BOMBEO DE PROTONES EN LEVADURAS Y SUS PROCESOS INHIBITORIOS

Daniel Tello 10118000, Laura Zamudio 11221264

Universidad Icesi
Facultad de Ciencias Naturales
Laboratorio de Bioquímica
Santiago de Cali, Colombia
Abril 24 del 2012

1. Resultados:

VASO No. 1 control 2 (DNP) 3 azida

Suspensión de 5 5 5
levadura al 20% (ml)

Agua destilada (ml) 40 40 40

Solución de DNP 80 0.2

mM (ml)

Solución de azida de 0.5

sodio 800 (mM) (ml)

Tabla 1. Concentración

1 control 2 (DNP) 3 azida

pH a los cero 6.00 5.96 6.07
minutos

pH después de tres 5.77 5.78 5.96

minutos

pH después de seis 5.65 5.74 5.90

minutos

Tabla 2. pH
 1 control 2 (DNP) 3 azida
Solución de glucosa 5 5 5
al 10%

pH a los cinco 5.22 5.20 5.70

minutos

pH a los diez 5.00 4.94 5.65

minutos

pH a los quince 4.87 4.84 5.61

minutos

pH a los veinticinco 4.75 4.74 5.58

minutos

pH a los 4.60 4.51 5.52

treintaicinco
minutos

Tabla 3. pH

6.1

5.9 Control
DNP
5.8
Azida
5.7

5.6

5.5
0 min 3 min 6 min

Gráfica 1. pH antes de añadir glucosa.

 pH vs tiempo
5.8
5.6
5.4
5.2
5 DNP
4.8
4.6
4.4
4.2
4
5 min 10 min 15 min
Gráfica 2. pH después de añadir la glucosa.
2. Análisis de resultados:
Por teoría sabemos que el DNP actúa
como un desacoplante de la cadena de
transporte electrónico y el Azida como un
inhibidor de la misma, lo que afecta el
flujo de protones a través de la membrana
mitocondrial interna.
Teniendo en cuenta los procesos
realizados en el laboratorio con células
que realizan procesos anaeróbicos, el
proceso es homologo al nombrado
anteriormente que se da en células
aerobias, ya que utilizan las misma
moléculas para poder reducirse u oxidarse
y así facilitar el transporte electrónico
(NADH Y FADH), por este mecanismo,
las células anaerobias mantienen un
estado electrónico estacionario mediante
la transferencia de electrones desde los
transportadores reducidos a los aceptores
electrónicos, como en la reducción del
piruvato a lactato en la glucólisis
anaerobia.
Control
Azida
25 min 35 min
Para entender lo que se nombrará es
menester, realizar una comparación entre
los desacoplantes e inhibidores:
* Básicamente los desacoplantes permiten
el paso de H+ desde el espacio
intermembrana hacia la matriz con
generación de calor. Esto lleva a una
disminución en el gradiente de H+,
disminuyendo así el potencial
electroquímico (negativo y alcalino en el
interior), con lo que la fuerza protón-
motriz que impulsa el retorno de H+
desde el espacio intermembrana hacia la
matriz a través de la ATP sintasa es
menor, de modo que la síntesis de ATP
disminuye.
* Los agentes inhibidores del transporte
de electrones actúan en sitios específicos
en el ensamblaje de transporte de
electrones, impidiendo que se siga
generando el bombeo de electrones para
contribuir a la fuerza protón-motriz.
En el laboratorio pudimos comprobar la ATP, lo que confirma que en la
teoría anteriormente nombrada. Con respiración aerobia hay ausencia del ciclo
respecto al DESACOPLANTE DNP, se del ácido cítrico, y solo hay glicólisis y
muestra que el pH baja constantemente cadena de transporte electrónica.
mientras el tiempo avanza, cuando el
DNP se aproxima a la membrana interna 3. Conclusiones
desde el exterior se protona, debido al pH
más bajo existente en esta zona. Esta * Para comprobar si los venenos
protonación aumenta la hidrofobicidad funcionan se utiliza glucosa por que las
del DNP, lo cual permite que difunda en levaduras hacen glicolisis y en este
la membrana, dentro de la matriz, el pH proceso se reducen moléculas que
más alto hace que el hidroxilo fenólico de después van a donar esos electrones y se
la sustancia se desprotone. Por tanto, el va a crear una fuerza protón motriz, es
desacoplador tiene el efecto de transporte por eso que se deben medir los cambios
de H+ nuevamente hacia la matriz, de pH.
evitando que los electrones fluyan hacia
el canal protónico de F0 y no se dé la * Los desacoplantes químicos como el
síntesis de ATP, es por ello que se DNP daña la relación entre la cadena de
observa un descenso en el pH ya que el transporte de electrones y la fosforilacion
aumento de hidrogeniones produce que el oxidativa por que altera el gradiente
ambiente intracelular esté ácido. protón motriz, algo que es observable con
las medidas de pH ya que este disminuye
El Azida, se sabe por teoría que inhibe el por que
complejo 4 de la cadena de transporte de
electrones, uniéndose a la forma oxidada la concentración de protones aumenta.
del hemo A3 del enzima, lo que impide la
función oxidoreductora de la misma, y
por ello no se permite que se cree el
gradiente de protones para la posterior
síntesis de ATP; se observa que el pH
disminuye ya que los protones que están
en la matriz proveniente de los otros
complejos que están funcionando
normalmente se quedan acumulados lo
que conlleva a la disminución notable del
pH (alta concentración de hidrogeniones
en la membrana interna mitocondrial).

Es necesario realizar una comparación

entre el funcionamiento aerobio y
anaerobio, una diferencia notable es la
producción menor de ATP en las células
anaeróbicas que en las aeróbicas, ya que
en las primeras solo hay glucolisis y a
partir de la producción de piruvato, se
toma la vía de la fermentación para
generar más o menos 10 moléculas de
 4. Bibliografía

* * Stryer, Beng, Lubert. Bioquímica 10ta

http://biofisicaguillermocordero.blogspot.
com/2010/03/inhibidores-y-
desacoplantes.html <Citado el 31 de
octubre de 2011>
*
http://www.monografias.com/trabajos10/
viascat/viascat.shtml <Citado el 31 de
octubre de 2011>
edición, cap.18 – Fosforilación oxidativa,
2008.
viascat/viascat.shtml <Citado el 31 de
octubre de 2011>
* Stryer, Beng, Lubert. Bioquímica 10ta
edición, cap.18 – Fosforilación oxidativa,
2008.

* Stryer, Beng, Lubert. Bioquímica 10ta

edición, cap.18 – Fosforilación oxidativa,
2008.