Examen Laboratorio de Química Medicinal

“Discrimination of wild types and hybrids of Duboisia myoporoides and Duboisia

leichhardtii at different growth stages using 1H NMR-based metabolite porfiling and
tropane alkaloids-targeret HPLC-MS analysis”
Belén Charles Tabarez 261882

1. ¿Cuál es la importancia de conocer el origen biosintético de los alcaloides

tropánicos?
Como nunca habia habido un estudio detallado mirando los metabolitos primarios y
secundarios, correlacionando primario con metabolismo secundario utilizando tipos
salvajes e híbridos bajo condiciones de crecimiento totalmente comparables y
comparando los resultados con los de plantas cultivadas en el campo. Esto es de
gran importancia para comprender mejor el metabolismo de la planta y permitir la
optimización del proceso de mejoramiento y el cultivo de plantas hacia mayor
producción de biomasa y escopolamina.

2. ¿Qué es un metabolito primario y secundario?

Los metabolitos primarios son abundantes en la naturaleza, son indispensables para
el crecimiento fisiológico de la planta y conducen a la síntesis de metabolitos
secundarios ejemplos de metabolitos primarios son los aminoácidos, proteínas,
carbohidratos, lípidos, ácidos grasos, etc. En el artículo algunos metabolitos
mencionados en las plantas de Duboisia silvestres eran la sucrosa, glucosa, algunos
aminoácidos como la colina, prolina y treonina.
Se les llama metabolitos secundarios o ya denominados como metabolitos
especializados a los compuestos químicos sintetizados por las plantas que cumplen
funciones no esenciales en ellas, de forma que su ausencia no es letal para el
organismo, al contrario que los metabolitos primarios. Pueden desempeñar papeles
importantes de actividad biológica en el organismo humano. En el artículo mencionan
a dos flavonoides como el kaempferol y quercetina, además de alcaloides tropanicos
como la hiosciamina y escopolamina.

3. Para realizar un estudio metabolómico que aspectos se deben tener en cuenta.

a) Seleccionar un metabolito de interés
b) Conocer el espectro de cada uno de los metabolitos
c) Identificar las señales características de cada compuesto en relación en sus
estructuras.
4. ¿Por qué la industria farmacéutica sigue obteniendo los alcaloides tropánicos a
través de productos naturales?
Al menos lo mencionado en este artículo los alcaloides tropanicos de interés era
principalmente la escopolamina y su precursor la hiosciamina, entonces como los
híbridos de Duboisia myoporoides y D. leichhardtii tienen que ver con grandes
cantidades de escopolamina e hiosciamina es más fácil aislarlo de estas especies,
que lograrlo por alguna síntesis o vía biotecnológica que la industria farmaceutica
no ha tenido éxito todavía.

5. ¿Cuál es el objetivo de evaluar las distintas condiciones de cultivo, etapa de

desarrollo y el genotipo y que influencia tendrían en la producción de alcaloides
tropánicos? Explique.
El objetivo era ver en qué variante de cultivo, como lo fue la cámara con condiciones
estrictamente controladas climáticas y los cultivados a campo abierto influye más en
!a biosíntesis de metabolitos secundarios de interés de la escopolamina. Entonces
los factores a evaluar por medio de PCA, OPLS-DA y SUS era el genotipo (híbridos-
silvestre) y la edad (3 vs 6 meses), para observar la diferencia significativa entre
estás variantes. En el análisis estadístico observaron que el genotipo era más
influyente por el hecho de presentarse y detectarse durante las primeras etapas del
desarrollo de la planta. Además de que observaron ahí que los híbridos de Duboisia
presentaban cierta discriminación hacia los de tipo silvestre.

6. ¿Cuál es la técnica más empleado en la identificación de metabolitos en un extracto

natural, y por qué se escoge dicha técnica?
Se utiliza resonancia magnética nuclear ya que tiene la ventaja sobre otras técnicas
por su simple y rápida preparación de muestras y que te permite realizar estudios
de tipo high-speed throughput, es usado en el perfilado de metabolitos además de
ser una técnica no destructiva permitiendo la detección de compuestos de cualquier
polaridad dependiendo de la extracción.

7. ¿Cómo es posible identificar un metabolito en específico en un espectro de RMN de

una mezcla compleja?
Dado que se la complejidad de los espectros de un extracto es bastante grande,
muchas veces se traslapan las señales se tienen que identificar señales
 características de las señales de los marcadores químicos que hemos
seleccionados, que sean únicos de ese compuestos, si aparece una señal se puede
ifentificar con el compeusto determinado, la idea es que no se traslape para su fácil
identificación, muchas veces no pasa esto, y ocurre traslapaciones de las señales
caracteristicas, se hace algoritmos computacionales con más precisión pueden
distinguir claramente desplazamientos químicos que están muy cercanos.

8. Cuál es la principal diferencia entre la escopolamina y la hiosciamina que pueden

ser identificadas por NMR-1H.
El anillo epóxido de los de los hidrógenos del carbono 7 Y 6.

9. ¿Con que finalidad se realizó el análisis HPLC-MS? Menciona las principales

desventajas de dicha técnica.
Para hacer una mejor cuantificación de los metabolitos secundarios, es decir los
alcaloides tropánicos, es destructivo, no puedes analizar compuestos de cualquier
polaridad, y que se necesita preparación previa de la muestra.
10. ¿Qué información proporciona un análisis de componentes principales (PCA) y cuál
es su importancia en un estudio metabolómico?
Es un análisis estadístico donde podemos agrupar un gran número de señales
permite agrupar e identificar si hay diferencias significativas o similitudes con las
variables a estudiar, por ejemplo en los 3 o 6 meses ver los tiempos de recolección
de metabolitos de interés. Nos ayuda nos facilita el análisis y a analizar si tenemos
o no diferencia significativa

11. ¿Por qué podemos decir que la investigación realizada es un estudio metabolómico?
¿Cuál es la importancia de un estudio metabolómico?
Porque se hizo un estudio masivo de hightroughput a cerca de los metabolitos tanto
primarios y secundarios que tenían en las especies de Duboisia, es importante debido que
se hace una relación y comparaciones entre metabolitos, además tiene demasiadas
aplicaciones como por ejemplo al conocer las variables metabolómicas podría servir para
predecir la reacción de un ser vivo a la administración de los medicamento y/o alimentos,
de tal manera que el tratamiento podría particularizarse para cada individuo, eligiendo el
mejor principio activo y la dosis más efectiva.

12. ¿Qué estudios ómicos sugerirías para complementar la investigación? Justifique su

respuesta.
Al menos en el articulo menciona que los datos proteómicos y transcriptómicos son
muy recomendables para aclaración adicional de la regulación biosintética en la
planta, dado que actualmente no está bien dilucidada la forma en la que ocurre,
especialmente con respecto a enzimas clave como PMT, TR-1 y H6H.

13. En conclusión, describe ¿Qué condiciones recomendarías para aumentar la

producción de escopolamina?

Recomendaría realizar el cultivo en campo abierto, por el hecho de que al estar

interactuando con el exterior como lo es la exposición solar, incluyendo organismos,
animales, insectos la planta entra en un modo de estrés que sintetiza componentes
(metabolitos secundarios) para poder defenderse de los depredadores, entonces en
cierta forma este estrés ayuda a la mayor producción de síntesis de escopolamina
favoreciendo la ruta biosintética.