UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

CARRERA DE INGENIERIA BIOQUIMICA
BIOQUIMICA I

NOMBRE: Jonathan Gavilanes López; Cinthya Romero Flores.

PROFESOR: Ing. Carlos Moreno.
AYUDANTE: Egdo. Oscar Salazar.
SEMESTRE: 5° Ingeniería Bioquímica.
TEMA: AISLAMIENTO DE COLESTEROL

I. INTRODUCCION

El Colesterol es un esterol que se encuentra en los tejidos corporales y en el plasma

sanguíneo de los vertebrados. Se presenta en altas concentraciones en
el hígado, médula espinal, páncreas y cerebro. Todas las células de
los vertebrados en una u otra etapa del desarrollo producen colesterol. En el adulto,
sin embargo, los principales sitios de síntesis son el intestino, el hígado y la piel.
El tejido nervioso es en particular rico en colesterol.
Es un componente de la mielina, una lipoproteína compleja que sirve como envoltura
de los axones y se comporta como un aislante. En los humanos y otros omnívoros, y
en los carnívoros, existe un consumo continuo de colesterol a través de los alimentos,
aunque el esteral es absorbido de manera ineficiente. El colesterol de la dieta
complementa el producido por la biosíntesis. (García J. 2009)
El colesterol es un constituyente de algunos cálculos biliares y también existe en las
placas arteriales características de la arteriosclerosis. La primera es por su excreción
en la bilis y en grado mucho menor a través de las paredes del intestino delgado.
El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus numerosas funciones:
 ESTRUCTURAL: el colesterol es un componente muy importante de las
membranas plasmáticas de los animales.
 PRECURSOR DE LA VITAMINA D
 PRECURSOR DE LAS HORMONAS SEXUALES.
 PRECURSOR DE LAS HORMONAS CORTICOESTEROIDALES.
 PRECURSOR DE LAS SALES BILIARES.
 PRECURSOR DE LAS BALSAS DE LÍPIDOS.
(Ayala y Méndez. 2005)

II. OBJETIVOS

GENERAL
Determinar la presencia de colesterol y lípidos en muestras de cerebro de res por
medio de extracción con diferentes solventes.
ESPECIFICOS

Reconocer grasas en la muestra de cerebro de res por medio de la reacción de

saponificación.
Aplicar la reacción de Liebermann-Burchard y fraccionamiento de extractos para el
reconocimiento de colesterol en muestras de cerebro de res.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

 30 gr de cerebro de res  Hidróxido de sodio al 40%
 50 ml de Alcohol etílico  Ampolla de decantación
 35 ml de éter etílico  Baño de hielo
 25 ml de acetona  Vaso de precipitación
 Anhídrido acético  Baño María
 Ácido sulfúrico concentrado  Gasa
 Cloroformo

IV. PROCEDIMIENTO

DIAGRAMA DE FLUJO N°1 “EXTRACCION DE LIPIDOS”

Pesar 20 g de cerebro,
triturarlo en un mortero y
secarlo parcialmente en
un vaso de precipitado.
El filtrado se concentra en
manta calefactora hasta
Agregar 50 ml de alcohol
unos 30 ml y se agregan
etílico, llevar a ebullición y
luego 25 ml de éter, agitar
mantenerlo por 3 minutos,
y separar en ampolla de
luego filtrar por gasa.
decantación. Se obtienen
dos fracciones

Fracción A: concentrar en baño maría

Fracción superior A:
etérea, que tendrá
disueltos lecitina, cefalina,
grasas, colesterol y
restos de esfingomielina
y cerebrósidos.
a mitad de volumen inicial y agregar
25 ml de acetona: se observará un
precipitado que corresponde Tomar el tiempo en que
principalmente a fosfolípidos, se están produciendo
quedando en solución el colesterol y burbujas.
las grasas. Separar por centrifugación
obteniendo un sobrenadante C y un
precipitado D. .

Fracción A: concentrar en baño maría a mitad de

volumen inicial y agregar 25 ml de acetona: se
observará un precipitado que corresponde
principalmente a fosfolípidos, quedando en solución
el colesterol y las grasas. Separar por centrifugación
obteniendo un sobrenadante C y un precipitado D.

Elaborado por: Gavilanes J.; Romero C.

DIAGRAMA DE FLUJO N°2

“RECONOCIMIENTO DE GRASAS: SAPONIFICACIÓN”

Se separan las grasas por saponificación, para esto

Es una prueba para identificar ácidos grasos, por lo
tanto, general para los lípidos que los contengan.
Los jabones se define químicamente como, las
sales metálicas de los ácidos grasos superiores.
se coloca 1 ml de la muestra, 1 ml de etanol y 0,5
ml de hidróxido de sodio al 40%.
Calentar suavemente. Agregar unas gotas de ácido
sulfúrico. La presencia de enturbiamiento indica
liberación de ácidos grasos.

Elaborado por: Gavilanes J.; Romero C.

 DIAGRAMA DE FLUJO N°3
“RECONOCIMIENTO DE COLESTEROL: REACCIÓN DE LIEBERMANN –
BURCHARD”

El colesterol reacciona con anhídrido

acético y ácido sulfúrico concentrado.
Se produce una pérdida de agua y
una protonización del colesterol. Se Secar la muestra a baño María.
constituyen en medio anhidro Resuspender en 2 ml de cloroformo
polímeros de hidrocarburos no
saturados de intenso color verde
azulado

En un tubo de ensayo mezclar 1 ml de

anhídrido acético y 1 ml de cloroformo.
Enfriar a 0°C en baño de hielo. Agregar al
tubo los 2 ml de la muestra y colocar en
hielo. Agregar por las paredes 1 gota de
ácido sulfúrico cc. Enfriar y observar. Una
coloración verde azulada indica la
presencia de grupo esteroide, colesterol
en nuestro caso

Elaborado por: Gavilanes J.; Romero C.

V. DATOS OBTENIDOS

VI. DISCUSIÓN

En la práctica de laboratorio se llevó a cabo la determinación de lípidos complejos

contenidos en una muestra de cerebro de res, para lo cual se aplicaron dos
pruebas cualitativas, las mismas que ayudaron a comprobar la presencia de estas
moléculas en dicha muestra. Considerando que el colesterol es una de las
moléculas importantes en el ser humano ya que se encuentran formando parte del
sistema nervioso, vitaminas entre otros; se utilizó una muestra de cerebro de res
debido a que es rico en lípidos, los mismos que fueron sometidos a pruebas tanto
de saponificación y la prueba de Liebermann – Burchard.
La prueba de SAPONIFICACION se realizó para identificar grasas, dando un
resultado la formación de jabón (obtenido de la reacción entre ácidos grasos más
la adición de álcali), de esta manera se obtuvo un resultado positivo para esta
prueba. Por otro lado, la prueba de LIEBERMANN – BURCHARD se realizó para el
reconocimiento de colesterol en la muestra de cerebro de res, la misma que se
realizó en ausencia de agua; para esta prueba el resultado fue positivo ya que
presentó una coloración azul verdosa indicando la presencia de un grupo esteroide
en la muestra (colesterol).

VII. CUESTIONARIO
1. Describa un método de reconocimiento de fosfolípidos: lecitina y cefalina.

EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN

La reacción se basa en que el fosfato inorgánico, en medio ácido, con el molibdato da

fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el ácido ascórbico a azul de
molibdeno, color azul verdoso. El arsenito/citrato se combina con el exceso de
molibdato impidiendo su reacción posterior con fosfatos liberados de ésteres lábiles, lo
que se aprovecha cuando se quiere determinar fosfato inorgánico libre en presencia
de, por ejemplo, fosfolípidos.
PROCEDIMIENTO:
 Agregar 1ml de la muestra soluble de precipitado D
 Agregar 0,5 ml de Reactivo 1
 Mezclar y esperar 30 segundos.
 Agregar 0,5 ml de Reactivo 2
 Mezclar y esperar 30 segundos
Mezclar. Luego de 10 minutos la presencia de color azul demuestra la
presencia de fosfato unido a lecitina y cefalina en el tejido.
(Ayala y Méndez. 2005)

2. Enumere las principales funciones que cumple el colesterol.

El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus numerosas funciones:

 ESTRUCTURAL: el colesterol es un componente muy importante de las

membranas plasmáticas de los animales. Aunque el colesterol se encuentra en
pequeña cantidad en las membranas celulares, en la membrana citoplasmática
lo hallamos en una proporción molar 1:1 con relación a los fosfolípidos,
regulando sus propiedades físico-químicas, en particular la fluidez. Sin
embargo, el colesterol se encuentra en muy baja proporción o está
prácticamente ausente en las membranas subcelulares.
 PRECURSOR DE LA VITAMINA D: esencial en el metabolismo del calcio.
 PRECURSOR DE LAS HORMONAS SEXUALES: progesterona, estrógenos
testosterona.
 PRECURSOR DE LAS HORMONAS CORTICOESTEROIDALES: cortisol y
aldosterona.
 PRECURSOR DE LAS SALES BILIARES: esenciales en la absorción de
algunos nutrientes lipídicos y vía principal para la excreción de colesterol
corporal.
(Ayala y Méndez. 2005)

3. Señale las principales aplicaciones comerciales de los esteroles de origen

vegetal y animal.

El aceite de girasol puede utilizarse como combustible mezclado con gasóleo en

motores de inyección indirecta o de precámara, y en motores de bajas revoluciones
(barcos y generadores), sustituye totalmente en este último caso al fuelóleo.
Puede utilizarse también en quemadores en los sistemas de calefacción. En motores
de inyección directa podría utilizarse el aceite de girasol mezclado en bajas
proporciones con el gasóleo, con lo que se requiere la realización de ensayos de larga
duración para determinar la cantidad máxima admisible.
Los ésteres metílicos del aceite de girasol y colza (biodiesel) pueden utilizarse
directamente como combustibles en cualquier tipo de motor diésel. Los precios de los
mismos son competitivos con los del gasóleo si se establece una adecuada política de
subvenciones para combustibles de origen vegetal.
La utilización de biodiesel permitiría la explotación de tierras sin cultivar, tras la
reforma de la Polí-tica Agraria Comunitaria, para la producción de aceite de girasol no
alimentarlo. Paralelamente, se con tribuiría a la creación de empleo rural con el
consiguiente ahorro del PER.
La utilización de estos combustibles de origen vegetal contribuiría a disminuir la
acumulación de CO2 procedente de los combustibles fósiles. Dada la producción de
combustibles vegetales, su idónea aplicación se daría en las grandes ciudades, donde
el impacto del transporte automovilístico es más acusado. Se reducirían las misiones
de CO, HC, óxidos de azufre y partículas
 (García J. 2009)

4. Describa un método para reconocer cerebrósidos.

ANÁLISIS DE MONOGLYCOSYLCERAMIDES se puede hacer por de alta resolución

cromatografía en capa fina, cromatografía líquida de alta resolución, y espectrometría
de masas. HPLC de fase es ahora el método estándar para la separación de especies
moleculares, a menudo después de benzoilación, permitiendo a los lípidos que se
detectaron por espectrofotometría UV.
(García J. 2009)

VIII. CONCLUSIONES

IX. BIBLIOGRAFIA

BUTLER J. 2005. SOLUBILITY AND PH CALCULATIONS .Addison Wesley

Publishing Company. Washington-DC. Pp1052.
GARCIA J. 2009. QUÍMICA. LOS ELEMENTOS Y SUS REACCIONES.
2ª Edición. Editorial Reverté S.A. México. Pp. 206-209.
AYALA Y MENDEZ. 2005. BIOMOLÉCULAS. Primera Edición. Ed. EGB.
Bogotá- Colombia. Pp. 19-22
Nelson DL- Cox MM. Lehninger.2006. PRINCIPIOS DE BIOQUÍMICA. Cuarta
Edición. Ediciones Omega. Barcelona- España. Pp 63-65.