LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

1. MARCO TEÓRICO

La Ley de Beer – Lambert establece que hay una relación lineal entre la
absorción de luz a través de una sustancia y la concentración de la sustancia.

𝑨 = 𝜺𝒃𝒄

Donde:
𝐴 = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
𝜀 = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑚𝑜𝑙𝑎𝑟
𝑏 = 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑠𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎
𝑐 = 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑚𝑜𝑙/𝐿

La expresión anterior, es la forma más conveniente de la ley de Beer para fines

analíticos, pues la absorbancia es directamente proporcional a la concentración
del analito absorbente de interés, cuando la absortividad y el camino óptico se
mantienen constantes.

La gráfica siguiente muestra que la absorbancia vs. concentración resulta una

recta que pasa por el origen.

En el proceso de una determinación fotométrica, uno de los aspectos más

importantes es la selección de la longitud de onda apropiada para las
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mediciones de absorbancias. Esta selección se realiza sobre una curva

obtenida con la absorbancia de una solución del analito investigado, obtenida
a varías longitudes de onda, es decir una curva de la A (ordenadas) en función
de λ (abcisas). La gráfica así obtenida se designa como el espectro de
absorción del compuesto.

Si se desea obtener alta sensibilidad es preciso elegir una longitud de onda

para la cual el valor de la absorbancia sea alto.

La ley de Lambert-Beer es válida sólo para luz monocromática, un requisito que

se alcanza difícilmente en la práctica. Es así que se trabaja con filtros o
monocromadores para obtener una banda estrecha de longitud de onda, que
además deberá corresponder a una zona de poca pendiente en la curva
espectral, se tiene entonces una monocromacidad aceptable.

Una técnica experimental de amplia difusión en espectrofotometría visible es el

uso de una curva de calibrado. Se la obtiene midiendo la absorbancia de
distintas soluciones del analito de interés en concentraciones conocidas y
distintas, y graficando la absorbancia en función de estas con concentraciones.
A continuación se mide la absorbancia de la solución problema y la
concentración de la especie absorbente se lee en la curva de calibrado. Si el
sistema en estudio cumple con la ley de Beer la curva de calibrado será una
línea recta que pasa por el origen (Figura anterior). Sin embargo en la práctica,
la línea es recta sólo hasta un cierto límite de concentración, y después de este
aparecen desviaciones de la ley causadas por factores tanto químicos como
instrumentales. Si las desviaciones de la curva no son considerables, las
determinaciones cuantitativas son factibles.

De lo expuesto hasta aquí, surge entonces que los pasos sucesivos a seguir
toda vez que se desee emplear una técnica espectrofotométrica son los
siguientes:
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1. Trazado de la curva espectral (Espectro de absorción del compuesto).

 Preparar a partir de una solución patrón una solución del componente que
se desea determinar en una concentración estipulada y trazar la curva
espectral, realizando para ello una serie de medidas de absorbancia a
distintas longitudes de onda y [c] constante.

 Sobre la curva espectral, seleccionar la longitud de onda de trabajo que

corresponda a un máximo de la curva. Se logra así máxima sensibilidad y
reproducibilidad.

 Preparar una serie de soluciones patrones de concentraciones crecientes

y perfectamente conocidas en el componente a determinar.

2. Verificación de la ley de Lambert-Beer (Trazado de la curva de

Calibrado)

 Desarrollar el color con un reactivo adecuado, simultáneamente en los

patrones y en la muestra, si es necesario.

 Efectuar las lecturas de la absorbancia, A, de los patrones a la longitud

de onda seleccionada (λ = cte)

 Graficar absorbancia, A vs. concentración.

 Medir la A de la muestra y usando la gráfica determinar su concentración.

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2. MATERIALES, REACTIVOS y EQUIPOS

MATERIALES

 Pipetas
 Matraz de vidrio
 Gradilla
 Vaso de precipitado

REACTIVOS
 Solución de manganeso al 66 mg/l
 Diluciones de manganeso de 1/5, 2/5, 3/5 y 4/5 de la concentración del
patrón.

EQUIPOS

 Espectrómetro Perkin Elmer Lambda 3B doble haz con celdas de

portamuestra de 1 cm.
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3. DESARROLLO EXPERIMENTAL

1. Preparar una solución patrón de manganeso de 66 mg/l a partir de una

sal de KMnO4.
2. Llevar el peso de la muestra pesada a un matraz aforado de 250 ml y lo
enrasamos.

3. Luego se diluyen las soluciones de 0.2, 0.4, 0.6 y 0.8 en un volumen de

10 ml.
4. Se llevan las soluciones al espectrofotómetro para tomar lectura de la
absorbancia de cada uno de ellas.
5. Las lecturas para la absorbancia se trabajarán con la longitud de onda
experimental obtenida en el anterior laboratorio y también con la longitud
de onda optima dada por la teoría.
6. Luego se construirá la curva de calibración A vs C después de haber
calculado las concentraciones de las soluciones.
7. Por último, se medirá la absorbancia de 3 soluciones CX, CY y CZ y con
ayuda de la curva de calibración realizada se calculará su concentración.
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4. RESULTADOS

 PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN PATRÓN DE Mn+2

Datos

Concentración: 66 mg/L

Peso molecular: 158,04 g/mol

Volumen pedido: 250ml

Pasamos a determinar el peso de la solución patrón:

66𝑥10−3 𝑔 𝑀𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 1 𝑚𝑜𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4 158.04 𝑔 𝐾𝑀𝑛𝑂4

𝑥 𝑥 𝑥 𝑥0.25𝐿 𝑠𝑜𝑙
1 𝐿 𝑠𝑜𝑙 54.93 𝑔 𝑀𝑛 1𝑚𝑜𝑙 𝑀𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4

𝑾𝒔𝒐𝒍.𝒑𝒂𝒕𝒓ó𝒏 = 𝟎. 𝟎𝟒𝟕𝟒 𝒈 𝑲𝑴𝒏𝑶𝟒

Determinando la concentración molar:

0.0474 𝑔 𝐾𝑀𝑛𝑂4 1 𝑚𝑜𝑙

𝐶𝑠𝑜𝑙.𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛 = 𝑥
0.25𝐿 𝑠𝑜𝑙 158.04 𝑔𝐾𝑀𝑛𝑂4

𝑪𝒔𝒐𝒍.𝒑𝒂𝒕𝒓ó𝒏 = 𝟏. 𝟐𝒙𝟏𝟎−𝟑 𝑴

 Calculo del volumen a extraer de la solución patrón para las diluciones

1. Para la solución 1/5 de la concentración patrón en 10 ml

𝐶1 𝑥𝑉1 = 𝐶2 𝑥𝑉2

𝑚𝑔 1 𝑚𝑔
66 𝑥𝑉1 = ( 𝑥66 ) 𝑥10𝑚𝑙
𝑙 5 𝑙

𝑽𝟏 = 𝟐𝒎𝒍
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2. Para la solución 2/5 de la concentración patrón en 10 ml

𝐶1 𝑥𝑉1 = 𝐶2 𝑥𝑉2

𝑚𝑔 2 𝑚𝑔
66 𝑥𝑉1 = ( 𝑥66 ) 𝑥10𝑚𝑙
𝑙 5 𝑙

𝑽𝟏 = 𝟒𝒎𝒍

3. Para la solución 3/5 de la concentración patrón en 10 ml

𝐶1 𝑥𝑉1 = 𝐶2 𝑥𝑉2

𝑚𝑔 3 𝑚𝑔
66 𝑥𝑉1 = (5 𝑥66 ) 𝑥10𝑚𝑙
𝑙 𝑙

𝑽𝟏 = 𝟔𝒎𝒍

4. Para la solución 4/5 de la concentración patrón en 10 ml

𝐶1 𝑥𝑉1 = 𝐶2 𝑥𝑉2

𝑚𝑔 4 𝑚𝑔
66 𝑥𝑉1 = ( 𝑥66 ) 𝑥10𝑚𝑙
𝑙 5 𝑙

𝑽𝟏 = 𝟖𝒎𝒍

Antes de construir la gráfica A vs C, expresamos las concentraciones de estas

4 soluciones en mol/l

1. Para la primera concentración de 1/5

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑀𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑛
𝐶1 = 13.2 𝑥 = 2.403𝑥10−4 𝑀
𝑙 54.93 𝑔 𝑑𝑒 𝑀𝑛
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2. Para la concentración de 2/5

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑀𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑛
𝐶2 = 26.4 𝑥 = 4.806𝑥10−4 𝑀
𝑙 54.93 𝑔 𝑑𝑒 𝑀𝑛

3. Para la concentración de 3/5

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑀𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑛
𝐶3 = 39.6 𝑥 = 7.209𝑥10−4 𝑀
𝑙 54.93 𝑔 𝑑𝑒 𝑀𝑛

4. Para la concentración de 4/5

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑀𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑛
𝐶4 = 52.8 𝑥 = 9.612𝑥10−4 𝑀
𝑙 54.93 𝑔 𝑑𝑒 𝑀𝑛

Ahora si procedemos a tomar lecturas en el espectrofotómetro con un lambda

practico determinado experimentalmente y el lambda optimo dada por la
teoría

𝝀 𝑷𝑹Á𝑪𝑻𝑰𝑪𝑶 𝒅𝒆 𝑴𝒏+𝟐 = 𝟓𝟐𝟎𝒏𝒎

Concentración (mol/l) Absorbancia (A)

𝟐. 𝟒𝟎𝟑𝒙𝟏𝟎−𝟒 𝟎. 𝟓𝟏𝟒

𝟒. 𝟖𝟎𝟔𝒙𝟏𝟎−𝟒 𝟎. 𝟗𝟔𝟕

𝟕. 𝟐𝟎𝟗𝒙𝟏𝟎−𝟒 𝟏. 𝟑𝟔𝟖

𝟗. 𝟔𝟏𝟐𝒙𝟏𝟎−𝟒 𝟐. 𝟎𝟎𝟎

Elaboramos la gráfica respectiva la cual se encuentra en el anexo siendo la

GRAFICA N°1 y determinamos 𝜺 donde este mismo valor resulta ser la
pendiente de la recta obtenida, lo cual se demuestra de la siguiente manera:

De la Ley de Beer-Lambert

𝑨 = 𝜺𝒃𝒄

Como b=1cm
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𝑨
𝜺=
𝑪

Ahora de la GRÁFICA N°1, obtenemos la ecuación de la recta la cual es la

siguiente:
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏

𝑦 = 2022𝑥 − 0.0025
Entonces el valor de 𝜺 seria:
𝒍
𝜺 = 𝟐𝟎𝟐𝟐( )
𝒎𝒐𝒍𝒙𝒄𝒎

Ahora para nuestras muestras problemas en las que tendremos que determinar
su concentración, se hicieron las siguientes mediciones de la absorbancia de
cada una de ellas para una longitud de onda practica de 520 nm.

MUESTRA ABSORBANCIA
CX 0.778
CY 1.330
CZ 1.832

Ahora procederemos a determinar al cálculo de la concentración de estas

muestras de la siguiente forma.
De la Ley de Beer-Lambert
𝑨
𝑪=
𝜺𝒙𝒃
Donde b=1cm
 Para CX
0.778
𝐶𝑋 =
𝑙
2022 ( ) 𝑥(1𝑐𝑚)
𝑚𝑜𝑙𝑥𝑐𝑚

𝐶𝑋 = 3.845𝑥10−4 𝑀
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 Para CY
1.330
𝐶𝑌 =
𝑙
2022 ( ) 𝑥(1𝑐𝑚)
𝑚𝑜𝑙𝑥𝑐𝑚

𝐶𝑌 = 6.578𝑥10−4 𝑀

 Para CZ
1.832
𝐶𝑍 =
𝑙
2022 ( ) 𝑥(1𝑐𝑚)
𝑚𝑜𝑙𝑥𝑐𝑚

𝐶𝑍 = 9.06𝑂𝑥10−4 𝑀

𝝀 𝑶𝑷𝑻𝑰𝑴𝑶 𝒅𝒆 𝑴𝒏+𝟐 = 𝟓𝟐𝟓𝒏𝒎

Concentración (mol/l) Absorbancia (A)

𝟐. 𝟒𝟎𝟑𝒙𝟏𝟎−𝟒 𝟎. 𝟓𝟎𝟗

𝟒. 𝟖𝟎𝟔𝒙𝟏𝟎−𝟒 𝟎. 𝟗𝟓𝟖

𝟕. 𝟐𝟎𝟗𝒙𝟏𝟎−𝟒 𝟏. 𝟑𝟓𝟖

𝟗. 𝟔𝟏𝟐𝒙𝟏𝟎−𝟒 𝟏. 𝟗𝟖𝟎

Elaboramos la gráfica respectiva la cual se encuentra en el anexo siendo la

GRAFICA N°2 y determinamos 𝜺 donde este mismo valor resulta ser la
pendiente de la recta obtenida, lo cual se demuestra de la siguiente manera:

De la Ley de Beer-Lambert

𝑨 = 𝜺𝒃𝒄

Como b=1cm
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𝑨
𝜺=
𝑪

Ahora de la GRÁFICA N°2, obtenemos la ecuación de la recta la cual es la

siguiente:
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏

𝑦 = 2022.9𝑥 − 0.002
Entonces el valor de 𝜺 seria:
𝒍
𝜺 = 𝟐𝟎𝟐𝟐. 𝟗( )
𝒎𝒐𝒍𝒙𝒄𝒎

Ahora para nuestras muestras problemas en las que tendremos que determinar
su concentración, se hicieron las siguientes mediciones de la absorbancia de
cada una de ellas para la longitud de onda óptima de 525 nm.

MUESTRA ABSORBANCIA

CX 0.771
CY 1.309
CZ 1.813

Ahora procederemos a determinar al cálculo de la concentración de estas

muestras de la siguiente forma.
De la Ley de Beer-Lambert
𝑨
𝑪=
𝜺𝒙𝒃
Donde b=1cm
 Para CX
0.771
𝐶𝑋 =
𝑙
2022.9 ( ) 𝑥(1𝑐𝑚)
𝑚𝑜𝑙𝑥𝑐𝑚

𝐶𝑋 = 3.811𝑥10−4 𝑀
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 Para CY
1.309
𝐶𝑌 =
𝑙
2022.9 ( ) 𝑥(1𝑐𝑚)
𝑚𝑜𝑙𝑥𝑐𝑚

𝐶𝑌 = 6.471𝑥10−4 𝑀

 Para CZ
1.813
𝐶𝑍 =
𝑙
2022.9 ( ) 𝑥(1𝑐𝑚)
𝑚𝑜𝑙𝑥𝑐𝑚

𝐶𝑍 = 8.962𝑥10−4 𝑀
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5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

CONCLUSIONES

 Se determinó las concentraciones de las diferentes muestras problema, a

partir de la absortividad molar hallada con la curva patrón.

 De las concentraciones halladas podemos concluir que a mayor

concentración del analito, mayor será la absorbancia.

RECOMENDACIONES

 Calibrar previamente el equipo antes de utilizarlo.

 Limpiar correctamente la celda de vidrio antes de colocarlo dentro del

espectrofotómetro, caso contrario no se tendrá una medición correcta.
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6. ANEXOS

GRAFICA N°1 A vs C PARA UNA LONGITUD DE ONDA DE 520 nm

A vs C
2.5

2 y = 2022x - 0.0025
R² = 0.9899
ABSORBANCIA

1.5

Absorbancia
1
Linear (Absorbancia)

0.5

0
0 0.0002 0.0004 0.0006 0.0008 0.001 0.0012
CONCENTRACION (mol/l)

GRAFICA N°2 A vs C PARA UNA LONGITUD DE ONDA DE 525 nm

A vs C
2.5

2 y = 2002.9x - 0.002
R² = 0.9905
ABSORBANCIA

1.5

Absorbancia
1
Linear (Absorbancia)

0.5

0
0 0.0002 0.0004 0.0006 0.0008 0.001 0.0012
CONCENTRACION(mol/l)
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7. CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles serán los gramos necesarios para preparar la solución patrón

de manganeso?

66 ∗ 10−3 𝑔 𝑀𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 1 𝑚𝑜𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4 158.04 𝑔 𝐾𝑀𝑛𝑂4

𝑊𝑠𝑜𝑙.𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛 = 𝑥 𝑥 𝑥 𝑥0.25𝐿 𝑠𝑜𝑙
1 𝐿 𝑠𝑜𝑙 54.93 𝑔 𝑀𝑛 1𝑚𝑜𝑙 𝑀𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4

𝑊𝑠𝑜𝑙.𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛 = 0.0474𝑔 𝑑𝑒 𝐾𝑀𝑛𝑂4

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8. BIBLIOGRAFÍA

 Meloan, Clifton E. Problemas y Experimentos en Análisis Instrumental.

Editorial Reverté. Segunda edición. Mexico.1973

 Pino Pérez. Análisis de elementos. Traza por espectrofotometría de

absorción molecular UV-Visible. Publicaciones del Monte Piedad y Caja
de Ahorros de Córdoba y Universidad de Córdoba. Primera edición 1983