UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES

INSTITUTO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE PRODUCTOS NATURALES

PRÁCTICA 3: AISLAMIENTO DE MIRISTICINA Y TRIMIRISTINA

POR EXTRACCIÓN CON REFLUJO CONVENCIONAL EN NUEZ MOSCADA

AUTORES:
ANA MARÍA MUÑOZ JARAMILLO
ANDREA CAROLINA RODRÍGUEZ SALAZAR
JACKSON MAURICIO ESPINOSA SILVA

PROFESOR:
ELVER LUIS OTERO TEJADA

MEDELLÍN, ANTIOQUIA 2019

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1. Metodologı́a.

Figura 1: Procedimiento extracción de piperina por soxhlet.

2. Evidencias y observaciones.
El reflujo se realizó aproximadamente dos horas y media utilizando el montaje de la figura 2a.
Después de este tiempo se eliminó el agua con cloruro de calcio y se rotoevaporó el solvente, luego
se adicionó etanol para precipitar la trimiristina, se filtró al vacı́o y se obtuvo un sólido blanco (ver
figura 2b) que peso 0,67 gramos, al sólido obtenido se le tomó el punto de fusión, el cual fue 49◦
centı́grados. De nuevo se rotoevaporó el solvente del filtrado y se obtuvo un sólido naranja (ver
figura 2c) que se disolvió en una mezcla de 10 mL de hexano y 1 mL de acetato de etilo.

(a) Montaje reflujo (b) Trimiristina (c) Extracto

Figura 2: Montaje reflujo y sólidos obtenidos

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A la mezcla anterior se le realizó cromatografı́a en capa fina para escoger la fase móvil a utilizar
en placa preparativa, primero se ensayó con un sistema de elución hexano:acetato de etilo 5:5
(ver figura 3a), se observó que el analito (una mancha) ascendió casi con el frente del solvente,
seguidamente se probó una mezcla hexano:acetato de etilo 6:4 y se observó un mayor número de
compuestos en la placa, esto se debe a que con esta composición se logró una separación diferencial
de los analitos (ver figura 3b), es decir, en la anterior placa hubo coelución, de igual manera, el
ultimo analito ascendió con el frente de solvente, por ello se ensayó con el sistema hexano:acetato
de etilo 8:2 y se observó una buena separación y ubicación (respecto al frente del solvente) de los
analitos (ver figura 3c), finalmente se utilizó solo hexano como eluyente (ver figura 4b) y se observó
que los analitos no ascendieron por la placa, lo anterior se debe a que esa pequeña fracción de
acetato de etilo aumenta la polaridad de la fase móvil y hace que los compuestos eluyan. Cada
placa se reveló en el UV utilizando longitud de onda corta (λ = 254 nm) y longitud de onda larga
(λ = 365 nm), además se revelaron con KMnO4 (ver figura 4e) y se observó coloración naranja, lo
cual se toma como prueba positiva para la presencia de dobles enlaces.

(a) Hex:Ace 5:5 (b) Hex:Ace 6:4 (c) Hex:Ace 8:2 (d) Hex:Ace 10:0 (e) KMnO4
Figura 3: TLC en diferentes fases moviles

Con base en los anteriores ensayos, se escogió como fase móvil para la cromatografı́a preparativa una
mezcla hexano:acetato de etilo 95:5, ya que debe disminuirse polaridad porque la placa preparativa
es menos compacta en comparación con las plaquitas de TLC, luego del corrido, la placa preparativa
se reveló en UV en longitud corta y larga (ver figura 4a y 4b), se observaron varias bandas, se
escogió la más oscura y que presentó absorción en las dos longitudes de onda (recomendación del
profesor). Esta porción se raspo, se eluyo con acetato de etilo y se rotoevaporó completamente para
redisolverse en 1 mL de acetato de etilo, y se realizó TLC utilizando como fase móvil una mezcla
hexano:acetato de etilo 9:1, se reveló en UV utilizando también vapores de I2 y KMnO4 (ver figura
4c y 4d), solo se presentó coloración naranja en la placa con KMnO4 lo que indica la presencia de
dobles enlaces, no hubo coloración en la placa con yodo posiblemente debido a que el analito se
encontraba muy diluido.

(a) Preparativa λ = 254 nm (b) Preparativa λ = 365 nm (c) TLC λ = 254 nm (d) TLC KMnO4 y I2
Figura 4: Preparativa y TLC extracto final

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3. Análisis.
En la extracción de miristicina y trimiristina por reflujo convencional se usa el acetato de etilo, ya
que la polaridad media de este solvente lo hace ideal para la extracción de los analitos de interés,
la miristicina está presente entre un 1 a 3 % aproximadamente y la trimiristina en un 5 % en la
semilla de nuez moscada, el contenido puede variar dependiendo de la especie. [1][2][3]

De los 12,35 gramos de nuez moscada molida se obtuvieron 0,67 gramos de trimiristina que corres-
ponde al 5,43 % m/m aproximadamente, el punto de fusión del sólido fue 49◦ C. Los datos obtenidos
en la práctica tienen correspondencia con los datos reportados, ya que el punto de fusión reportado
se encuentra en un rango de 56◦ C a 58 ◦ C y el porcentaje de trimiristina es 5 %. [3]

La redisolución en etanol del sólido naranja obtenido al rotavaporar se realizó para solubilizar la
miristicina y otros componentes solubles que quedaron después de cristalizar la trimiristina. En
la TLC la mejor mezcla de solventes fue hexano:acetato 8:2, pero para realizar la preparativa se
usó una mezcla 95:5 ya que su fase estacionaria es menos compacta y se debe cambiar la fortaleza
con la que se eluye la muestra. La cromatografı́a preparativa arroja una serie de bandas, en donde
cada una corresponde a un compuesto diferente, se seleccionó una de estas, oscura, ya que esto
representa que está en cantidad mayoritaria y la cual absorbió a 254 nm y 365 nm. Al compa-
rar los máximos de absorción en el UV reportados para la miristicina se tiene que son 210, 232
y 280 nm por lo cual queda en duda que el compuesto separado sea miristicina ya que la banda
escogida absorbió a 365 nm. Observando la estructura de la miristicina (ver figura 5a ) se tiene
que presenta un grupo cromóforo debido al anillo aromático con transiciones π − π ∗ y un hete-
roátomo (OCH3 ) que presenta transiciones n − π ∗ , ambas absorben en longitudes de onda corta.
El compuesto no tiene sistemas altamente conjugados que absorben en longitudes de onda larga. [4]

En la TLC para la banda seleccionada se obtuvo prueba positiva cuando se reveló con KMnO4 , lo
cual indica la presencia de dobles enlaces en el compuesto, pero cuando se reveló con vapores de I2
no se obtuvo coloración, lo anterior se le atribuye a que el compuesto se encontraba muy diluido.
De acuerdo con la absorción mostrada en UV de la banda seleccionada y la prueba positiva para
dobles enlaces no se puede asegurar que el compuesto extraı́do sea la miristicina, ya que la prueba
de KMnO4 es muy general y el compuesto separado presento absorción a longitudes de onda larga,
para identificar el compuesto separado es necesario realizar análisis por RMN o MS.

(a) Miristicina (b) Trimiristina

Figura 5: Miristicina y Trimiristina

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4. Conclusiones.
Se logró aislar e identificar la trimiristina con extracción por reflujo convencional de nuez moscada
molida, la identificación se realizó por punto de fusión. La miristicina no se logró identificar ya
que el analito escogido presento absorción a longitud de onda larga; para elucidar la estructura del
metabolito separado se debe realizar técnicas como resonancia magnética nuclear o masas.

Mediante cromatografı́a en capa fina se determinó la mezcla de elución a utilizar en placa prepara-
tiva, mediante la preparativa se logró separar diferentes compuestos que se observan como bandas
separadas diferencialmente en la placa. A la banda escogida en la practica se realizó prueba para
dobles enlaces, la cual dio positiva, pero no se pudo identificar como miristicina. La cromatografı́a
preparativa es de gran utilidad para separar separar analitos de extractos y posteriormente se puri-
fican por cromatografı́a en columna, lo anterior se puede aplicar a las diferentes bandas observadas
en el extracto, en la practica se ilustró el uso con una de ellas.

Referencias
[1] Loizzo, M. R., Sicari, V., Tenuta, M. C., Leporini, M. R., Falco, T., Pellicanò, T.
M., & Tundis, R. (2016). Phytochemicals content, antioxidant and hypoglycaemic activities
of commercial nutmeg mace (Myristica fragransL.) and pimento (Pimenta dioica(L.) Merr.)
International Journal of Food Science & Technology, vol. 51, págs. 2057–2063.

[2] Shulgin, T., Sargent, T. & Naranjo, C. (1967). The Chemistry and Psychopharmaco-
logy of Nutmeg and of Several Related Phenylisopropylamines. Psychopharmacology Bulletin,
tercera edición, pág. 292.

[3] De Mattos, M. C. S., & Nicodem, D. E. (2002). Soap from Nutmeg: An Integrated
Introductory Organic Chemistry Laboratory Experiment. Journal of Chemical Education, vol.
79, págs. 94-95.

[4] Dighe, V., & Charegaonkar, G. (2009). HPTLC analysis of Myristicin and Safrole in seed
powder ofMyristica fragransHoutt. Journal of Planar Chromatography – Modern TLC, vol. 22,
págs. 445-448.