El Ciclo de Krebs

Hans Adolf Krebs

El ciclo de Krebs, o ciclo del ácido cítrico o ciclo de los ácidos tricarboxílicos, toma su nombre de su descubridor, Hans
Adolf Krebs, un bioquímico alemán premiado con el Nobel en el 1953.
Esta ruta metabólica es la tercera etapa de la respiración celular, el proceso de producción de energía en las células. Forma
parte de la respiración aerobia, es decir, se realiza en presencia de oxígeno y se desarrolla entre los procesos de glicolisis
y cadena respiratoria. Su fin es la obtención de NADH, una molécula con poder reductor, que se utiliza para la producción
de ATP mediante la cadena respiratoria.

La Transformación del Piruvato en Acetil-CoA mediante Descarboxilación Oxidativa.

La descarboxilación oxidativa del piruvato es un paso anterior al propio ciclo de Krebs. Durante la glicolisis en el citoplasma
se produce el piruvato, que pasa por una etapa de transición para convertirse en acetil-CoA para que pueda entrar en el
ciclo de Krebs.
El piruvato pasa del citoplasma en las mitocondrias donde el complejo enzimático piruvato-deshidrogenasa lo convierte en
acetil-CoA. Esto ocurre mediante la eliminación de una molécula de CO2 (descarboxilación) y la unión del resto acílico
obtenido a la coenzima A por oxidación.

El esquema siguiente visualiza este proceso:

Descarboxilación oxidativa del piruvato.

La transformación del piruvato en acetil-CoA es de gran importancia ya que une la glicolisis y el ciclo de Krebs. Hay que
mencionar que los acetil-CoA que participan en él, no proceden solamente de la glicólisis, sino también de la oxidación de
los ácidos grasos y del catabolismo de los aminoácidos. Resulta que el ciclo del ácido cítrico une todas las rutas catabólicas
de las sustancias que aportan energía para nuestro cuerpo.

El Ciclo de Krebs: Resumen.

En general, el ciclo consiste en la formación de citrato, una molécula de 6 átomos de carbono, mediante la reacción del
acetil-CoA (2 carbonos) con oxalacetato (4 carbonos). A continuación, el citrato sufre algunas transformaciones químicas
hasta llegar a formar otra vez oxalacetato (4 carbonos). La reducción del número de átomos de carbono a lo largo del ciclo
ocurre porque el compuesto pierde dos grupos carboxílicos como CO2, respectivamente en el paso 4 y 5. Todos los pasos
son catalizados por enzimas.

Entradas y Salidas.

En total, en el ciclo de Krebs entran 1 molécula de acetil-CoA y 3 moléculas de H2O. Después de su transcurso obtenemos:

 1 molécula de Coenzima A
 3 NADH/H+ a partir NAD+
 1 molécula de GTP (guanosina trofosfato) a partir de GDP + Pi
 1 molécula de Coenzima Q reducida (ubiquinol)

Los NADH/H+ y el ubiquinol tienen un papel importante en la cadena respiratoria para la producción de ATP, producto final
de la respiración celular.

Las reacciones en concreto.

En el esquema de abajo, por medio de los colores es fácil observar cuántos átomos de carbono contiene el producto de
cada paso. Las moléculas de color naranja contienen 6 carbonos, la verde (alfa-cetoglutarato) 5 carbonos y las moléculas
azules 4. El acetil-CoA (rosa) tiene 2 átomos de carbono.
 El Ciclo de Krebs.

Las enzimas que juegan un papel en el ciclo de Krebs y las reacciones que catalizan son las siguientes:
1 - La citrato sintetasa facilita la unión del oxalacetato con el resto acílico que lleva la coenzima A. Para ello se necesita
adicionalmente un H2O y al final la coenzima A queda libre.

2 y 3 – La aconitasa cataliza la producción de cis-aconitato quitándo un H2O del citrato. Después incorpora un H2O al cis-
aconitato para formar isocitrato.

4 – La isocitrato deshidrogenasa oxida el isocitrato (y reduce al mismo tiempo NAD+, produciendo NADH/H+). Como
producto intermedio de este paso resulta oxalosuccinato (no aparece en el esquema) que se convierte en alfa-cetoglutarato
mediante la descarboxilación. Resulta que el producto de este paso contiene 5 átomos de carbono en vez de 6. El grupo
carboxílico se libera en forma de dióxido de carbono (CO2).

5 – El alfa-cetoglutarato se une con una coenzima A con la ayuda de la alfa-cetoglutarato-deshidrogenasa para formar
succinil-CoA. En este paso se libera otro CO2, lo que deja el producto con 4 átomos de carbono. Además se genera un
NADH/H+.

6 - Durante la reacción 6 que es catalizada por la succinil-CoA-sintetasa, se genera el succinato y una molécula de GTP
(un compuesto rico en energía). La coenzima A queda libre otra vez para reacciones siguientes.

7 – La succinato-deshidrogenasa procede a la oxidación del succinato formando el fumarato. En la misma reacción se

obtiene un FADH2, que a continuación reduce a la coenzima Q (ubiquinona), generando QH 2 (ubiquinol).

8 – Sigue la hidratación del fumarato por la fumarasa y se obtiene el malato.

9 – Finalmente, la malato-deshidrogenasa permite la oxidación del malato, generando oxalacetato y otro NADH/H+.
Regenerado, el oxalacetato puede aceptar de nuevo un acetil-CoA y recorrer el ciclo, ganando más “energía” en forma de
NADH/H+ y QH2 que puede ser utilizada en la cadena respiratoria.

El ciclo de Krebs no es solamente una ruta catabólica sino que también juega un papel importante en varios procesos
anabólicos (por eso se llama una vía anfibólica). Por ejemplo, el oxalacetato y el alfa-cetoglutarato sirven como precursores
en la biosíntesis de algunos aminoácidos. Otros de los metabolitos del ciclo participan en la gluconeogénesis y en la síntesis
de los ácidos grasos.
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Introducción

El ciclo de Krebs (también llamado ciclo del ácido cítrico o ciclo de los ácidos tricarboxílicos) es una ruta metabólica, es decir, una
sucesión de reacciones químicas, que forma parte de la respiración celular en todas las células aeróbicas. En células eucariotas se
realiza en la mitocondria. En las procariotas, el ciclo de Krebs se realiza en el citoplasma, específicamente en el citosol.

En organismos aeróbicos, el ciclo de Krebs es parte de la vía catabólica que realiza la oxidación de glúcidos, ácidos grasos y
aminoácidos hasta producir CO2, liberando energía en forma utilizable (poder reductor y GTP).

El metabolismo oxidativo de glúcidos, grasas y proteínas frecuentemente se divide en tres etapas, de las cuales, el ciclo de Krebs
supone la segunda. En la primera etapa, los carbonos de estas macromoléculas dan lugar a moléculas de acetil-CoA de dos carbonos, e
incluye las vías catabólicas de aminoácidos (p. ej. desaminación oxidativa), la beta oxidación de ácidos grasos y la glucólisis. La
tercera etapa es la fosforilación oxidativa, en la cual el poder reductor (NADH y FADH2) generado se emplea para la síntesis de ATP
según la teoría del acomplamiento quimiosmótico.

El ciclo de Krebs también proporciona precursores para muchas biomoléculas, como ciertos aminoácidos. Por ello se considera una vía
anfibólica, es decir, catabólica y anabólica al mismo tiempo.

El Ciclo de Krebs fue descubierto el por el alemán Hans Adolf Krebs, quien obtuvo el Premio Nobel

Marco teórico

El metabolismo comprende una serie de transformaciones químicas y procesos energéticos que ocurren en el ser vivo. Para que
sucedan cada una de esas transformaciones se necesitan enzimas que originen sustancias que sean a su vez productos de otras
reacciones. El conjunto de reacciones químicas y enzimáticas se denomina ruta o vía metabólica. El metabolismo se divide en:
El catabolismo es el metabolismo de degradación de sustancias con liberación de energía.

El anabolismo es el metabolismo de construcción de sustancias complejas con necesidad de energía en el proceso.

En las rutas metabólicas se necesitan numerosas y específicas moléculas que van conformando los pasos y productos intermedios de
las rutas. Pero, además, son necesarios varios tipos de moléculas indispensables para su desarrollo final:

 1. metabolitos (moléculas que ingresan en la ruta para su degradación o para participar en la síntesis de otras sustancias más
complejas),
 2. nucleótidos (moléculas que permiten la oxidación y reducción de los metabolitos),
 3. moléculas energéticas (ATP y GTP o la Coenzima A que, al almacenar o desprender fosfato de sus moléculas, liberan o
almacenan energía),
 4. moléculas ambientales (oxígeno, agua, dióxido de carbono, etc. que se encuentran al comienzo o final de algún proceso
metabólico).

REACCIONES DEL CICLO DE KREBS

El ciclo de Krebs tiene lugar en la matriz mitocondrial en eucariota

El acetil-CoA (Acetil Coenzima A) es el principal precursor del ciclo. El ácido cítrico (6 carbonos) o citrato se regenera en cada ciclo
por condensación de un acetil-CoA (2 carbonos) con una molécula de oxaloacetato (4 carbonos). El citrato produce en cada ciclo una
molécula de oxaloacetato y dos CO2, por lo que el balance neto del ciclo es:
Los dos carbonos del Acetil-CoA son oxidados a CO2, y la energía que estaba acumulada es liberada en forma de energía química:
GTP y poder reductor (electrones de alto potencial): NADH y FADH2. NADH y FADH2 son coenzimas (moléculas que se unen a
enzimas) capaces de acumular la energía en forma de poder reductor para su conversión en energía química en la fosforilación
oxidativa.
El FADH2 de la succinato deshidrogenasa, al no poder desprenderse de la enzima, debe oxidarse nuevamente in situ. El FADH2 cede
sus dos hidrógenos a la ubiquinona (coenzima Q), que se reduce a ubiquinol (QH2) y abandona la enzima.

Etapas del ciclo de Krebs

Reacción 1: Citrato sintasa (De oxalacetato a citrato)

El sitio activo de la enzima, activa el acetil-CoA para hacerlo afín a un centro carbonoso del oxalacetato. Como consecuencia de la
unión entre las dos moléculas, el grupo tioéster (CoA) se hidroliza, formando así la molécula de citrato.

La reacción es sumamente exoergónica (?G'°=-31.4 kJ/mol), motivo por el cual este paso es irreversible. El citrato producido por la
enzima, además, es capaz de inhibir competitivamente la actividad de la enzima. Incluso estando la reacción muy favorecida (porque
es exoergónica), la citrato sintasa puede ser perfectamente regulada. Este aspecto tiene una notable importancia biológica, puesto que
permite una completa regulación del ciclo de Krebs completo, convirtiendo a la enzima en una especie de marcapasos del ciclo.

Reacción 2: Aconitasa (De citrato a isocitrato)

La aconitasa cataliza la isomerización del citrato a isocitrato, por la formación de cis-aconitato. La enzima cataliza también la reacción
inversa, pero en el ciclo de Krebs tal reacción es unidireccional a causa de la ley de acción de masa: las concentraciones (en
condiciones estándar) de citrato (91%), del intermediario cis-aconitato (3%) y de isocitrato (6%), empujan decididamente la reacción
hacia la producción de isocitrato.

En el sitio activo de la enzima está presente un clúster hierro-azufre que, junto a algunos residuos de aminoácidos polares, liga el
sustrato. En concreto, la unión al sustrato se asegura por la presencia de un resto de serina, de arginina, de histidina y de aspartato, que
permiten sólo la unión estereospecifica del citrato 1R,2S, rechazando la forma opuesta.

Reacción 3: Isocitrato deshidrogenasa (De isocitrato a oxoglutarato)

La isocitrato deshidrogenasa mitocondrial es una enzima dependiente de la presencia de NAD+ y de Mn2+ o Mg2+. Inicialmente, la
enzima cataliza la oxidación del isocitrato a oxalsuccinato, lo que genera una molécula de NADH a partir de NAD+. Sucesivamente, la
presencia de un ión bivalente, que forma un complejo con los oxígenos del grupo carboxilo en posición alfa, aumenta la
electronegatividad de esa región molecular. Esto genera una reorganización de los electrones en la molécula, con la consiguiente rotura
de la unión entre el carbono en posición gamma y el grupo carboxilo adyacente. De este modo se tiene una descarboxilación, es decir,
la salida de una molécula de CO2, que conduce a la formación de a-cetoglutarato, caracterizado por dos carboxilos en las extremidades
y una cetona en posición alfa con respecto de uno de los dos grupos carboxilo.

Reacción 4: a-cetoglutarato deshidrogenasa (De oxoglutarato a Succinil-CoA)

Después de la conversión del isocitrato en a-cetoglutarato se produce una segunda reacción de descarboxilación oxidativa, que lleva a
la formación de succinil CoA. La descarboxilación oxidativa del a-chetoglutarato es muy parecida a la del piruvato, otro a-cetoácido.

Ambas reacciones incluyen la descarboxilación de un a-cetoácido y la consiguiente producción de una unión tioéster a alta energía con
la coenzima A. Los complejos que catalizan tales reacciones son parecidos entre ellos.

La a-cetoglutarato deshidrogenasa (o, más correctamente, oxoglutarato deshidrogenasa), está compuesta de tres enzimas diferentes:

 Subunidad E1: las dos cetoglutarato deshidrogenasas.

 Subunidad E2: la transuccinilasa.
 (La subunidad E1 y E2 presentan una gran homología con las de la piruvato deshidrogenasa.)
 Subunidad E3: la dihidrolipoamida deshidrogenasa, que es el mismo polipéptido presente en el otro complejo enzimático.

Reacción 5: Succinil-CoA sintetasa (De Succinil-CoA a succinato)

El succinil-CoA es un tioéster a alta energía (su ?G°' de hidrólisis está en unos -33.5 kJ mol-1, parecido al del ATP que es de -30.5 kJ
mol-1). La citrato sintasa se sirve de un intermediario con tal unión a alta energía para llevar a cabo la fusión entre una molécula con
dos átomos de carbono (acetil-CoA) y una con cuatro (oxalacetato). La enzima succinil-CoA sintetasa se sirve de tal energía para
fosforilar un nucleósido difosfato purinico como el GDP.

La energía procedente del tioéster viene convertida en energía ligada a una unión fosfato. El primer paso de la reacción genera un
nuevo intermediario a alta energía, conocido como succinil fosfato. Sucesivamente, una histidina presente en el sitio catalítico remueve
el fosfato de la molécula glucídica, generando el producto succinato y una molécula de fosfohistidina, que dona velozmente el fosfato
a un nucleósido difosfato, recargándolo a trifosfato. Se trata del único paso del ciclo de Krebs en el que se produce una fosforilación a
nivel de sustrato.

El GTP está implicado principalmente en las rutas de transducción de señales, pero su papel en un proceso energético como el ciclo de
Krebs es, en cambio, esencialmente trasladar grupos fosfato hacia el ATP, en una reacción catalizada por la enzima nucleósido
difosfoquinasa.

Reacción 6: Succinato deshidrogenasa (De succinato a fumarato)

La parte final del ciclo consiste en la reorganización de moléculas a cuatro átomos de carbono hasta la regeneración del oxalacetato.
Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el succinato tiene que convertirse en un carbonilo. Como ocurre en otras rutas,
por ejemplo en la beta oxidación de los ácidos grasos, tal conversión ocurre mediante tres pasos: una primera oxidación, una
hidratación y una segunda oxidación. Estos tres pasos, además de regenerar oxalacetato, permiten la extracción ulterior de energía
mediante la formación de FADH2 y NADH.

La primera reacción de oxidación es catalizada por el complejo enzimático de la succinato deshidrogenasa, la única enzima del ciclo
que tiene como aceptor de hidrógeno al FAD en vez de al NAD+. El FAD es enlazado de modo covalente a la enzima por un residuo
de histidina. La enzima se vale del FAD ya que la energía asociada a la reacción no es suficiente para reducir el NAD+.

El complejo enzimático también es el único del ciclo que pasa dentro de la membrana mitocondrial. Tal posición se debe a la
implicación de la enzima en la cadena de transporte de los electrones. Los electrones pasados sobre el FAD se introducen directamente
en la cadena gracias a la unión estable entre la enzima y el cofactor mismo.

Reacción 7: Fumarasa (De fumarato a L-malato)

La fumarasa cataliza la adición en trans de un protón y un grupo OH- procedentes de una molécula de agua. La hidratación del
fumarato produce L-malato.

Reacción 8: Malato deshidrogenasa (De L-malato a oxalacetato)

La última reacción del ciclo de Krebs consiste en la oxidación del malato a oxalacetato. La reacción, catalizada por la malato
deshidrogenasa, utiliza otra molécula de NAD+ como aceptor de hidrógeno, produciendo NADH.

La energía libre de Gibbs asociada con esta última reacción es decididamente positiva, a diferencia de las otras del ciclo. La actividad
de la enzima es remolcada por el consumo de oxalacetato por parte de la citrato sintasa, y de NADH por parte de la cadena de
transporte de electrones.

Un balance posible de la degradación total de la glucosa

Para calcular la energia que se obtiene de la glucosa se pueden establecer cuatro instancias en su degradacion: glucolisis,
decarboxilacion oxidativa del piruvato, ciclo de Krebs y cadena respiratoria.

La cantidad de ATP generado difiere segun las lanzaderas implicadas y el tipo de celula (procariota o eucariota). En el cuadro 1 se
plantea un balance en una celula eucariota, en la que opero solo la lanzadera del glicerol fosfato.
Conclusiones

La última fuente de energía de la que el metabolismo hace uso son las reservas de grasa.

2-Mientras haya reservas de glucógeno será ésta y no otra la fuente de energía utilizada.

3-Los alimentos con índice glucémico alto provocan un rápido incremento de presencia glucémica en sangre.

4-El metabolismo advertido de la presencia de combustible rápido, deja relegada a un segundo plano la movilización de las reservas de
grasa (lipólisis).

5-Por lo que para fomentar la lipólisis se recurre a dietas con una reducida, pero correcta presencia de glúcidos. Se pretende mantener
los azúcares a niveles un tanto reducidos, con objeto de que el metabolismo basal eche mano de las indeseadas grasas corporales.

Bibliografía

Bioquimica, Mathews y van Holde, Editorial McGraw Hill – Interamericana, 1999.

Links -Videos

http://www.youtube.com/watch?v=aCypoN3X7KQ&feature=related

http://www.youtube.com/watch?v=3W0sskfORjU&feature=related

http://www.youtube.com/watch?v=iXmw3fR8fh0

Leer más: http://www.monografias.com/trabajos92/ciclo-krebs/ciclo-krebs.shtml#ixzz2W8nnTgyc

 En condiciones anaerobias, las células animales reducen el piruvato a lactato, en las levaduras a etanol. Por el contrario, en
condiciones aerobias, el piruvato ingresa a la matriz mitocondrial y es convertido a acetil-Coenzima A (AcCoA) para llevar estos
Carbonos a su estado de oxidación total en el ciclo del ácido cítrico.

El ciclo del ácido cítrico, considerado el embudo del metabolismo, consiste ocho reacciones enzimáticas, todas ellas
mitocondriales en los eucariontes. El ciclo del ácido cítrico es la vía central del metabolismo aerobio: es la vía oxidativa final en el
catabolismo de los carbohidratos, ácidos grasos y aminoácidos, además es una fuente importante de intermediarios de vías
biosintéticas. En muchas células la acción acoplada del ciclo del ácido cítrico y la cadena de transporte de electrones son responsables
de la mayoría de la energía producida.

Historia:

Si los libros científicos fueran crónicas que narraran el tortuoso camino de la ciencia para viajar de una hipótesis a la siguiente,
desechando la primera y fortaleciendo la segunda, serian más cercanos a las realidades del progreso científico que a la ordenada
narrativa que a menudo presentan. Estas realidades son perfectamente ilustradas por la historia y descubrimiento del ciclo del ácido
cítrico.
 La historia comienza a principios de la década de los 30´s con el descubrimiento de que al agregar succinato, fumarato y malato
a músculos machacados incrementa la velocidad del consumo de Oxígeno. El oxaloacetato se incorporó a la lista de ácidos
dicarboxílicos cuando se descubrió que se podía formar en condiciones aeróbicas a partir del piruvato. En 1935 A. Szent-Györgyi
propuso que ciertos pares de ácidos dicarboxilicos eran interconvertidos por la acción de deshidrogenasas y que este proceso estaba
relacionado con la respiración.

Aunque el ácido cítrico fue descubierto en 1784 por Carl Wilhelm Scheele en el jugo de limón, y no fue hasta 1937 que los
científicos entendieron su participación en el metabolismo. Carl Martius y Franz Knoop mostraron que el ácido cítrico es convertido en
alfa-cetoglutarato por medio del isocitrato. Se supo también que el alfa-cetoglutarato puede ser oxidado a succinato.

La formación del citrato era la pieza faltante para poder armar completamente el rompecabezas metabólico. El descubrimiento
que resolvió este rompecabezas y unificó el metabolismo fue hecho en 1937 por Sir Hans Krebs y W.A. Johnson: ellos mostraron que
el citrato es derivado del piruvato y del oxaloacetato completando lo que se conoce como el ciclo del ácido cítrico. En 1953 Krebs ganó
el premio Nobel por estas importantes aportaciones.

Se necesito de una década para demostrar que el Ac-CoA, derivado del piruvato, es la fuente intermediaria de los fragmentos
de dos Carbonos que se combinan con el oxaloacetato para formar citrato.

En 1948 E.P. Kennedy y A. Lenhinger descubrieron que en mitocondrias aisladas de homogenados de hígado de rata, se
llevaban a cabo la oxidación del piruvato y de todos los intermediarios del ciclo de Krebs a expensas de O2, por tanto contienen todas
las enzimas necesarias para catalizar las reacciones del ciclo y del transporte energético. Algunas de las enzimas que participan en
este proceso, están en la matriz mitocondrial, otras unidas a la membrana interna. En algunos tejidos, en el citosol, se encuentran la
aconitasa (hidrolasa), la isocitrato deshidrogenasa (NADP+ dependiente), la fumarasa y la malato deshidrogenasa.

La respiración es el proceso por medio del cual las células aeróbicas obtienen energía a partir de la oxidación de las moléculas
combustibles por el oxígeno.

El ciclo de Krebs, es la ruta central común para la degradación de los restos acetilo (de 2 átomos de C) que derivan de los
glúcidos, ácidos grasos y aminoácidos. Es una ruta universal, catalizada por un sistema multienzimático que acepta los grupos acetilo
del acetil-CoA como combustible, degradándolo hasta CO2 y átomos de Hidrógeno, que son conducidos hasta el O2 que se reduce
para formar H2O (en la cadena de transporte de electrones).
Figura: las reacciones del ciclo de Krebs.
 La oxidación del piruvato a Ac-CoA es catalizada por el complejo multienzimático de la piruvato deshidrogenasa (PDH), el
proceso que es muy complicado, se resume en:

Piruvato + NAD+ + CoA  Ac-CoA + NADH + H+ + CO2 G°´= - 8.0kcal/mol

Esta reacción irreversible en tejidos animales, no forma parte del ciclo de Krebs, pero constituye un paso obligatorio para la
incorporación de los glúcidos al ciclo.

El trabajo acoplado del ciclo del ácido cítrico y la cadena de transporte de electrones es la mayor fuente de energía metabólica.

El metabolismo aerobio del piruvato por el ciclo del ácido cítrico y la cadena de transporte de electrones produce mucha mas
energía que la simple conversión aerobia del piruvato a lactato o etanol . En condiciones aerobicas, el piruvato sufre una
descarboxilacion oxidativa con la formación de AcCoA. El grupo acetilo del AcCoA es transferido al oxaloacetato para dar citrato

En reacciones subsecuentes, dos de los átomos de Carbono del citrato se oxidan a CO 2 y el oxaloacetato es regenerado. La
reacción neta de ciclo del ácido cítrico también produce tres moléculas de NADH, una de FADH2 y una molécula del compuesto
trifosfato de guanosina (GTP) altamente energético (en algunos organismos es directamente ATP) por cada molécula de AcCoA
oxidada

AcCoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi + H2O  CoASH + 3NADH + FADH2 + GTP + 2CO2 +
3H+

Las moléculas de NADH y FADH2 son oxidadas en la cadena de transporte de electrones con la formación de ATP en la fosforilación
oxidativa. El ATP puede ser producido a partir del GTP vía una fosforilación a nivel de sustrato, que es la transferencia de un grupo
fosforilo de un compuesto rico en energía como el GTP, al ADP.

La conversión anaeróbica de glucosa a lactato por la glucólisis ocurre con un cambio en la energía libre estándar de – 30 kcal
-1
mol

D-glucosa + 2Pi + 2ADP


 2lactato + 2ATP + 2H2O

La oxidación completa de la glucosa a bioxido de Carbono y agua por la glucólisis, el ciclo del ácido cítrico y la cadena de
transporte de electrones ocurre con un cambio en la energía libre estándar de – 686 kcal mol-1, un cambio de mas de 20 veces:

C6H12O6 + 6O2  6CO2 + 6H2O G°´= - 686 kcalmol.

Alrededor del 40 % de la energía liberada por la oxidación de los alimentos es conservada en forma de ATP. Aproximadamente
tres moléculas de ATP son producidas por cada molécula de NADH oxidada a NAD+ y aproximadamente dos moléculas de ATP son
producidas por cada molécula de FADH2 oxidada a FAD por la cadena de transporte de electrones. Un máximo de 38 moléculas de
ATP pueden ser producidas por la oxidación completa de la glucosa
 La enzima citrato sintasa fue descrita por Severo Ochoa quien la denominó como enzima condensante, pues lleva a
cabo una condensación aldólica entre el metilo del Ac-CoA y el carbonilo del oxaloacetato, en la reacción se hidroliza el
tioéster y se forma el CoA-SH (succinil-CoA). Esta enzima también cataliza la formación del monofluorocitrato a partir de
monofluoro-Ac-CoA. Esta reacción es letal, pues el fluoroacetato no es tóxico, pero el fluorocitrato es inhibidor de la
aconitasa, siguiente enzima del ciclo. La citrato sintasa en inhibida por succinil-CoA, ATP, NADPH, ésteres de CoA y ácidos
grasos de cadena larga (18C), no se sabe si esto último tiene significado biológico.

La reacción de la citrato sintasa se divide en tres pasos, los dos primeros son concertados: 1.- formación del anión
tioenolato; 2.- formación del S-citril-CoA (una molécula quiral) y 3.- formación de citrato y liberación de CoASH.
Figura: representación de la transformación del oxaloacetato en citrato.

La aconitasa cataliza la interconversión entre estos isómeros. La enzima contiene Fe(II) y necesita un tiol como
cisteína o glutatión (Glu-Cys-Gly) para efectuar la reacción. Cataliza la adición reversible de H2O al doble enlace del ácido
cis-aconítico, el H y el OH del agua siempre se acoplan en posición trans entre ellos a través de la formación del
intermediario cis-aconitato.

Regresa a las reacciones del ciclo de Krebs

Es una descarboxilación oxidativa del isocitrato para formar -ceto(oxo)glutarato y la generación de la primera
molécula de CO2 y NADH del ciclo. La enzima que cataliza la reacción es la isocitrato deshidrogenasa, que existe en dos
isoformas, una dependiente de NAD+ que sólo se encuentra en mitocondria y otra dependiente de NADP + que también está
en citoplasma.

La enzima dependiente de NAD+ es el catalizador principal de la vía, necesita ADP como modulador positivo, así
como Mg2+. Es un homooctámero de 380,000 que es inhibido por NADH y ATP. La isocitrato deshidrogenasa dependiente
de NADP+ no es alostérica.

En animales, es una oxidación irreversible del -ceto(oxo)glutarato, proceso catalizado por el complejo de la -
ceto(oxo)glutarato deshidrogenasa que consiste en la descarboxilación oxidativa de un cetoácido (-ceto(oxo)glutarato),
liberando el segundo CO2 y NADH del ciclo del ácido cítrico. El proceso en general recuerda la reacción catalizada por el
complejo multienzimático de la piruvato deshidrogenasa; en este caso las enzimas que forman el complejo son: -
cetoglutarato deshidrogenasa (E1), dihidrolipoil transsuccinolasa (E2) y dihidrolipoil deshidrogenasa (E3). La reacción es
análoga a la oxidación del piruvato a Ac-CoA y se produce por el mismo mecanismo, participan como coenzimas: PPi de
tiamina, ácido lipóico, CoA, FAD+, y NAD+;
 Es una disociación del succinil-CoA, la CoA no se pierde por simple hidrólisis, sino en una reacción de conservación
de la energía con el difosfato de guanosina y fósforo inorgánico.

La enzima es la succinil-CoA sintetasa (también llamada succinato tiocinasa), que sintetiza un enlace de alta energía
en el GTP. Se ha encontrado que el mecanismo se lleva por la fosforilación de la enzima en una histidina, el mecanismo
de reacción consiste de tres eventos:

1.- Succinil-CoA + Pi + Enzima (E)  E-Succinil-P + CoA

2.- E-succinil-P  E-P + succinato

3.- E-P + GDP  E + GTP.

El GTP cede su –P al ADP para formar ATP reacción catalizada por la nucleósido difosfato cinasa, esta es una
fosforilación a nivel de sustrato como la que cataliza la piruvato cinasa en la glucólisis.
 La oxidación del succinato es catalizada por la succinato deshidrogenasa, flavoproteína que contiene FAD unido
covalentemente.

FAD-ribitol-P-P-ribosa

I I

Flavina Adenina

Esta enzima está unida a la membrana interna mitocondrial, el FAD actúa como un aceptor de hidrógenos en la
reacción.

Esta enzima es una ferrosulfoproteína de 100,000 kDa, que contiene un FAD, 8 átomos de Fe y 8 de azufre; es un
heterodímero. En la subunidad mayor (70,000 kDa), se encuentra el FAD, 4Fe y 4S; la otra subunidad es de 30,000 Da. La
succinato deshidrogenasa es activada por succinato, fósforo inorgánico, ATP, y coenzima Q (CoQ) reducida. Por otra parte,
es inhibida por oxaloacetato, su actividad es mucho mayor que las demás enzimas del ciclo y que las de la cadena
respiratoria.
La hidratación reversible del fumarato a L-malato es catalizada por la fumarasa, que es una enzima hidratasa.

La fumarasa tiene un peso molecular de 200,000 kDa, es un homotetrámero activo (sus monómero son inactivos
cuando se separan). Esta enzima es Inhibida por ATP, y es estereoespecífica para su substrato.

Es la última reacción del ciclo. La malato deshidrogenasa NAD + dependiente cataliza la oxidación del L-malato a
oxaloacetato. Es una enzima estereoespecífica, se encuentran 2 isoformas en animales, una mitocondrial y otra
citoplásmica.
Figura: Representación de las transiciones moleculares que ocurren durante el ciclo de Krebs.
substrato(s) enzima productos G

AcCoA + oxaloacetato + H2O  citrato + CoASH -9.08

citrato sintasa

citrato  isocitrato +3.18

aconitasa

isocitrato + NAD+  -cetoglutarato

+ NADH + CO2+ H+ -1.70

isocitrato deshidrogenasa
-cetoglutarato + CoASH + NAD+  succinil-CoA

+ NADH + CO2+ H+ -8.82

-cetoglutarato deshidrogenasa

succinil-CoA + GDP + Pi  succinato + GTP +

CoASH -2.12

succinil-CoA sintasa

Succinato + FAD  fumarato + FADH2 0

succinato deshidrogenasa

Fumarato + H2O  L-malato -0.88

fumarasa

L-malato + NAD+  oxaloacetato +6.69

malato deshidrogenasa
Tabla: las reacciones parciales del ciclo de los ácidos tricarboxílicos.

Las flechas rojas indican la posibilidad de reversibilidad del proceso.  en kcalmol-1

Figura: representación del ciclo de los ácidos tricaboxílicos y su función en el metabolismo central.
Leucina Arginina

Lisina Glutamina

Fenilalanina
Glutamato Histidina

Triptofano Prolina
Tirosina isocitrato -cetoglutarato

Isoleucina

citrato Metionina

Acetoacetil-CoA Ciclo Treonina

del Succinil-CoA Valina

Acetil-CoA Acido Cítrico

Succinato

Oxaloacetato Fenilalanina

Piruvato Fumarato Tirosina

Malato

Isoleucina Alanina

Leucina Cisteina Asparagina

Triptofano Glicina Aspartato

Serina

Triptofano
Figura: incorporación de los aminoácidos al ciclo de los ácidos tricarboxílicos.

La degradación de glucosa que rinde 2 moléculas de piruvato con la generación de neta de 2 moléculas ATP y 2 de NADH. En
condiciones anaeróbicas, el piruvato es convertido a lactato (en levaduras a etanol) para reciclar el NADH. En condiciones aeróbicas,
el NAD+ es regenerado a través de la fosforilación oxidativa. El control principal de la vía se lleva a cabo en la fosfofructocinasa 1 (PFK
1), activándola el AMP y el ADP (que varían de acuerdo al estado energético del organismo); la enzima es inhibida por ATP y citrato.
La PFK es activada por fructosa-2.6-bisfosfato (F2,6P), cuya concentración es regulada por los niveles de glucagon, epinefrina y
norepinefrina, a través del cAMP. Los niveles de este metabolito son regulados inversamente en el hígado y el músculo cardiaco: Un
incremento de cAMP en hígado ocasiona un decremento en la concentración de F2,6P y un incremento en corazón.

Para ir a más información sobre la glucólisis

 El ciclo del ácido cítrico oxida acetil-CoA, producto común de la degradación de la glucosa, ácidos grasos y
aminoácidos cetogénicos, a CO2 y H20 con la producción de NADH y FADH2. Muchos aminoácidos glucogénicos pueden
ser oxidados vía el ciclo del ácido cítrico por su conversión a uno de los intermediarios del ciclo. Las actividades de las
enzimas regulatorias del ciclo del ácido cítrico (citrato sintasa, isocitrato deshidrogenasa y -cetoglutarato deshidrogenasa),
están controladas por la disponibilidad de substratos y por inhibición por retroalimentación de intermediarios del ciclo.

Los ácidos grasos se rompen en unidades de C2 a través de la -oxidación formando acetil-CoA, y son sintetizados
a partir de esta molécula en una vía diferente. La actividad de -oxidación varía con la concentración de ácidos grasos, la
cual a su vez depende de la actividad de la triacilglicerol lipasa sensible a hormonas que se encuentra en el tejido adiposo.
Esta enzima es estimulada por reacciones de fosforilación/defosforilación dependientes de cAMP, gracias a la acción de
glucagon y epinefrina, e inhibida por insulina. La síntesis de ácidos grasos depende de la actividad de la acetil-CoA
carboxilasa, la cual es activada por citrato e inhibida por el producto de la vía en palmitoil-CoA (que es el precursor de
ácidos grasos de cadena mayor o insaturados). Esta vía es regulada a largo plazo a través de alteraciones en la velocidad
de síntesis de las enzimas, lo cual es estimulado por la insulina e inhibido por ayuno.

Es la vía mitocondrial que oxida NADH y FADH2 con la síntesis acoplada de ATP. La velocidad de la fosforilación
oxidativa (que está fuertemente coordinada con los flujos metabólicos de la glucólisis y el ciclo del ácido cítrico), es
dependiente de la concentración de ATP, ADP y Pi.
 El exceso de aminoácidos puede ser degradado a intermediarios metabólicos comunes. Muchas de estas vías comienzan con
la transaminación de los aminoácidos a sus correspondientes -ceto ácidos con la eventual transferencia del grupo amino a la urea a
través del ciclo de la urea. La leucina y la lisina son aminoácidos cetogénicos (sólo pueden ser convertidos en acetil-CoA o acetoacetato
y por tanto no son precursores de la glucosa). Los aminoácidos restantes, son glucogénicos (pueden cuando menos en parte ser
convertidos en uno de los precursores de la glucosa –piruvato, oxaloacetato, -cetoglutarato, succinil-CoA o fumarato-). 5 aminoácidos
son cetogénicos y glucogénicos. Los aminoácidos esenciales son aquellos que los animales no pueden sintetizar, deben ser obtenidos
de la dieta (a través de fuentes provenientes de plantas o microorganismos (levaduras y bacterias principalmente)). La síntesis de los
aminoácidos no esenciales en animales es generalmente más sencilla que la de los esenciales.

Esta vía genera NADPH (para utilizarlo en la biosíntesis reductora, así como precursor de los nucleótidos, la ribosa-5-fosfato),
a través de la oxidación de G6P. La generación de este metabolito es catalizada por la G6P deshidrogenasa, la cual es controlada por
los niveles de NADP+. La capacidad de las enzimas de discernir entre NADH (el cual es principalmente utilizado en el metabolismo
energético) y NADPH permite que el metabolismo energético y la biosíntesis puedan ser regulados independientemente.
 El glucógeno, reserva de glucosa en los animales, se almacena principalmente en hígado y músculo. Su conversión
a glucosa-6-fosfato (G6P) para entrar a la glucólisis, es catalizada en parte por la glucógeno fosforilasa; el camino inverso
i.e. la síntesis, se lleva a cabo por la glucógeno sintasa. Estas enzimas están reguladas recíprocamente a través de
reacciones de fosforilación/defosforilación, este proceso es el resultado de una cascada de fosforilación que responde a
los niveles de glucagon y epinefrina a través del CAMP.

Los mamíferos pueden sintetizar glucosa a partir de una gama de precursores (piruvato, lactato, glicerol y aminoácidos
glucogénicos), la vía ocurre principalmente en hígado y riñón. Muchos de estos precursores son convertidos a oxaloacetato el cual a
su vez es transformado en fosfoenolpiruvato y de ahí, a glucosa (muchas de las reacciones son inversas a las de la glucólisis). Los
pasos irreversibles de la glucólisis (PFK y hexoquinasa) son rodeados por reacciones hidrolíticas catalizadas respectivamente por la
fructosa-1,6-bisfosfatasa (FBPasa) y glucosa-6-fosfatasa. Ambas enzimas pueden ser al menos parcialmente, activas
simultáneamente lo que ocasiona un ciclo de substrato. Este ciclo es importante para regular la velocidad y dirección de flujo entre la
glucólisis y la gluconeogénesis.
........ en general, la respiración es solamente una lenta combustión de carbono e hidrogeno, lo cual es enteramente similar a lo que
ocurre en una lampara o vela, y por tanto, desde ese punto de vista, los animales que respiran son cuerpos combustibles que se queman
y consumen a ellos mismos.

S’eguin, Armand y Lavoisier Antoine (1789).

Lavoisier, padre de la química moderna, había demostrado que los animales consumen O2 y generan CO2. A principios del
siglo XX, Otto Warburg inició estudios de enzimología y quedo claro que las oxidaciones biológicas son catalizadas por enzimas
intracelulares.

Introducción

Mitocondria del griego: mitocondrias, thread + chondros, gránulo es el sitio donde se lleva a cabo la respiración celular, i.e. el
metabolismo aerobio, en la mayoría de los organismos eucariontes (con núcleo verdadero). Lo anterior fue demostrado por A.
Lenhinger y E. Kennedy en 1948. Este organelo descubierto en el siglo XIX, varía en tamaño y forma dependiendo de la fuente y el
estado metabólico, pero a menudo son elipsoides de aproximadamente 5 µm de diámetro y 1 µm de largo, del tamaño de una bacteria
típica. Una célula eucarionte típica contiene mas de 2000 mitocondrias, lo que ocupa alrededor de la quinta parte del volumen celular;
esta cantidad es necesaria porque este organelo es la central energética de la célula. Las células de mamíferos que contienen más
mitocondrias son las células cardiacas y los espermatozoides..

Las microscopias electrónicas de las mitocondrias, revelan la presencia de dos membranas, una de ellas lisa, en la parte
externa del organelo y otra muy plegada, a cada pliegue se le denomina cresta. El número de crestas varía con la actividad respiratoria
del tipo particular de célula en estudio. Lo anterior se debe a que las enzimas que llevan a cabo el transporte de electrones y las
fosforilación oxidativa, están unidas a esta membrana. En los hepatocitos, las mitocondrias tienen pocas crestas, en las células
cardiacas, hay muchas. Debido a lo anterior, en este organelo existen dos espacios, el intermembranal y la matriz. Las enzimas
respiratorias, forman parte tanto de la membrana interna, como de la matriz gelatinosa (50 % H2O). Estas enzimas acoplan la energía
producida por la oxidación de los nutrientes a la energía necesaria para sintetizar adenosín trifosfato (ATP), que después de
transportarse a los diversos organelos, es utilizado como combustible en diversos procesos.

Las mitocondrias tienen más similitudes con las bacterias que únicamente tamaño y forma. La matriz mitocondrial, contiene
DNA, RNA y ribosomas que participan en la síntesis de algunos componentes mitocondrias (el resto es importado del citoplasma
después de su expresión desde el núcleo). A pesar de esto, se reproducen por fisión binaria, además el proceso respiratorio que llevan
a cabo, es muy semejante al que se observa en bacterias aerobias actuales. A partir de estas observaciones, Lynn Margulis propuso
que el origen de las mitocondrias modernas es a partir de la endosimbiosis (endo, dentro + simbiosis relación biológica con beneficio
mutuo) de bacterias aerobias con eucariontes anaerobios antiguos. Los nutrientes abastecidos por el eucarionte y consumidos por la
bacteria, fueron presumiblemente reembolsados con creces, debido a la alta eficiencia metabólica oxidativa que el procarionte (sin
núcleo), le dio al eucarionte. La corroboración de la teoría endosimbiótica se da en la amiba Pelomyxa palustris, uno de los pocos
eucariontes que carece de mitocondrias. Esta amiba, permanentemente hace endosimbiosis con bacterias aerobias. El origen de
diversos organelos también se puede explicar a partir de la teoría endosimbiótica.
 A la mitocondria, se le considera la central energética de las células, ahí se lleva a cabo el metabolismo oxidativo de los
eucariontes: actividades de piruvato deshidrogenasa, enzimas del ciclo del ácido cítrico, oxidación de los ácidos grasos y las enzimas
y proteínas redox que llevan a cabo el transporte de electrones y la fosforilación oxidativa.
Introducción.

La transferencia de electrones en la cadena de transporte de electrones es energéticamente favorable porque el NADH es un

poderoso donador de electrones y el Oxígeno molecular es un potente aceptor de electrones. De hecho el flujo neto de electrones
desde el NADH hasta el Oxígeno resulta en la síntesis de ATP. La fosforilación oxidativa es una serie de eventos químicos que llevan
a la síntesis de ATP:

ADP + Pi  síntesis del ATP

fosforilación del ADP

El evento vital se lleva a cabo en la membrana plasmática bacteriana, en la membrana interna mitocondrial y en los tilacoides
de los cloroplastos.
 En la década de los 30´s: Belitzer y Tsivakoba encontraron que el proceso de la fosforilación de ADP en los tejidos animales
estaba asociado a la respiración o consumo de O2. Mas adelante se describió que la respiración se lleva a cabo en las mitocondrias.

H. Krebs encontró el ciclo de los ácidos tricarboxílicos en el cual el piruvato se transforma en Ac-CoA que a su vez interviene en la
reducción de NAD y en la posterior generación del succinato.

Como ha sucedido muchas veces a los largo de la historia de la investigación científica, dos investigadores reportaron
simultáneamente un evento bioquímico. En 1937, Kalkar en Dinamarca y Belitzer en la antigua URSS, encontraron una correlación
muy interesante entre la desaparición del Pi y la respiración. Estudiaron el efecto de la adición de Pi (HPO34) a homogenados de tejidos
de mamíferos; el experimento lo realizaron en presencia y ausencia de 02 o en presencia de cianuro (CN-). Reportaron que a medida
que se consumía el 02 el Pi desaparecía del medio de reacción y que cuando agregaban a un inhibidor del consumo de 02, CN- e este
caso, el proceso no se llevaba a cabo. Posteriormente se verificó que la síntesis de ATP es una reacción endergonica, en la cual la
respiración o consumo de 02 acopladas a la fosforilación del ADP, genera energía.

En los seres vivos la oxidación de moléculas orgánicas tiene como resultado el movimiento de protones (H+) del interior de la
matriz mitocondrial al espacio intermembranal en mitocondrias y cloroplastos o bien al citoplasma en las bacterias. La cadena de
transporte de electrones y la fosforilación oxidativa estuvieron separadas conceptualmente por mucho tiempo. Las observaciones de
la formación del ATP hacían pensar a los investigadores en buscaba un intermediario fosforilado de la reación. Hasta que en 1961
Peter Mitchell propuso la hipótesis quimiosmótica en la cual propuso que el intermediario energético necesario para la formación del
ATP (o fosforilación del ADP), era una diferencia en la concentración de protones a través de la membrana. Gracias a estas
observaciones Mitchell recibió en premio Nobel de Química en 1978. Murió al final de la década de los 80´s.
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