DAÑO Y REPARACION DEL ADN

DAÑO:

Cambios en la molécula de ADN que conducen a alteraciones en la replicación y transcripción, generando daño en la
viabilidad celular. Se puede producir por:

Errores en la replicación: depende de la fidelidad de la polimerasa para la selección del dNTP correcto para la
inserción en la cadena complementaria que se sintetiza a partir de ADN parental
Errores endógenos: generación de radicales libres de oxígeno. Capaces de acelerar la ruptura de las cadenas
de ADN
Exógenos: rayos X, rayos UV y agentes alquilantes.

REPARACION:

Procesos involucrados en la corrección del daño en el ADN. Es muy importante ya que una acumulación de
mutaciones puede conducir a envejecimiento o apoptosis celular.

Reparación directa (DRD):

No requiere eliminación de nucleótidos o bases nitrogenadas, sino que se emplean enzimas para reparar
directamente alteraciones nucleotidicas. Se utiliza ADN alquiltransferasa.
Escisión de bases:
Se elimina el nucleótido con la base mutada y se introduce un nucleótido correcto uniéndolo con los
nucleótidos adyacentes. Es una reparación completa e intervienen ADN glicosilasas
Corte de nucleótidos:
Repara el ADN que se encuentra distorsionado debido a la presencia de bases modificadas. Repara daños
que afecten cadenas largas (entre 2 y treinta bases. Proceso:
1. Un complejo multienzimatico recorre el ADN en busca de distorsiones en la doble hélice
2. Una vez localizadas, el esqueleto de fosfatos de la cadena afectada se corta a ambos lados de la región
alterada
3. Una helicasa elimina el oligonucleótido resultante de la digestión
4. El hueco se rellena con una ADN polimerasa y una ligasa.

TEMA 9: ARN, ESTRUCTURA, TRANSCRIPCION Y MODIFICACIONES POSTRANSCRIPCIONALES

Estructura del ARN

ADN ARN
Azúcar Desoxirribosa Ribosa
Adenina-Timina Adenina-Uracilo
Bases
Citosina-Guanina Citosina-Guanina

Unidad
Existen 3 clases de ARN

1- ARN mensajero: ARNm 3-5%

2- ARN de transferencia: ARNt 10%
 Transporta los aminoácido hasta el ribosoma
 Reconoce codones del ARNm durante el proceso de traducción o síntesis proteica
 Activa los aa permitiendo que el enlace peptídico se vea favorecido energéticamente, este aa
activado es transportado hasta el ribosoma donde es transferido al péptido haciente
 Reconoce los codones en el ARNm asegurando que el aa correcto será incorporado a la cadena. Esto
es posible porque contiene dos sitios activos, el cca 3’OH terminal, especifico de cada aa, y el
anticodón que se aparea selectivamente con el codón del ARNm.
 Diferentes ARNt que reconocen a un mismo aa se denominan isoaceptores.
 Cada tipo de ARNt lleva antepuesto el nombre del aa que transporta. Ej.: lisinil-ARNt
 Algunos aa pueden ser transportados por distintos tipos a ARNt. Que contienen distintos
anticodones
 Algunas especies moleculares de ARNt poseen un anticodón que es capaz de emparejarse con varios
codones diferentes
3- ARN ribosómico: ARNr 80-85%
 Complejos de ARN y proteínas forman dos subunidades (mayor y menor) que integran los ribosomas

En general todos los ARN son de hebra simple, pero el ARNt y el ARNr contienen extensas regiones de doble hélice
(la cadena de nucleótidos se dobla formando una horquilla.

Los ARN más pequeños son los de trasferencia, que contienen alrededor de 75 nucleótidos, mientras que el más
grande esta entre los ARNm que pueden tener más de 5 mil nucleótidos.

TRANSCRIPCION DEL ARN EN PROCARIOTAS

“Pasar la información que se encuentra en el núcleo en forma de ADN al lenguaje ARN, que es el que los ribosomas
leen para sintetizar las proteínas”

Consta de tres etapas:

1- Iniciación: El fragmento omega de la ARN polimerasa reconoce los promotores:

- Caja TATAAT, o caja de Pribnow
- Caja TTGACA

Una vez que la polimerasa reconoce el promotor más conveniente, se inicia la transcripción sin necesidad de
un primer o cebador.

2- Elongación: La ARN polimerasa lee de 3’ a 5’, de modo que la cadena de ARN se forma desde el extremo 5’ al
3’, antiparalelo a la cadena de ADN que sirve de patrón.
La copia de ADN a ARN se produce nucleótido a nucleótido, incorporando uracilo como base
complementaria a la adenina.
Cuando se han unido unos diez nucleótido, la subunidad omega se desprende.
Una vez que la polimerasa ha avanzado lo suficiente como para dejar libre el segmento de fijación inicial,
puede unirse a este otra holoenzima. Por este motivo es posible el ensamble simultáneo de varias moléculas
de ARN utilizando la misma formación, pudiendo tener distinta longitud, dependiendo del camino recorrido
por la polimerasa.
3- Finalización: el final de la síntesis es indicado por una secuencia específica en el ADN, que actúa como señal
de terminación. Tipos de terminación:
 - RHO dependientes: El ADN contiene secuencias especificas (sitios llamados Rut) a la que se unen una
serie de proteínas reguladoras de la terminación de la transcripción, como la proteína llamada factor
rho.
El factor rho es una proteína compuesta por seis subunidades idénticas de 46 KDa y tiene una alta
afinidad por ARN de cadena simple.
Cuando se une al ARN el factor rho hidroliza ATP y la energía liberada es capaz de mover este complejo
proteico a lo largo del ARN que se está sintetizando en dirección de la burbuja de transcripción.
Cuando llega a esta burbuja, disocia el hibrido ADN-ARN por un mecanismo desconocido, liberando el
ARN al citoplasma.
- RHO INDEPENDIENTE: señalizada por secuencias especificas del ADN que se está transcribiendo, por lo
que la ARN polimerasa se detiene al transcribirlas.
Estas secuencias son ricas en citosina y guanina, y están situadas en los extremos de los genes, seguidas
de secuencias ricas en timina, formando secuencias polindromicas, que cuando se transcriben el ARN
recién sintetizado adopta una estructura en horquilla que desestabiliza el complejo ARN-ADN, obligando
a separarse de la ARN polimerasa, renaturalizandose la burbuja de transcripción.

La transcripción de procariotas, puede ser bloqueada por inhibidores específicos, como el antibiótico rifampicina, que
inhibe la iniciación de la síntesis de ARN, o la actinomicina D, que bloquea la elongación del ARN.

TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS

 Maquinaria transcripcional mas compleja

 Solo una pequeña proporción del genomas es expresada a ARN
 Una constante proporción del genoma existe permanentemente como cromatina (ADN cromosomal)
altamente condensada y es transcripcionalmente inerte.
 Hay proteínas accesorias especificas llamadas factores de transcripción y son requeridos para una
transcripción eficiente de todos los genes eucariontes
 Diferentes al factor bacterial sigma, los factores de transcripción no se unen a la polimerasa directamente.
Ellos forman complejos con la cromatina (ADN cromosomal) antes del inicio de la transcripción y actua como
regulador positivo de la transcripción.

 Enhancers: zonas de ADN sobre las cuales se ejercen acciones potenciadoras o aumentadoras, de la
frecuencia con que se realiza el proceso transcripcional.

 Promotores: secuencia que define el sitio de iniciación de la transcripción de ARN

 Secuencias consenso en eucariontes: Caja de CAT y caja de Hogness (Caja de TATA)

Modificaciones al ARN eucarionte

En bacterias, los transcritos de ARN pueden actuar como ARN mensajeros(ARNm) inmediatamente. En eucariontes,
el transcrito de un gen codificante se llama pre-ARNm y debe experimentar un procesamiento adicional antes de
que pueda dirigir la traducción.

 Los pre-ARNm eucariontes deben tener sus extremos modificados por la adición de un cap 5' (al inicio) y
una cola de poli-A 3' (al final).

 Muchos pre-ARNm eucariontes sufren empalme. En este proceso, partes del pre-ARNm (llamadas intrones)
se cortan y se eliminan, y las piezas restantes (llamadas exones) se vuelven a unir.
Imagen superior: diagrama de un pre-ARNm con un cap 5' y una cola de poli-A 3'. El cap 5' se encuentra en el
extremo 5' del pre-ARNm y es un nucleótido de G modificado. La cola de poli-A se encuentra en el extremo 3' del
pre-ARNm y se compone de una larga cadena de nucleótidos de A (de los cuales solo se muestran unos cuantos).

El pre-ARNm contiene tanto exones como intrones. A lo largo de la cadena del ARNm hay un patrón alternante de
exones e intrones: exón 1 - intrón 1 - exón 2 - intrón 2 - exón 3. Cada uno se compone de un segmento de
nucleótidos de ARN.

Durante el empalme, se eliminan los intrones del pre-ARNm y los exones se vuelven a unir para formar un ARNm
maduro.

Parte inferior de la imagen: un ARNm maduro que no contiene las secuencias de los intrones (solamente exón 1 -
exón 2 - exón 3).

Las modificaciones en los extremos aumentan la estabilidad del ARNm, mientras que el empalme otorga al ARNm su
secuencia correcta (si no se eliminan los intrones, se traducirán junto con los exones y producirán un polipéptido "sin
sentido").

EXONES E INTRONES:

En la secuencia de ADN el contenido codificante de un gen no esta distribuido de forma continua a lo largo de dicho
gen, sino que tiene discontinuidades, llamadas intrones, cuya secuencia no codifica proteínas. Las partes de la
secuencia que codifican proteínas son los exones.

Tras la transcripción, el ARNm es procesado mediante un mecanismo llamado splicing y los intrones son eliminados,
resultando un ARNm madro que contiene únicamente la información de los exones.

ENZIMAS DE LA TRANSCRIPCION EN EUCARIONTES

- ARN polimeras I: localizada en el nucléolo, transcribe los genes de ARN ribosomal.

- ARN poimerasa II: en el nucleoplasma, transcribe los genes que codifican las proteínas y a los
precursores del ARN mensajero citoplasmático.
- ARN polimerasa III: en el nucleoplasma, transcribe el ARNr y los ARNt

CONTROL DE LA EXPRESION GENÉTICA