PRACTICA Nº 6

PURIFICACIÓN DE PROTEINAS

Peter Héctor Condori Benavente

Universidad andina Néstor Cáceres Velásquez

RESUMEN:

Se llevó a cabo la purificación de albúmina a partir de sangre ovina. Se probó una alternativa
para obtener el plasma a partir de sangre: centrifugación. La centrifugación proporcionó los
resultados esperados, un contenido de proteínas de 42 g/L. Posteriormente se realizó la termo
precipitación del plasma así obtenido. El cual consistió en agregar bicarbonato de sodio, etanol
al 96% y se calentó a 20 °C para precipitar las proteínas contaminantes. Después de la
centrifugación se obtiene la albúmina purificada en el sobrenadante. El rendimiento volumétrico
fue de 0.3 mL de albúmina purificada. El rendimiento del secado fue de 78 % y el análisis de
electroforesis no muestra una dispersión de las bandas de la muestra secada, lo que indica que
no hubo degradación de la albúmina.

MATERIALES: CONCLUSIONES

 Beacker Con base a los resultados obtenidos en el

 Tubos de ensayo presente estudio, se concluye que la termo
 Sangre precipitación selectiva es una técnica
 Gasa factible para la purificación de albúmina que
 Centrifugadora ofrece buenos resultados con relativamente
 Guantes quirúrgicos pocos recursos, y que el secado por
 Bata aspersión es una operación factible que no
 Cloruro de sodio provoca degradación si quiere obtenerse la
 Bicarbonato de sodio albúmina en polvo. Por otra parte, con el fin
de obtener resultados concluyentes en
 Agua destilada
cuanto rendimiento y pureza alcanzados, se
METODO: sugiere efectuar un estudio de Western-
Blot, así como identificación de proteínas
Se investigaron una alternativa para la
por HPLC.
recuperación de plasma a partir de la sangre
canina.
ANEXO:
 Centrifugación: globulina y plasma;
precipitado 1 y sobrenadante 1.

Una vez recuperado el plasma de la sangre

mediante centrifugación (plasma), se le
aplicó la técnica de termo precipitación
selectiva para obtener un purificado rico en
albúmina (sobrenadante); así como un
subproducto con las demás proteínas
plasmáticas (precipitado)

CUESTIONARIO:
1. ¿Qué tipo de proteína es la albumina
estructural y funcionalmente?
La albúmina es una proteína que se
encuentra en gran abundancia en el plasma
sanguíneo, siendo la principal proteína de la
sangre. La concentración normal de
albúmina en la sangre humana oscila entre
3,5 y 5,0 gramos por litro, y supone
alrededor del 50% de la proteína plasmática
(1)
2. ¿En que se basa la centrifugación para
separar partículas de diferente tamaño?
La centrifuga obliga a una mezcla a
experimentar un movimiento rotatorio con
una fuerza de mayor intensidad que la
fuerza gravitacional, provocando la
sedimentación del sólido o de las partículas
de mayor densidad. Este es uno de los
principios en los que se basa la densidad:
todas las partículas, por poseer masa, se ven
afectadas por cualquier fuerza. La
centrifugación impone, gracias a la
aceleración centrífuga, un efecto parecido
al gravitacional: Las partículas
experimentan una aceleración que las
obliga a sedimentar.
Existe una correlación entre el tamaño, la
densidad de una partícula y la velocidad que
separa la partícula de una mezcla
heterogénea, cuando la única fuerza
aplicada es la de la gravedad. Cuanto mayor
sea el tamaño y cuanto mayor sea la
densidad de las partículas, más rápido se
separarán de la mezcla. Mediante la
aplicación de una mayor fuerza
gravitacional efectiva a la mezcla (como una
centrífuga lo hace), la separación de las
partículas se acelera. Esto es ideal en
entornos industriales y de laboratorio
porque las partículas que se separan
naturalmente durante un largo período de
tiempo pueden separarse en mucho menos
tiempo.
La centrifugación puede dividirse en
primera instancia en dos grandes grupos: La
preparativa y la analítica. En la primera, se
obtienen grandes cantidades del material
que se desea estudiar, mientras que en la
segunda se procede al análisis de las
macromoléculas utilizando la ultra
centrifugación. (2)
3. ¿Es posible saber si un proteína esta
pura? ¿Como?
La electroforesis es un método por el cual se
separan moléculas por tamaño o peso
molecular usando un campo eléctrico. La
separación se realiza comúnmente en un gel
que funciona como filtro poroso y está
constituido habitualmente de materiales
como agarosa o poliacrilamida. Su principal
uso es la separación de mezclas de
biopolímeros especialmente de ácidos
nucleicos (ADN o ARN) o proteínas. Los
ácidos nucleicos disponen de una carga
eléctrica negativa y cuando son separados
en el gel mediante una corriente eléctrica,
se dirigirán al polo positivo. A diferencia de
las proteínas que, se cargan mediante una
molécula llamada SDS (dodecilsulfato de
sodio) que se incorpora a las proteínas,
adquiriendo una carga negativa. Al colocar
una muestra de proteínas dentro del gel y
someterlas a una carga eléctrica, éstas
migrarán y se moverán a través del gel hacia
el polo positivo. Las moléculas más
pequeñas se moverán más rápidamente y
las más grandes quedarán cerca del lugar de
partida en el gel.(3)
Bibliografía
1 ECURED.
. https://www.ecured.cu/EcuRed:Enciclo
pedia_cubana. [Online].; 2019.
2 QUIMICO TL.
. https://www.tplaboratorioquimico.com
/laboratorio-quimico/procedimientos-
basicos-de-
laboratorio/centrifugacion.html.
[Online].; 2019.
3 ROJAS AC.
. http://conogasi.org/articulos/metodo-
gel-de-poliacrilamida-para-proteinas/.
[Online].; 2017. Available from:
http://conogasi.org/articulos/metodo-
gel-de-poliacrilamida-para-proteinas/.