PRACTICA N° 1

EXTRACCION DE ADN

PRESENTADO POR: YESIKA ALEJANDRA MUÑOZ MOJANA

DIORLING QUINTO IBARGUEN
LEIDY TAPIA
CORIN NARVAEZ
DOCENTE: LUIS JAVIER SILVA QUIROZ
IX SEMESTRE

UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
PROGRAMA: INGENIERIA DE ALIEMNTOS
BIOTECNOLOGIA
FLORENICA CAQUETA 2019
 PRACTICA N° 1
EXTRACCION DE ADN

INTRODUCCION las bases permite al ADN hacer

El ácido desoxirribonucleico (ADN) es copias exactas de sí mismo
la molécula donde se encuentra (Parker. S. 2007)
toda la información necesaria para La extracción del ADN, requiere un
que los seres vivos puedan orden de etapas elementales para su
funcionar correctamente. A través separación. En la primera etapa se
del ADN se heredan determinadas debe romper la pared celular y
características de padres a hijos membrana plástica para poder
y así sucesivamente de generación acceder al núcleo de la célula, el
en generación. Fue descubierto en siguiente paso es el rompimiento de la
1869 por el medico suizo membrana nuclear para dejar libre el
Friedrich Miescher, quien deseaba ADN y en la última etapa se debe
saber que sustancias químicas se proteger el ADN de las enzimas que
encontraban en el núcleo de las puedan aislarlo.
células. En 1953 James Watson y
Francis Crick descifraron la estructura Los ácidos nucleicos, el ADN y ARN
tridimensional en doble hélice de la reciben su nombre por ser moléculas
molécula de ADN (Bernath, V. con características acídicas (como la
2011). Las dos hebras de ADN carga negativa en soluciones
se encuentran unidas mediante acuosas) y por localizarse
bases nitrogenadas por medio de inicialmente en el núcleo celular,
puentes de hidrogeno. Estas aunque también se encuentran en la
bases son adenina, guanina, mitocondria. Para su estudio los
citosina y timina, donde adenina ácidos nucleicos deben aislarse del
siempre se empareja con timina y resto de los componentes celulares,
guanina con citosina. Esta estructura como lípidos y proteínas, más
confiere al ADN sus dos rasgos clave: abundantes que los ácidos nucleicos.
el orden de las bases contiene el Asimismo, dependiendo del objeto de
código genético del cromosoma, estudio debe aislarse de preferencia el
mientras que el enlace transversal de ADN o ARN.
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EXTRACCION DE ADN

OBJETIVO GENERAL  Extraer el ADN del hígado de pollo y

 Extracción e identificación de la
estructura del ADN de productos
naturales como hígado de pollo,
mediante técnicas sencillas y eficaces.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
observar su estructura fibrilar
 Establecer la relación entre el proceso
de extracción y propiedades
fisicoquímicas del ADN
 Comprender y llevar a cabo el
procedimiento adecuado para cada
extracción.

DIAGRAMA DE FLUJO

Experimento n° 1 Extracción de ADN

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EXTRACCION DE ADN

Experimento n° 2 extracciones de ADN

MARCO TEORICO

¿QUE ES EL ADN?

El ADN es la macromolécula base de la herencia. Es un ácido nucleico que contiene

la información de las características hereditarias de cada ser vivo y las secuencias
para la creación de aminoácidos que generarán las proteínas vitales para el
funcionamiento de los organismos. Tiene como función principal el
almacenamiento de toda la información necesaria para la expresión de
determinadas características, en segmentos denominados genes o empaquetada
en cromosomas. Además, el ADN transcribe la información de las secuencias de
aminoácidos en el ARN o ácido ribonucleico, para que estas instrucciones puedan
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EXTRACCION DE ADN

salir protegidas del núcleo hacia los ribosomas, que traducirán la información para
crear las proteínas (cadenas de aminoácidos)

¿DONDE SE ENCUENTRA EL ADN?

El ADN se encuentra en todas las células de los seres vivos, se puede encontrar en las
células procariotas y eucariotas, en las células eucariotas se encuentra en el citosol, junto
con los otros elementos que flotan en ella. Por lo tanto su replicación es inmediata, es decir
no necesita recurrir a otros procesos para transmitir la información genética en el momento
de la división celular. En las células eucariotas (con núcleo celular definido), el ADN se
encuentra ubicado en el núcleo celular.

ESTRUCTURA DEL ADN

El ADN es una macromolécula con una estructura de doble hélice. Las 2 hebras que forman
el ADN van en sentidos inversos unidos por sus bases nitrogenadas (Adenina, Guanina,
Citosina y Timina). Por esta razón que se suele denominar la estructura del ADN como una
escalera invertida.

ACIDOS NUCLEICOS:

Los ácidos nucleicos constituyen el material genético de los organismos y son necesarios
para el almacenamiento y la expresión de la información genética. Existen dos tipos de
ácidos nucleicos química y estructuralmente distintos: el ácido desoxirribonucleico (ADN) y
el ácido ribonucleico (ARN); ambos se encuentran en todas las células procariotas y
eucariotas. El ADN funciona como el almacén de la información genética y se localiza en
los cromosomas del núcleo, las mitocondrias y los cloroplastos de las células eucariotas.
En las células procariotas el ADN se encuentra en su único cromosoma y, de manera
extracromosómica, en forma de plásmidos. El ARN interviene en la transferencia de la
información contenida en el ADN hacia los compartimientos celulares. Se encuentra en el
núcleo, el citoplasma, la matriz mitocondrial y el estroma de cloroplastos de células
eucariotas y en el citosol de células procariotas.

MATERIALES:

Ingredientes: sal de mesa, hígado, fresas, bicarbonato de sodio

Reactivos: Alcohol isoamilico, enzimas “ablandador de carne”, champú, agua
destilada.
Equipos: nevera, centrifuga, batidora “licuadora
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EXTRACCION DE ADN

PROCEDIMIENTO
Experimento N°1.
Se tomó la muestra de “hígado” y se cortó en cubitos
En un vaso precipitado con agua se adicionaron los siguientes ingredientes: 5ml
champú, 1,5 gr sal de mesa y se llenó el vaso con agua destilada.
Luego se procedió a realizar la mezcla de todos los ingredientes junto a la muestra
de “hígado”, una vez mezclado los ingredientes se licuaron a velocidad máxima por
30 segundos.
Terminado el licuado se procedió a filtrar, obteniendo así un líquido libre de
impurezas.
En los tubos de ensayo se tomó ¼ de muestra filtrada, y posteriormente se
adicionaron 5gr de enzima, y el alcohol isoamalico se suministró por medio de las
paredes del tubo de ensayo.
Luego se dejó reposar la muestra durante 3 minutos, cuando presento la muestra
patrón una turbidez, y una doble capa sobre las paredes del tubo, se introdujo sobre
el tubo una varilla metálica en la que se extrajo una maraña de fibra de color café
claro.
En este experimentó se logró evidenciar en la muestra el ADN, en una cantidad
minuciosa.
Experimento N°2
Se realizó una muestra tampón en la que se necesitó de los siguientes ingredientes:
120ml de agua destilada, 1,5gr sal, 5gr bicarbonato y 5 ml de champú, esta muestra
se refrigero, la muestra a proporcionar el ADN se cortó en cuadritos.
Una vez obtenida la mezcla se puso en la batidora accionando las cuchillas a
impulsos durante 10 segundos, a impulsos, teniendo como resultado un
rompimiento de células y el restante quedara expuesto en el detergente.
Posteriormente se procedió a tomar 5 ml de triturado celular, con 10ml de tampón,
se realizó una agitación durante 2minutos, se separó el caldo celular y se filtró, una
vez filtro se puso en la centrifuga por 5 minutos.
Al momento de centrifugar en un tubo de ensayo se tomó 5ml de caldo molecular
con 10ml alcohol isoamalico previamente frio, y con una varilla metálica se extrajo
el ADN.
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EXTRACCION DE ADN

COMPARACION Y ANALISIS DE RESULTADOS.

Extracción de ADN en hígado

Fig 1. Extracción de ADN en hígado

En la práctica se utilizó como muestra orgánica hígado de pollo para la extracción

de ADN, esta muestra se empleó debido a su gran cantidad de mitocondrias por lo
tanto se hallan más cantidades de ADN. Inicialmente Al añadir el alcohol se fue
formando el precipitado de ADN y se observó la separación de las capas,
donde apreció una ligera presencia de precipitado con aspecto un poco fibroso.

Al extraer el ADN del tejido animal, del hígado de pollo el cual se encontraba en el
interior del núcleo celular, unido a proteínas donde fue necesario homogenizar el
tejido y romper las células para separar el núcleo. Se separó el ADN de las
proteínas que lo protegen y se precipito para extraerlo de la solución. Una vez
realizado esto se fue observando el ADN.
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EXTRACCION DE ADN

CUESTIONARIO

1. Cuál es el papel de las enzimas en un producto y para que se agregan en la

extracción?
R/: Las enzimas son altamente específicas y los procesos que utilizan enzimas
generalmente generan menos reacciones secundarias y subproductos que los otros
procesos químicos, y además son más respetuosos del medio ambiente. Las
enzimas también permiten que algunos procesos, que de otro modo no serían
prácticos, se puedan llevar a cabo de una manera eficiente. Además, debido a su
estructura tridimensional, la actividad de una enzima puede ser fácilmente
eliminada, lo cual hace el uso de enzimas en la industria mucho más atractivo en la
mayoría de los casos ya que pueden ser inactivadas de una manera fácil y rápida
después de su uso. Actualmente las enzimas son utilizadas en un amplio rango de
procesos, siendo especialmente útiles como aditivos en el desarrollo de productos
farmacéuticos, biomédicos, alimentarios (incluyendo bebidas y productos lácteos),
detergentes, productos de higiene personal y textiles, entre otros. En particular
como aditivos para detergentes, las enzimas han contribuido enormemente a su
desarrollo y mejora, tanto a nivel industrial como doméstico. Iván - 05 Noviembre
2012
2. Que función cumple el detergente?

R/: El detergente permite la emulsión de los lípidos presentes en las membranas

celulares y seguidamente provocan su ruptura. De esta manera el detergente
rompe la membrana celular y la membrana nuclear, al igual que todas las
membranas de los organelos, como las que rodean a las mitocondrias y
cloroplastos.
Cabe señalar, que el detergente pasa con facilidad por la pared celular debido a que
esta no se le otorga la función de permitir el pase o no de sustancias al medio
celular, la que si cumple esta función es la membrana plasmática y nuclear.
Además el detergente permite que las proteínas del ADN, e gran longitud se
fraccionen en cadenas más pequeñas y se puedan separar.

3. Que función cumple la sal?

R/: La sal evita la unión de las proteínas al ADN
El ADN es soluble en alcohol pero se torna insoluble en presencia de sal (NaCl)
porque el sodio neutraliza la carga negativa de los grupos fosfatos, por lo tanto el
alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, y la sal evita la unión de
las proteínas al ADN.
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EXTRACCION DE ADN

4. Qué utilidad tiene la extracción de ADN?

R/: El ADN o ácido desoxirribonucleico, es una base de datos en la cual está
contenida toda la información e instrucciones que determinan la forma y
características de un organismo y sus funciones. Es responsable además, de la
transmisión de estas características a través de la reproducción gracias a su poder
de replicación, constituyendo la base de la herencia.
Gracias al estudio del ADN se puede, además, conocer cuáles enfermedades se
tiene el riesgo de padecer; descubrir al autor de un crimen; identificar restos
humanos; verificar la paternidad; o hasta diseñar un tratamiento contra el
envejecimiento a medida.

5. Como rompemos la pared y la membrana plasmática de la célula?

Rta/:Una gran cantidad de productos de interés son intracelulares y para obtenerl

os se precisa la desintegración de la célula para liberar su contenido al medio.
Alteración química de las cubiertas celulares, permeabilización que facilite la sali
da del producto.
Temperatura: La selección de una u otra técnica dependerá las características del
producto que se desea purificar, tales como: Resistencia a Medios alcalinos,
solventes, detergente, enzimas, temperatura y esfuerzo de corte.
No mecánicos: Lisis celular Enzimático Químico (detergentes, disolventes)
Físicos (Choque osmótico) Tratamiento Alcalino Termalización Permeabilización.
Métodos Químicos: Choque osmótico. Permeabilización. Disolución lipídica.
Tolueno 10 % de la biomasa Digestión enzimática.
Enzimas que atacan la pared celular. Lisozima: ataca la capa de pepctidoglucano
de la pared celular.

6. Como protegemos el ADN de enzimas que puedan disminuir y aislar la calidad del
ADN?
R/:

7. ¿Qué efecto puede causar la exposición por largos periodos de tiempo de la

MUESTRA a los rayos ultravioleta, justifique su respuesta?
R/: Esta luz ultravioleta se divide en tres tipos: LUV-A (400-315 nm), LUV-B (315-
280 nm), LUV-C (280-100 nm). Ya se ha descrito que esta radiación es bien
absorbida por el ADN. Los tres tipos de LUV producen daño directo, que consiste
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en atacar el material genético al formar unas estructuras que evitan la síntesis

normal del ADN, conducen a la muerte de la célula, producen mutaciones y
fragmentan el material genético. La consecuencia de que ocurran tales sucesos es
el desarrollo de cáncer, en este caso en la piel.
La LUV-A tiene la peculiaridad de que afecta de manera directa e indirecta, esto es,
posee un doble efecto. El daño indirecto consiste en crear radicales libres,
moléculas muy reactivas que producen una serie de cambios que al final también
dañan al ADN. El poder de penetración de esta luz es tan profundo que no produce
quemaduras, mientras que la LUV-B y la LUV-C penetran las capas más
superficiales de la piel, haciendo evidente su daño por la formación de un proceso
inflamatorio conocido como eritema o enrojecimiento, y también bronceado.

8. Qué pasaría si agregamos al proceso de extracción de ADN, alguno de los

conservantes que hay en el mercado?
9. Qué importancia tiene la extracción del ADN en la ingeniería de alimentos.
RTA/:
10. ¿Qué función tiene el bicarbonato sódico?

R/: La función que cumple el bicarbonato sódico es neutralizar la acidez de la solución

consiguiendo un pH neutro.
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CONCLUSION:

El ADN es una molécula muy compleja y pequeña, por lo cual resulta un poco difícil
poder observarla, sin embargo gracias a la técnica realizada se pudo obtener de
una manera sencilla y rápida, mostrando los resultados esperados porque
pudimos observar una fibra de ADN extraída del hígado de pollo.

REGISTRO FOTOGRAFICO

LICUADO CALDO MOLECULAR PREPARACION CALDO

PREPARACION DE LA MUESTRA PREPARACION DE LA MUESTRA

EXPERIMENTO N° 1 EXPERIMENTO N° 2
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BIBLIOGRAFIA

Bernath, V. (2011). Una verdadera revolución científica. En: ADN, el detector de

mentiras. Debate. España. 06-09.

(Parker. S. 2007) ADN y ARN

Levi, S. Mathern, J. (2004). Precipitación del ADN con alcohol frio. En: Extracción
del ADN. Bio-rad.20.

Biología Molecular y Herencia. Robert A. Wallace, Jack L. King, Gerald P. Sanders.,

1a edición. Editorial