Universidad Pedagógica Nacional

Facultad de Ciencia y tecnología, Departamento de química

INFORME DE LABORATORIO N° 1
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE “ROJO DE AZORRUBINA” EN UN BON BON
BUM”
Estudiantes: Andrea Barrero y Karol Suarez.
a
Universidad Pedagógica Nacional. Calle 72 No. 11-86 Bogotá D.C Licenciatura en Química. Métodos de
Análisis Químico I

RESUMEN
La presente práctica de laboratorio se basa en determinar la concentración en unidades de partes por
millos (mg/Kg) de Rojo de Azorrubina que tiene el bon bon bum. Para efectos de cuantificar la
concentración se realiza la calibración del método espectrofotométrico a partir de soluciones patrones
de rojo de Azorrubina de volúmenes conocidos y concentración inicial conocida y se realiza la curva
por regresión lineal. De esta manera se establece el rango de trabajo y se procede a cuantificar la
concentración de la muestra problema. Realizando el tratamiento estadístico para determinar la
incertidumbre de la medida.

OBJETIVOS
• Determinar la longitud onda de máxima absorción y el rango de trabajo para el método
espectrofotométrico.
• Construir la curva de calibración.
• A partir de la calibración, determinar: La ecuación de la línea recta, la incertidumbre de la
medida, los límites de detección y de cuantificación; utilizando el tratamiento de datos
propuestos por las buenas prácticas de laboratorio, GPL.
• Expresar los resultados de o los problemas analizando en la presente practica la ppm (mg de
rojo de azorrubina/ kg de producto) en la muestra comestible y en el producto sin cubierta y
asa.
• Desarrollar conocimientos acerca de la relación entre la cantidad de radiación absorbida por
soluciones y la concentración de la sustancia absorbente en dichas soluciones.
MARCO TEORICO

Espectrofotometría: es el estudio de la interacción entre la radiación electromagnética y la materia,

con absorción o emisión de energía. Se refiere al método cuantitativo del análisis químico, que
utilizan la luz para medir la concentración de sustancias químicas (Millan, 2016).
Espectrofotómetro: es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida
por una solución que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia, la cual se está
analizando (Millan, 2016)..
Análisis espectral: se basa en la detección de absorción de radiación electromagnética a ciertas
longitudes de onda, en relación con los niveles de energía implicados en una translación.

El análisis espectro químico se basa en la naturaleza selectiva de las interacciones de la radiación

electromagnética con la materia. La materia al estar constituida por átomos y moléculas posee los
componentes rotacionales, vibracionales y electrónicas según la siguiente expresión (Millan, 2016).:

𝐸𝑇 = 𝐸𝑒 − + 𝐸𝑣𝑖𝑏 + 𝐸𝑟𝑜𝑡

Las energías vibracionales y rotacionales se dan a nivel de orbital molecular ya que los átomos
concentran su energía en los electrones. Según la mecánica cuántica, estas energías están de manera
cuantizada, de esta forma interacciona con la materia y modifica los contenidos energéticos
dependiendo de la posibilidad de cuantizar la especie. La absorción se da en forma de fotones siempre
y cuando sea equivalente a la diferencia de energía entre los estados energéticos involucrados (Millan
2016).

Los métodos instrumentales son métodos relativos que requieren comparación con soluciones
patrones preparadas, debido a que esto mide la magnitud de una propiedad física del analito la cual
varia linealmente con su concentración (Millan, 2016).

Toda molécula tanto en fase gaseosa como en solución posee una energía cuántica interna compuesta
por las energías electrónicas, vibracional y rotacional (Chang & Banwel, 1977). Las propiedades
espectrales de las moléculas orgánicas dependen del tipo de electrones de valencia, de sus
posibilidades cuánticas de absorción y de la presencia de los grupos cromóforos en ellas (Rao, 1970).
Los electrones sigma (δ) conforman los enlaces simples saturados u orbitales moleculares de enlace
de tipo sigma, mientras que los electrones pi (π) conforman los enlaces múltiples no saturados u
orbitales pi. Estos grupos no saturados reciben el nombre de cromóforos (Millan, 2016).

La aparición de color en algunas sustancias orgánicas está relacionada con la presencia de uno o
varios grupos cromóforos cuyos electrones π son excitados fácilmente por la absorción de radiación
de energía correspondiente (λ especifica) a las posibilidades cuánticas para la transición electrónica
(Millan, 2016).
PROCEDIMIENTO

Mida un volumen para obtener

una solucion de 10ppm del RAZR, Proceda a determinar la longitud
Pese el bom bon bum sin cubierta esta disolucion con la solucion de de onda
sacarosa en un matraz aforado de Determine el rango de trabajo
50,0 ml

Fracturelo, retirele la goma de Calcule los volumenes necesarios

Prepare una solucion patron de para preparar las disoluciones
mascar
1000,0 ppm de RAZR para la calibracion y realice los
Paselo al mortero para ajustes de volumen utilizando la
realice una disolucion 1/10
pulverizarlo solucion de sacarosa

Pese solamente la parte azucarada

libre de goma PREPARACION DE LA CURVA DE
Realice la calibracion del método
CALIBRACIÓN
(entre 8 y 9 gramos)

Colecte el filtrado en un matraz

Disuelva el residuo en agua Luego de haber obtenido los datos Prepare 50,0 ml de un blanco con
volumetrico de 50,0 ml
desionizada de calibración, lea el porcentaje de una solucion de 20% p/v de
Lavando el residuo sobre el papel transmitancia de la disolucion sacarosa y leer el porcentaje de
Filtre a traves de un papel de paso
filtro, completar a volumen con problema transmitancia
rapido
agua destilada

RESULTADOS

Curva espectral
Tabla 1: longitud de onda vs % transmitancia

𝝀 (nm) % A=2-Log(%T)
transmitancia
400 70,6 0,1511
420 71,1 0,1481
440 69,1 0,1605
460 60,8 0,2160
480 48,3 0,3160
500 39,3 0,4056
510 36,1 0,4424
520 35,0 0,4559
530 36,2 0,4412
540 39,3 0,4056
Elaboración propia.
En la siguiente imagen se puede observar, en la curva espectral, la longitud de onda máxima, la cual
corresponde al valor de 520 nm, con un % de transmitancia de 35,0, como lo muestra la tabla 1,
teniendo en cuenta este dato determina la absorbancia, que nos permitirá hallar el rango de trabajo

CURVA ESPECTRAL
80
70
60
% Transmitancia

50
40
30
20
10
0
300 350 400 450 500 550 600
Longitud de onda λ (nm)
Grafica 1: Curva espectral (λ vs %T)

Según la gráfica, se puede determinar que:

Tabla 2. Datos extraídos de la gráfica.
DATOS

λmax (nm) 520

% 𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠𝑚𝑖𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 35,0

Concentración patrón Cp (ppm) 10,0

Rojo de azorrubina

Absorbancia 0,4559
𝐴 = 2 − log %𝑇
Elaboración propia

Rango de trabajo
𝐴 = 0,4559
𝐴
𝑎∗𝑏 = , 𝑠𝑖𝑒𝑛𝑑𝑜 𝑎 ∗ 𝑏 𝑙𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 (𝑚)
𝑐𝑝
 0,4559
𝑎∗𝑏 = = 0,04559
10,00
Según la norma ISO 17025 dice que Amax= 1,00 y Amin= 0,10
𝐴𝑚𝑎𝑥 1,00
Entonces 𝐶𝑀 = = = 21,934𝑝𝑝𝑚
𝑎∗𝑏 0,04559 𝑝𝑝𝑚 −1

𝐴𝑚𝑖𝑛 0,10
𝐶𝑚 = = 0,04559 𝑝𝑝𝑚−1 = 2,193𝑝𝑝𝑚
𝑎∗𝑏

Siendo el rango de trabajo entre las concentraciones (concentración mínima- concentración

Máxima) de 2,193𝑝𝑝𝑚 − 21,934𝑝𝑝𝑚, lo cual se puede observar en la curva de Ringbon, que
relaciona log 𝐶𝑖 con respecto a 1/T:

Tabla 3. Relación 1/T Y log Ci

VP (mL) %T 1/T Log Ci

0.0 100.0 0.0 1 0
1.0 77.5 2.0 1,29 0,321
2.0 60.25 4.0 1,659 0,602
4.0 41.6 8.0 2,386 0,903
5.0 35.0 10.0 2,857 1
7.0 22.05 14.0 4,535 1,146
11.0 9.9 22.0 10,101 1,342
12.0 8.4 24.0 11,904 1,38
13.0 6.4 26.0 15,625 1,414
Elaboración propia.

Grafico 2. Curva de RINGBON (log Ci vs 1/T).

Elaboración propia.

Según la anterior gráfica, se puede determinar que el rango de trabajo estará de 0,602 a 1,146 (log
Ci), el cual permite conocer a que concentraciones es confiable trabajar, en este caso serían
concentraciones mayores que 2ppm y menores de 21 ppm, donde hay mayor cantidad de energía (luz
incidente) que atraviesa la muestra, es decir menor transmitancia, mayor absorbancia
Dicho lo anterior, si al realizar el análisis la muestra tiene una concentración fuera de este rango, el
resultado obtenido no es confiable y será necesario realizar de nuevo el análisis utilizando una
concentración más adecuada para el mismo, con el fin de obtener un resultado más veraz.

Calibración del método

Tabla 4. Datos de absorbancia de una muestra patrón de rojo de Azorrubina a diferentes

concentraciones.
VP 0.0 1.0 2.0 4.0 5.0 7.0 11.0 12.0 13.0
(mL)
%T 100 77.5 60.25 41.6 35.0 22.05 9.9 8.4 6.4
Elaboración propia.

Peso del bon bon bum

8.00043 g

Tabla 5. Curva de calibración. Modelo estadístico para determinar la validez del método.
VP (mL) %T A [𝑅𝐴𝑍𝑅]𝑝𝑝𝑚 X2 𝑌̂ (X-𝑋̅)2 (Y-𝑌̂)2
0.0 94.2 0.026 0.0 0.0 0.030 149.383 1.625𝑋10−5
1.0 77.5 0.111 2.0 4.0 0.118 104.494 4.988𝑋10−5
2.0 60.25 0.220 4.0 16.0 0.206 67.605 2.103𝑋10−4
4.0 41.6 0.381 8.0 64.0 0.381 17.827 3.691𝑋10−8
5.0 35.0 0.456 10.0 100.0 0.469 4.938 1.677𝑋10−4
7.0 22.05 0.656 14.0 196.0 0.644 3.160 1.477𝑋10−4
11.0 9.9 1.004 22.0 484.0 0.996 95.605 7.762𝑋10−5
12.0 8.4 1.076 24.0 576.0 1.083 138.716 5.796𝑋10−5
13.0 6.4 1.194 26.0 676.0 1.171 189.827 1.312𝑋10−5
∑= 2116 771.555 7.405𝑋10−4

Elaboración propia.

Tabla 6. Datos obtenidos del tratamiento estadístico.

𝑋̅ 12.222
A (punto 0.0300
de corte)
B 0.0439
(pendiente)
r 0.999
2
𝑅 0.999
Elaboración propia.
Tabla7. Sumatorias obtenidas del tratamiento de datos
∑ 𝑋2 2116

∑(X − 𝑋̅)2 771.555

∑(Y − 𝑌̂)2 7.405𝑋10−4

Elaboración propia.

Ecuación de la calibración del método:

𝑦 = (0.0439)𝑋 + (0.0300)

Tratamiento estadístico

1.1. Desviación estándar de “Y” respecto a “X”

𝑆𝑦⁄ ∑(Y − 𝑌̂)2

𝑥 =√ 𝑛−2

𝑆𝑦⁄ (7.405𝑋10−4 )
𝑥=√ 7
= 0.011

1.2. Desviación estándar de “a”

∑𝑋 2
𝑆
𝑆𝑎 = ( 𝑥⁄𝑦) √
𝑛 ∑(X − 𝑋̅)2

2116
𝑆𝑎 = (0.011)√ = 6.072𝑋10−3
(9)(771.555)
1.3. Desviación estándar de “b”

𝑆𝑥⁄
𝑦
𝑆𝑏 =
√∑(X − 𝑋̅)2

0.011
𝑆𝑏 = = 3.960𝑋10−4
√771.555

1.4. Incertidumbre de “b” y de “a”

“t” de student según la literatura para 7 grados de libertad es 1.895 al 90% de confiabilidad.
 𝑈𝑎 = (6.072𝑋10−3 )(1.895) = 1.151𝑋10−2
𝑈𝑏 = (3.960𝑋10−4 )(1.895) = 7.504𝑋10−4

Ecuación de la calibración del método con incertidumbres:

𝑦 = (0.0448 ± 7.504𝑋10−4 )𝑋 + (0.0192 ± 1.151𝑋10−2 )

1.5. Límite de detención en “x” y “y”.

𝑆 𝑦𝐿𝐷𝐷 = (0.0300) + 3(0.011) = 0.063 𝑝𝑝𝑚

𝑦𝐿𝐷𝐷 = 𝑎 + 3( 𝑦⁄𝑥 )

(𝑦𝐿𝐷𝐷 − 𝑎) (0.063 − 0.030)

𝑋𝐿𝐷𝐷 = 𝑋𝐿𝐷𝐷 = = 0.752𝑝𝑝𝑚
𝑏 0.0439

1.6. Límite de cuantificación en “x” y “y”

𝑆 𝑦𝐿𝐷𝐶 = (0.0300) + 10(0.011) = 0.140 𝑝𝑝𝑚

𝑦𝐿𝐷𝐶 = 𝑎 + 10( 𝑦⁄𝑥 )

(𝑦𝐿𝐷𝐶 − 𝑎) (0.140 − 0.030)

𝑋𝐿𝐷𝐶 = 𝑋𝐿𝐷𝐶 = = 2.501 𝑝𝑝𝑚
𝑏 0.0439

2. Cuantificación de “rojo de Azorrubina en la muestra problema”

Tabla 8. Datos obtenidos de la muestra problema.

%T A Masa
35.7 0.447 8.0043 g
Elaboración propia.

2.1. Calculo de concentración del bon bon bum respecto a la absorbancia.

(0.447 − 0.030)
𝑋𝑜 = = 9.499 𝑝𝑝𝑚
0.0439

2.2. Desviación estándar del problema.

 𝑆𝑦⁄
𝑥 √1 1 ∑(Y − 𝑌̂)2
𝑆𝑋𝑂 = + + 2
𝑏 𝑚 𝑛 𝑏 ∑(X − 𝑋̅)2

0.015 1 7.405𝑋10−4
𝑆𝑋𝑂 = √1 + + = 0.353 𝑝𝑝𝑚
0.0448 9 (0.0439)2 (771.555)

2.3. Incertidumbre de la muestra problema.

𝑈𝑥0 = (9.499𝑝𝑝𝑚 ) ± (0.353𝑝𝑝𝑚 )(1.895) = 9.499𝑝𝑝𝑚 ± 0.669𝑝𝑝𝑚

2.4. Porcentaje de “Rojo de Azorrubina” en la muestra problema.

𝑚𝑔 1𝑥10−6 𝑘𝑔 100
% 𝑅𝐴𝑍𝑅 = (9.499 ) (0.050𝐿 ) ( )( ) = 5.937𝑥10 −2 %𝑅𝐴𝑍𝑅
𝐿 1 𝑚𝑔 8.0043𝑥10−3 𝑘𝑔

2.5. Porcentaje de “rojo de Azorrubina” en el bon bon bun completo.

𝑚𝑔 1𝑥10−6 𝑘𝑔 100
% 𝑅𝐴𝑍𝑅 = (9.499 ) (0.050𝐿 ) ( )( ) = 2.640𝑥10 −3 %𝑅𝐴𝑍𝑅
𝐿 1 𝑚𝑔 1.7993𝑥10−2 𝑘𝑔

Grafico 3. Recta de calibración regresada para el análisis espectrofotométrico de rojo de azorrubina.

Curva de calibracion para cuantificar el rojo de

1,5 Azorrubina
Absorbancia

1
y = 0,0439x + 0,03
0,5 R² = 0,9995

0
0 5 10 15 20 25 30
Concentraccion de Rojo de Azorrubina (ppm)
Elaboración propia.

ANALISIS RESULTADOS
Para la determinación de concentración de una sustancia es importante conocer su curva espectral que
sirve como parámetro para medir la longitud de onda de máxima absorción, debido a que es en esta
región donde las variaciones de la absorbancia con la longitud de onda son despreciables, lo que
permite tener una relación lineal, por esto se delimita la región de trabajo debido a que la absorbancia
medida en otra región lleva a una desviación de la linealidad. Para el caso del RAZR se calcula una
longitud de onda de máxima absorción de 520nm a partir de una solución de 10.0ppm, presentando
una máxima absorbancia de 0.456 a esta concentración. Las propiedades espectrales de RAZR
depende del tipo de electrones de valencia y de su grupo cromóforo, que es el grupo azoico, a causa
de este grupo cromóforo se presenta el color rojo en la sustancia dado a que sus electrones π son
excitados por la absorción de radiación a una longitud de onda máxima de 520nm y pasa en la banda
de absorción a π* antienlazante, como se representa en la imagen 1. Por otro lado, el colorante RAZR
presenta grupos aromáticos que también contienen características en la absorción debido a los
electrones π que están deslocalizados, estas transiciones electrónicas suceden desde los electrones del
anillo aromático a los electrones π* antienlazantes.

Imagen 1. Transición electrónica del grupo azoico. Elaboración propia.

La calibración del método permitió relacionar la ecuación de la recta con la longitud de onda máxima
y su concentración bajo 9 datos que se usaron para ello, de esta manera se permite hacer referencia a
la muestra problema del bon bon bum. Por otro lado, de los datos obtenido de la calibración del
método se puede analizar, que “b” que representa la pendiente e indica la sensibilidad del método, da
un valor de 0.0439 indicando la relación de la variación de la señal asociada a la concentración de
RAZR dando un valor óptimo; el parámetro de 𝑅2 (coeficiente de determinación) da 0.999 indicando
la linealidad de la recta de regresión “y” sobre “x” es decir, la recta indica como varía la absorbancia
cuando se cambia la concentración de RAZR, de esta manera a mayor pendiente “b” se tiende a
disminuir el intercepto “a” (0.0300) y a mejorar la precisión del análisis. A partir de los datos
obtenidos se puede calcular la desviación estándar respecto a la pendiente “b” y al punto de corte “a”
registrándose valores de 3.960𝑋10−4 y 6.072𝑋10−3 respectivamente y de estos datos se pueden
estimar los intervalos de confianza del corte y de la pendiente. El límite de detección (LDD) calculado
en el eje “y” es de 0.063 y en el eje “x” de 0.752 ppm e indica la concentración que produce señal y
es significativamente diferente que la señal del blanco; y el límite de cuantificación (LDC) calculado
para el eje “y” es de 0.140 y para el eje “x” es de 2.501ppm y representa el límite inferior de
concentración para mediciones de cuantificación que sean de manera precisa. Finalmente, la curva
realizada de calibración permite analizar datos de muestras problemas utilizando una ecuación que se
acomoda a las variaciones de las diferentes concentraciones.

Obtenida la curva de calibración del método analítico se procede a determinar la concentración de

RAZR o colorante carmoisina que está presente en la muestra de bon bon bum de la empresa
colombiana S.A. a partir de la transmitancia registrada en el equipo Uv-visible. La transmitancia
obtenida es de 35.7% y el cálculo de absorbancia da un valor de 0.447, debido a la relación directa
que tiene la absorbancia con la concentración y a la ecuación obtenida de la calibración del método
es posible calcular la concentración del RAZR en el bon bon bum dando un valor de 9.499ppm,
posterior a ello se realiza los cálculos correspondientes para hallar incertidumbre y porcentaje de rojo
de azorrubina en la muestra trabajada (8.0043g) y en bon bon bum completo (17.9930g). De esta
manera se compara los valores obtenidos con la resolución 10593 de 1985 del ministerio de salud que
regula el uso de colorantes en consumo alimenticio, para el RAZR o carmoisina la norma indica que
el consumo máximo no debe pasar de 300mgkg, de esta manera se está dando cumplimiento a la
norma debido a que los valores obtenidos en la muestra de bon bon bum y en el bon bon bum completo
𝑚𝑔 𝑚𝑔
son 5.937𝑥10 −2 𝑘𝑔 y 2.640𝑥10−3 𝑘𝑔 .

CONCLUSIONES
La calidad de los resultados en el laboratorio esta dada por la calibración de un método, este esta
directamente relacionado con las características de los resultados de la absorción y de la concentración
del rojo de azorrubina obtenidos experimentalmente con exactitud y reproducibilidad, de esta forma
la calibración responde a una norma generar para análisis químicos. Es decir, un método analítico
debe arrojar datos que involucren errores aleatorios, que se evidencian a partir de las desviaciones
estándar o de la incertidumbre de la medida, esta propiedad se pudo evidenciar al aplicar el método
analítico a la muestra problema del bon bon bum y poder hallar un estimado de su concentración real.
Cabe destacar que se debe tener en cuenta parámetros que generan señales intermitentes de fondo que
no permiten tener medidas con total exactitud. De esta manera es posible hacer una comparación con
lo establecido en la resolución y dar cuenta que la empresa cumple con los parámetros que indica el
máximo consumo del RAZR. Estas lecturas de transmitancia se pueden obtener gracias a la presencia
de los electrones π en el grupo azoico y en los grupos aromáticos que contiene la molécula de RAZR
de igual manera al obtener un rango de trabajo optimo y una longitud máxima de absorción.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

• Banwell, C. (1977). Fundamentos de espectroscopia molecular. Madrid.

• Chang, R. (1977). Principios básicos de espectroscopia. Madrid.
• Resolución 10593. (1985). "Por la cual se adiciona la Resolución No. 10593 de 16 de julio
de 1985, que regula el uso de Colorantes en los alimentos para consumo humano".
• Millan, F. (2016). Libro de espectroscopia Uv-visible. Capitulo I. Radiación
electromagnética e interacción con la materia.
• Rao, C. (1977). Espectroscopia ultravioleta y visible. Madrid.