“Año de lucha contra la corrupción e impunidad”

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE INGENIERIA
AGROINDUSTRIAL

PRÁCTICA N° 5
ESPECTROFOTOMETRÍA

ASIGNATURA:

Análisis Instrumental de Productos Agroindustriales

DOCENTE:

Ing. Raúl Toro Rodríguez

CICLO: VI

2019

I. INTRODUCCIÓN
 La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en
la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su
concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud
de onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida
por el medio y otra transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de
luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la
intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de
absorción a medir, la muestra puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las
regiones visibles y ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es
generalmente disuelta para formar una solución. Cada sustancia tiene su propio
espectro de absorción, el cual es una curva que muestra la cantidad de energía
radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de onda del
espectro electromagnético, es decir, a una determinada longitud de onda de la
energía radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de radiación que es distinta
a la que absorbe otro compuesto (Fig. 1)

II. OBJETIVOS

 Determinar la longitud de onda de máxima absorción, los niveles de

concentración adecuados para el análisis cuantitativo por espectrometría
y el coeficiente de extinción molar.

III. FUNDAMENTO
ESPECTROFOTÓMETRO: Un espectrofotómetro es un instrumento usado en
el análisis químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la
relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces
de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una
muestra.

Hay varios tipos de espectrofotómetros, que son de absorción atómica, de

absorción molecular (que comúnmente se conoce como espectrofotómetro UV-
VIS), y no debe ser confundido con un espectrómetro de masa.

PARTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO. El espectrofotómetro, en general,

consta de dos dispositivos; un espectrómetro y un fotómetro. Un espectrómetro es
un dispositivo que produce, dispersa y mide la luz. Un fotómetro tiene un detector
fotoeléctrico que mide la intensidad de la luz.

Espectrómetro: Produce un rango deseado de longitud de onda de luz. Primero

un colimador (lente) transmite un haz recto de luz (fotones) que pasa a través de
un monocromador (prisma) para dividirlo en varias componentes de longitudes de
onda (espectro). Entonces un selector de longitud de onda (ranura) transmite sólo
las longitudes de onda deseadas.

Fotómetro: Después de que el rango deseado de longitud de onda de luz pasa a

través de la solución muestra en la cubeta, el fotómetro detecta la cantidad de
fotones que se absorbe y luego envía una señal a un galvanómetro o una pantalla
digital.

COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO

Fuente de luz

La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes
condiciones: estabilidad, direccionalidad, distribución de energía espectral
continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio (también
llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón, lámpara de deuterio y
lámpara LED que se utilizan en los laboratorios.

Monocromador
El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o
se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.

Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de

dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es
un lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de
onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la
longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija
de salida.

Compartimiento de Muestra

Es donde tiene lugar la interacción con la materia (debe producirse donde no haya
absorción ni dispersión de las longitudes de onda). Es importante destacar, que
durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su máxima expresión,
con base en sus leyes de absorción, en lo que concierne al paso de la molécula
de fundamental-excitado.

Detector

El detector es el encargado de captar la radiación y, a su vez, dejarla en evidencia

para su estudio posterior. Existen dos tipos:

a) los que responden a fotones;

b) los que responden al calor.

Fotodetectores

En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para

percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo
el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes
móviles del equipo.

Celdas

Son los recipientes donde se depositan las muestras líquidas a analizar. El material
del cual están hechas varía de acuerdo a la región que se esté trabajando; son
de vidrio o plástico si se trabaja en la región visible, de cuarzo si se trabaja en la
ultravioleta y de NaCl si se trabaja la región de infrarrojo. Se caracterizan por
 tener dos paredes correspondiente a los lados ópticos por donde cruza el haz
de luz.

En el laboratorio de la universidad contamos con un espectrofotómetro de

absorción SQ 2800 UV-VIS.

SQ-2800 es el diseño de uso general más económico en la línea de SpectroQuest.

Se trata de un modelo autónomo con un ancho de banda fijo 4 nm y tiene todas
las características que ofrece la línea SpectroQuest para una unidad independiente.
Se proporciona un excelente rendimiento para mediciones en el rango de 190 nm
a 1100 nm. Cuenta con una gran pantalla LCD de ángulo con ajuste de contraste
para una visualización cómoda. El compartimento de la muestra grande se adapta
a una amplia gama de soportes celulares y accesorios, incluyendo sorber
peristáltica y sistema Peltier. Opcional software de descarga de PC y software de
aplicación para PC Windows ® hacen de este instrumento muy versátil.

Fig. 4. Espectrofotómetro de absorción SQ 2800 UV-VIS.

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

 Probeta Balanza Analítica Pizeta con agua

Espectrofotómetro de
absorción SQ 2800

V. RESULTADOS

A) DETERMINACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DE MÁXIMA ABSORCIÓN

a) Resultados obtenidos para la primera dilución

Según los resultados obtenidos del barrido realizado, la absorbancia más alta se
obtuvo en una longitud de onda de 414.

Longitud de Onda (nm) Absorbancia

414 0.4203
 Sample-1
3

Absorbance(Abs)
1

-1
400 500 600 700
Wavelength(nm)
Gráfica 01. Absorbancia vs longitud de onda para la primera dilución

ABSORVANCIA VS LONGITUD DE ONDA

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800
-0.1

Gráfica 02. Absorbancia vs longitud de onda para la primera dilución

b) Resultados obtenidos para la segunda dilución

Según los resultados obtenidos del barrido realizado, la absorbancia más alta se
obtuvo en una longitud de onda de 414.

Longitud de Onda (nm) Absorbancia

414 0.4488
 Sample-1
3

Absorbance(Abs)
1

-1
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100
Wavelength(nm)

Gráfica 03. Absorbancia vs longitud de onda para la segunda dilución

ABASORBANCIA VS LONGITUD DE ONDA

0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 100 200 300 400 500 600 700 800

Gráfica 04. Absorbancia vs longitud de onda para la segunda dilución

c) Resultados obtenidos para la tercera dilución

Según los resultados obtenidos del barrido realizado, la absorbancia más alta se
obtuvo en una longitud de onda de 412.

Longitud de Onda (nm) Absorbancia

412 0.5132
 Sample-1
3

Absorbance(Abs)
1

-1
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100
Wavelength(nm)

Gráfica 05. Absorbancia vs longitud de onda para la tercera dilución

ABASORBANCIA VS LONGITUD DE ONDA

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800

Gráfica 06. Absorbancia vs longitud de onda para la tercera dilución

d) Resultados obtenidos para la cuarta dilución

Según los resultados obtenidos del barrido realizado, la absorbancia más alta se
obtuvo en una longitud de onda de 412.

Longitud de Onda (nm) Absorbancia

412 0.531
 Sample-1
3

Absorbance(Abs)
1

-1
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100
Wavelength(nm)
Gráfica 07. Absorbancia vs longitud de onda para la cuarta dilución

ABSORBANCIA VS LONGITUD DE ONDA

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800

Gráfica 08. Absorbancia vs longitud de onda para la cuarta dilución

 Gráfico de las absorbancias más altas obtenidas

Concentraciones Longitud de onda Absorbancia

1 414 0.4203
1.5 414 0.4488
2 412 0.5132
3 412 0.531

CONCENTRACIÓN VS ABSORBANCIA
0.6

0.5

0.4

0.3
y = 0.0574x + 0.3708
R² = 0.8744
0.2

0.1

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

Gráfica 09. Concentración vs Absorbancia

B) ABSORCIÓN DEL ÁCIDO ASCORBICO

 Determinación del peso (gr) del ácido ascórbico

Concentración (0.005 M) 1M= 176.13 ml

𝒎
𝑴=
(𝒑𝑴)(𝑽)

𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔
𝑴∗𝑽=
𝒑𝒆𝒔𝒐
 100𝑚𝑙 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠
0.005 ∗ =
1000 176.13

𝒈𝒓 = 0.088

 Datos obtenidos

CONCENTRACIÓN L1 L2 L1 – L2
(ABSORVANCIA)
0.088 0.0683 0.0018 0.0665

 Coeficiente de extinción molar

𝑨
𝜺=
𝒄𝒅

0.0665
𝜺=
(1) ∗ (0.005)

𝜺 = 13.3

VI. DISCUSIÓN
Según (Wentworth, 1966). En óptica la ley de Beer Lambert, también conocida
como ley de Beer oley de Beer Lambert Bouguer es una relación empírica que
relaciona la absorción de luz con las propiedades del material atravesado

Según (Ricci, Ditzler y Néstor, 1994.) La absorbancia es importante porque es

directamente proporcional a la concentración (c), de la especie que absorbe la luz
en la muestra.

Según (Pérez Bendito D. y Pino Pérez F. 1983) La espectrofotometría de

absorción ultravioleta se basa en la absorción de la radiación ultravioleta visible
por el analito, como consecuencia de la cual se origina un estado activado que
 posteriormente elimina su exceso de energía en forma de calor, pero como el calor
liberado es cuantitativamente pequeño, el trastorno que se genera por este
fenómeno es mínimo, garantizando resultados confiables.

VII. CONCLUSIÓN
Según esto la longitud y la absorbancia son proporcionales hasta que se obtenga
el punto máximo y de allí empieza a descender, Según su concentración varia la
absorbancia del compuesto. Se determinó la longitud de onda óptima a las cuatro
soluciones teniendo como resultados las siguientes: para la primera dilución 414
nm, la segunda longitud de onda de 414 nm, la tercera dilución una longitud de
onda de 412 nm y la cuarta dilución tiene como longitud onda 412 nm.
Concluyendo que los datos obtenidos experimentalmente, están dentro de los
datos teóricos.

VIII. BIBLIOGRÍA

Douglas A. Skoog and Donald M. West. Análisis Instrumental. Nueva Editorial

Interamericana 1975.
Rubinson K. y Rubinson J. Análisis instrumental. Edit. Prentice. Hall. Madrid. España
2004.
Jorge D. Módulo de Análisis Instrumental de Productos Agroindustriales. Universidad
Nacional del Santa 2011.