 Principio:

Método colorimétrico, formador del complejo azul de molibdeno, previo tratamiento

acido de las cenizas de la muestra.
Lectura de absorbancia a 700 nm de longitud de onda

 Materiales:

Material básico de laboratorio

 Equipos

Espectrofotómetro CA-L3-ESP-01

 Reactivos

- KH2PO4
- molibdato de amonio
(NH4)6Mo7O2.44H2O
- Formula hidroquinona
C6H6O2
- Formula sulfito de sodio
Na2SO3
- Formula ácido sulfúrico
H2SO4

 Preparación de reactivos:

- Solución patrón de fosforo

Disolver en agua 0,4394 g de KH2PO4 deshidratado y enrazar a 1 L, se tiene

una concentración de 100 ppm. Dilúyase 10 ml de esta solución a 100 ml
obteniendo una concentración de 10 ppm.

- Reactivo 1 (Molibdato de amonio)

El siguiente procedimiento es para un volumen final de 25 ml de reactivo 1.

 1,25 g de molibdato de amonio y 3,75 ml de ácido sulfúrico para preparar un
volumen final de 25 ml de reactivo 1.

En un vaso de precipitación pese 1,25 g de molibdato de amonio y dilúyalo

en 15 ml de agua destilada, una vez disuelto el molibdato de amonio trasvase
a un matraz de 25 ml, selle el matraz utilizando una tapa y no enrace.

En un matraz aforado de 10 ml vierta 3,75 ml de ácido sulfúrico y enrace.

Una vez obtenidas ambas soluciones, añada la última solución al matraz de

25 ml en el que se encuentra la primera y complete hasta el volumen del aforo
(25 ml).

Formula molibdato de amonio

(NH4)6Mo7O2.44H2O

Formula ácido sulfúrico

H2SO4

Si desea preparar otros volúmenes del reactivo 1 puede ayudarse con la

siguiente tabla

Masa de Volumen de Volumen de Diluir el Volumen

molibdato de agua para H2SO4 (ml) H2SO4 hasta final de
amonio diluir un volumen enrace (ml)
(g) molibdato de de (ml)
amonio (ml)
1,25 15 3,75 10 25
5 60 15 40 100
12,5 150 37,5 100 250
25 300 75 200 500
50 600 150 400 1000

- Reactivo 2 (Solución de hidroquinona)

 El siguiente procedimiento es para un volumen final de 25 ml de reactivo 2.

0,125 g de hidroquinona y una gota de ácido sulfúrico para preparar un

volumen final de 25 ml de reactivo 2.

En un vaso de precipitación pese 0,125 g de hidroquinona, dilúyalo en 20 ml

de agua destilada, trasvase a un matraz de aforo de 25 ml y añada gota de
ácido sulfúrico para frenar la oxidación, y enrace.

Formula hidroquinona
C6H6O2

Formula ácido sulfúrico

H2SO4

Si desea preparar otros volúmenes del reactivo 2 puede ayudarse con la

siguiente tabla

Masa de Volumen de agua Gotas de Volumen

hidroquinona para diluir H2SO4 final de
(g) hidroquinona (ml) enrace (ml)
0,125 20 1 25
0,25 40 2 50
0,5 80 4 100
1,25 200 10 250
2,5 400 20 500
5 800 40 1000

- Reactivo 3 (Sulfito de sodio)

El siguiente procedimiento es para un volumen final de 25 ml de reactivo 3.

5 g de sulfito de sodio y una gota para 25 ml de reactivo 3.

 En un vaso de precipitación pese 5 g de sulfito de sodio, dilúyalo en 20 ml de
agua destilada, trasvase a un matraz de aforo de 25 ml y enrace.

Formula sulfito de sodio

Na2SO3

Si desea preparar otros volúmenes del reactivo 3 puede ayudarse con la

siguiente tabla

Sulfito de sodio (g) Volumen de agua para Volumen final de

diluir sulfito de sodio(ml) enrace (ml)

5 20 25
10 40 50
20 80 100
50 200 250
100 400 500
200 800 1000

 Preparación de la muestra:

Pesado de muestra.

Pesar 0,5 g de muestra en caso de ser harina de hueso

Pesar de 1 a 5 g en caso de ser otro tipo de muestra en estado solido
Pesar 25 g de muestra en caso de muestras liquidas

Tratamiento de las muestras

Las muestras deben ser pesadas en capsulas de porcelana, si son liquidas deben
ser secadas y quemadas en una hornilla antes de ser introducidas a la mufla, en caso
de muestras solidas se las debe quemar en una hornilla antes de la incineración.

Una vez secas las muestras se deben calcinar a 550 ºC durante 4 horas

Tratamiento acido
 Enfriar las cenizas y añadir 5 ml de HCl concentrado., a la ceniza y llevar a sequedad
en una hornilla a temperatura baja, dentro una campana de absorción de gases.
Una vez secas añadir 2 ml de HCl concentrado., redisolver las cenizas, calentar si es
necesario, adicionar agua y trasvasar a un matraz aforado de 100 ml., enrazando con
agua destilada.

Filtrar, descartándose los primeros 15 a 20 ml del filtrado.

No olvide realizar el blanco de la misma manera, utilizando una capsula limpia y

realizando el mismo procedimiento.

 Procedimiento experimental:

Cada muestra ingresada para la determinación de fosforo requiere diferentes

diluciones, debido a que cada una de estas tiene diferentes concentraciones de este
mineral, por ello cada muestra es diluida de manera que entre en los puntos
intermedios de la curva de calibración.

La ultima dilución para la lectura de fosforo debe estar en un volumen de 10 ml en

un tubo de ensayo y la máxima cantidad de muestra que se la pondrá es de 7 ml, al
ser un método colorimétrico requiere tres reactivos para que la coloración del tubo
cambie de incolora a una escala de azules.

A esta última dilución se le debe añadir 1 ml de cada reactivo preparado

anteriormente hasta completar los 10 ml de volumen final.

El color de la muestra una vez añadidos los reactivos debe estar preferentemente
entre los puntos 2 y 4 de la curva, es decir su coloración debe ser menor al punto 4
de la curva y superior al punto 2 de la curva, esto para que exista menos error al
momento del cálculo.

En caso de que su tubo pintara un color más azul superando el punto 4 de la curva,
debe volver a diluir la muestra.

En caso de que él tuvo no adquiera un color superior al punto 2 de la curva debe de

igual manera repetir la dilución.
 Cada muestra debe realizarse con su respectivo blanco, y realizar las mismas
diluciones que a la muestra.

Ejemplo

3g--------100 ml

Peso Dilución 1
muestra
--------------------------- 10 ml-------------- 100 ml
Dilución 2
Volumen para
7 ml + 3 ml reactivo------- 10 ml
la lectura

 Curva de calibración:

La curva de calibración se prepara en el rango de 0 a 6 ppm. Utilizando matraces

aforados de 10 ml o tubos de ensayo, en los cuales se añade el estándar con la micro
bureta o pipetas aforadas.

Partiendo de un estándar de 10 ppm. de fosforo se toman las siguientes cantidades:

Número Volumen de Agua Volumen de Volumen de Concentración

solución P (ml.) reactivo (ml) enrase (ml.) (ppm.)
10 ppm. (ml) R1 R2 R3
0 0.0 7.0 1 1 1 10 0.0
1 1.0 6.0 1 1 1 10 1.0
2 2.0 5.0 1 1 1 10 2.0
3 3.0 4.0 1 1 1 10 3.0
4 4.0 3.0 1 1 1 10 4.0
5 5.0 2.0 1 1 1 10 5.0
6 6.0 1.0 1 1 1 10 6.0

Una vez colocada la alícuota de estándar más la cantidad de agua necesaria para
completar 7 ml. se añade 1 ml de solución del reactivo 1, agitando de matera circular.
 Luego agregar 1 ml del reactivo 2, mezclando del mismo modo, finalmente 1 ml del
reactivo 3, agitando también.

Se deja reposar 30 minutos y se realiza la lectura en espectrofotómetro a 700 nm de

longitud de onda. Al cabo de este tiempo.

 Observaciones:
Si la muestra fuera aceite, se debe quemar con MgO en la capsula sobre la hornilla,
añadiendo la muestra poco a poco y conduciendo un blanco paralelamente. (0,1 g de
MgO por gramo de muestra)

Cuando se trata de fertilizantes es aconsejable usar el método de digestión húmeda

con ácido nítrico.
 Cálculos:

Graficar absorbancia, vs concentración (ppm), obteniendo la concentración de la

muestra efectuar el siguiente cálculo.

mg de P/100g=C*10*D1*D2
M
Donde:
C: Concentración de la muestra (ppm=mg/Lt), obtenido a partir de la gráfica
Absorvacia. Vs Concentración.
D1: Dilución de la muestra (opcional, solo si la muestra está concentrada). En el
caso de la harina de hueso la dilución 1 es 500/5=100.
D2: Dilución de la muestra para la lectura, en el caso de la harina de hueso se toma
7 ml. para la lectura y se enrasa a 10 ml. con los reactivos entonces la dilución 2 es
10/7=1.428
M: peso de la muestra (g)

 Referencia bibliográfica:

A.O.A.C., Mét. 3098 y 3100, 14 th. Edic. (1984)USA