertados en el cromosoma y se movilizan en forma indpte de la cel donante
a la receptora. Se esciden del genoma donante y adquieren forma libre circular de doble cadena intermediaria.)
 Transduccion: mec de transferencia de genes de una bact a otra x medio de un fago como vector.

Recombinacion homologa: la cel bact tambien cuenta con un sistema de recombinacion entre dos molecs de
ADN en el cual es necesario una importante homologia en una parte de las secuencias de ambas molecs. Tal
sistema se conoce como recombinacion homologa. Fundamental enz RecA. Recombinacion hom es vital para:
1) el mantenimiento de la integridad del genoma (reparacion del ADN)
2) la adecuada segregacion de los cromosomas. (tambien puede generar diversidad genetica)

5 – Adherencia

6 – Daño

Exotoxinas:
- Grupo I: se unen a recepts de cel euc y desde supf interfieren en señalizac intracel. (ej. Super Ag)
- Grupo II: afectan directamente la mbpl euc, induciendo permeabilidad x formar poros.
- Grupo III: deben internalizarse y luego afectan metabolismo intracel de cels euc susceptibles.
Exoenzimas: No se consideran toxinas xq no dañan cel huesped. (excepto Fosfolip de grupo II)
Hialuronidasa, elastasa, colagenasa, etc… destruyen MEC; se consideran “factores de diseminacion”.
IgA proteasa contribuye a colonizacion de mucosas;
7 – Evasion

8 – Generalidades de antibioticos

Antimicrobiano: sust producida por microorganismo o elaborada en forma total o parcial por sintesis
quimica, la cual inhibie el desarrollo o mata a otros microorganismos.
Si es sintetizado por microorganismos = antibiotico; si es sintetico = quimioterapico.

Fx’s

Pero luego de la introduccion de nuevo antibiotico, tarde o temprano se desarrolla resistencia…

La mayoria de los Atb utilizados derivan de compuestos producidos por bacts y hongos del suelo. Y la
flora microbiana del suelo desarrollo mecs para defenderse de la actividad de los Abt, es decir que son
mecs naturales, anterires al uso clinico de los Atb… las bacts pueden transmitir estos genes de defensa
en forma horizontal desde una cepa resistente a una cepa sensible.

La resistencia puede ser natural o adquirida a lo largo del tiempo.

Existen dos etapas de evolucion microbiana: la evolucion “clasica” por mutaciones gralmente; y la
evolucion “moderna”, por mutaciones, transferencia lateral de genes, transposicion, recombinacion, etc;
mayormente debido a la terapeutica actual con Atb y la presion evolutiva que esto genera.

Mecanismos de resistencia a antibioticos: (pueden ser adquiridas por transferencia hztal de genes)
 Eflujo del Atb: por bombas especializadas en la mb.
 Impermeabilidad al Atb: por ejemplo, ante B-lactamicos o aminoglicósidos
 Inactivacion enzimatica: como actividad de B-lactamasas
 Secuestro ● Proteccion del blanco: como por metilacion
 Modificacion del blanco: el Atb no puede encontrar su blanco
 Via alternativa del Atb: metabolizado por otras enzimas
 Reparacion del blanco ● Amplificacion del blanco ● Formacion del biofilm