UNIDAD ACADÉMICA DE SALUD Y BIENESTAR

CARRERA DE MEDICINA

Realizado por
Carlos Benítez.
Fernanda Galarza Álvarez.
Paula Orellana.
Dayana Rivera Tello.
Dayana Valarezo Ibáñez.
Docente
BQ.F. Freddy Castillo Solano. Mg
Cátedra
Biología molecular.
Curso
Segundo “B”

Septiembre - Febrero
2018
 Replicación, reparación del DNA y telomeros

1. ¿Qué significa que la replicación sea semiconservadora?, ¿cómo se

demostró esta propiedad de la replicación en células bacterianas y células
eucariotas?

De acuerdo con la propuesta de Watson y Crick se considera que cada uno de los
dúplex hijos debía consistir en una cadena completa heredada del dúplex parental y
una cadena completa sintetizada de nueva cuenta, es decir el dúplex descendiente
contiene una cadena de la estructura parental, y una cadena nueva.
Este tipo de replicación se demostró tanto en células procariotas como eucariotas.
Mathew Meselson y Franklin Stahl, en 1957 sus estudios se basaron en el uso de
bacterias con isotopos de nitrógeno pesado (15N) y ligero (14 N).
 Primero cultivaron bacterias en un medio que contenía N15 en forma de
cloruro de amonio, de modo que las bases nitrogenadas del DNA de las
células solo contenían el isotopo pesado de nitrógeno.
 Después los cultivos de bacterias pesadas se lavaron para liberarlas del
medio antiguo y se incubaron en un medio fresco que contenía N14, que
luego se removieron a intervalos crecientes durante varias generaciones.
 Se extrajo el DNA de las muestras de las bacterias y se sometieron a
centrifugación de equilibrio de gradiente de densidad, El DNA se mezcló
con una solución concentrada de cloruro de cesio, donde se centrifugó hasta
que las moléculas de la cadena de DNA entren en equilibrio de cuando a su
densidad.
 Por último se pudo observar que el N14 que era ligero quedo en la
superficie, siendo la cadena vieja , mientras que el N15 quedo en la
profundidad del envase considerándose como la cadena nueva, y la cadenas
hibrida de N14 y N15 quedo intermedio de las dos cadenas formando la
cadena completa teniendo una cadena vieja y una cadena nueva .

N14

N14 y N15

N15
En 1960 Herbert Taylor cultivaron células de mamíferos para realizar la replicación con
bromodesoxiuridina, un compuesto que se incorpora en el DNA en lugar de la
timidina.
 Primero se tiene el cromosoma de las células que contiene solo timidina.
 Después de la replicación un cromosoma se conforma de dos cromatides
 Posteriormente a dos ciclos de replicación con bromodesoxiuridina, unos de los
cromosomas presento dos cadenas con bromodesoxiuridina, y la otra cromatide
era un hibrido que consistía en una cadena que tenía bromodesoxiuridina y una
cadenas con timina.

Cromosoma DNA

Cadena con timidina

Cromatides

La cromatides tiene una cadena con BrdUy la otra con timidina.

Después de dos replicaciones se obtienen cadenas unas con BrdU y las otras con BrdU y
tidima.

2. ¿Por qué no existen cadenas pesadas en la parte superior de los tres tubos
de centrifugación de la figura 13-3a?

De acuerdo al experimento de Meselson – Stahl, se considera que la densidad de una

molécula de DNA es directamente proporcional al porcentaje de átomos De N15 y
N14. Por lo tanto si la replicación es semiconservadora es de esperar que la densidad
de las moléculas del DNA disminuya durante el cultivo en el medio que contiene
N14 y no en el N15 por lo que no se observan N15 en la parte superior del envase.
 3. ¿Cómo es posible obtener mutantes cuyos defectos se localizan en genes que
se requieren para la actividad esencial como la replicación del DNA?

Es posible ya que se obtiene mutantes sensibles a la luz en la que su deficiencia solo es

ineficiente a temperaturas elevadas que se las conoce como temperatura no
permisible, cuando estas crecen a una temperatura permisible la proteína mutante puede
funcionar de manera adecuada para realizar su actividad requerida y las células puedan
continuar su crecimiento y división (1).

4. Describa los sucesos que ocurren en el origen de la replicación durante el

inicio de la replicación en las células de levadura. ¿Cuál es el sentido de que
la replicación sea bidireccional?
1. Al origen de replicación lo une un complejo proteico llamado ORC.
2. Los factores permisivos se unen al ORC para ensamblar un complejo
proteico de pre-RC que es permisivo, las cuales las proteínas Mcm2 y
Mcm7 interactúan entre sí para formar un complejo examérico MCM que
tiene actividad de helicasa. Cada uno de os orígenes contiene un doble
complejo examérico MCM.
3. El ensamblado de la fase previa a RC marca un sitio en el genoma como el
origen potencial de replicación, la activación de las cinansas fosforilizan el
complejo MCM. Una de esas cinasas es una cdk que suprime la función de
nuevos complejos de replicación, cada origen solo puede activarse una vez
por ciclo celular.
4. Las proteínas MCM se mueven con la horquilla de replicación, estas
proteínas se desplazan del DNA pero permanecen en el núcleo, las proteínas
MCM no pueden volver a relacionarse con el origen de replicación ya
utilizado (1).
5. ¿Qué hace que las moléculas de DNA que se muestran en la figura 13-7a
sean incapaces de estimular la polimerización de nucleótidos por medio de
la DNA polimerasa I?, ¿qué propiedades de una molécula de DNA permiten
que sirva como plantilla para la incorporación de nucleótidos por medio de
la DNA polimerasa I?
 No puede sintetizar en una doble hélice lineal porque aunque tenga el extremo
hidroxilo no tiene la plantilla, en una cadena sencilla circular tiene el DNA
plantilla pero el extremo hidroxilo no.
Para que se pueda actuar el DNA se necesita de una cadena de DNA plantilla y
una cadena iniciadora en la cual se pueda agregar los nucleótidos, la cadena de
doble hélice lineal cumple ambos requerimientos (1).
6. Describa los mecanismos de acción de las DNA polimerasas que operan en
las dos cadenas de DNA plantilla y el efecto que éste tiene en la síntesis de la
cadena retrasada en comparación con la cadena adelantada.

Las DNA polimerasas son enzimas encargadas de sintetizar nuevas cadenas de DNA
durante la replicación o reparación de la molécula de DNA.
Todas las DNA polimerasas necesitan dos requerimientos básicos: “una cadena de dna
plantilla para copiar y una cadena iniciadora en la cual pueden agregarse los
nucleótidos”
La DNA Polimerasa III es la que participa en la replicación del DNA bacteriano, y la
síntesis se da de 5’ a 3’.

La cadena que se sintetiza de modo continuo se conoce como

CADENA ADELANTADA, debido a que lo hace conforme avanza la
CADENA horquilla de replicación.
ADELANTADA La cadena adelantada, cuya síntesis comienza en el origen de
replicación también la inicia una PRIMASA, (sintetiza una cadena
corta de ARN)

La cadena que se sintetiza de forma DISCONTINUA, se llama

CADENA RETRASADA, debido a que cada fragmento debe
esperar a que las cadenas progenitor se separen y expongan un
fragmento. Y se sintetiza alejándose de la horquilla de
replicación.

La cadena retrasada también actúa una Primasa (cebador) de

CADENA ARN que pone los nucleótidos necesarios, siendo estos en
RETRASADA algunas ocasiones erróneo .Luego la DNA Polimerasa I quita el
cebador y empiece a poner los nucleótidos correspondientes.
 Durante la síntesis de la cadena retrasada en la replicación del
DNA aparecen pequeños fragmentos llamados Okasaki
(fragmentos de DNA) que son unidos por la DNA ligasa.

7. Compare la función de las DNA polimerasas I y III en la replicación

bacteriana.
Todas las polimerasas actúan como exonucleasas, estas trabajan de manera
conjunta.
La DNA polimerasa III actúa como parte de una maquinaria de replicación
llamada holoenzima de DNA polimerasa III o también llamado replisoma.
La DNA polimerasa I son capaces de degradar polímeros de DNA en el extremo
de la molécula, actividad exonucleasa de 3´ - 5´ y de 5´ - 3´ además de su
actividad de polimerización (1).
8. Describa las funciones de la DNA helicasa, proteínas SSB, pinza beta, DNA
girasa y DNA ligasa durante la replicación en las bacterias.
 DNA helicasa: desenrolla el dúplex y con la ayuda de ciertas proteínas
separara las cadenas.
 Proteína SSB: evitan que la hebra de DNA monocatenaria vuelva a
enrollarse.
 Pinza β: mantiene la polimerasa relacionada con la plantilla de DNA.
 DNA girasa: libera la tensión mecánica que se crea durante la
replicación.
 DNA ligasa: une los fragmentos de oksaki en una cadena continua (1).
9. ¿Cuál es la consecuencia de que el DNA de molde para la cadena retrasada
forme un asa sobre sí misma como se muestra en la figura 13-13a?
10. Porque se síntesiza una cadena de DNA de forma continua y la otra cadena
de manera discontinua?
11. ¿Por qué las dos actividades de exonucleasa de la DNA polimerasa I
difieren entre sí?, ¿cuáles son sus funciones respectivas en la replicación?
 12. ¿Cuál es la principal diferencia entre las bacterias y los eucariotas que le
permite a éstos replicar su DNA en un tiempo razonable?
13. Realice una grafica de la replicación del DNA y donde se detallen las
enzimas y demás proteínas que participan en este proceso molecular.
14. Compare los sucesos de la reparación de la escisión de nucleótidos y
reparación de la escisión de nucleótidos.

“Diagnostic Utility of telomerase length testing in a hospital-based setting”

1. Que función cumplen los telomeros

Los telómeros definen los extremos de los cromosomas y su función es de

preservar la integridad del genoma; que se componen de secuencias de
TTAGGG que están obligados por proteínas especializadas. La longitud
del telómero (TL) se acorta durante la replicación del ADN y, en un
umbral crítico, el telómero (s) cuando es más corto puede activar una
respuesta al daño del ADN como muerte celular o una detención del ciclo
celular permanente, conocido como senescencia celular (2).

2. Mencione que patologías están relacionadas con el “Sindrome de

acortamiento de los telomeros”.
3. ¿Qué mutaciones están relacionadas con el inicio del Sindrome Pulmonar
Idiopatico?

Las mutaciones en los genes esenciales de la enzima telomerasa, de TERT,

la telomerasa transcriptasa inversa, mutaciones de la proteína C surfactante, Genes de
mucina MUC5AC y MUC5B, el componente ARN de telomerasa (también conocido
como TERC), son la causa más común de
la FPI (2).

4. ¿Porque es importante identificar pacientes que tengan estas mutaciones?

Es importante que se identifique a estos pacientes ya que permiten determinar

algunos métodos ideales para la medición de TL en la práctica clínica tomando en
cuenta que son susceptibles a toxicidades potencialmente mortales de los agentes
dañinos del DNA y otras terapias cito tóxicas.
Es importante también porque atravez de los métodos usados se puede establecer
que la edad media de mutaciones fue de 41% y 54% de los hombres.
Ninguno de estos pacientes tenía TL encima del percentil 50 ajustada a la edad, lo
que indica un valor predictivo negativo del 100% para identificar una mutación
clínicamente significativo.
Su sensibilidad más alta es en pacientes que son menores de 40 años.

5. Que técnica utilizan los investigadores para evaluar el tamaño de los

telomeros, y como funciona?
Generalmente se mide la longitud de los telómeros por FISH cuantitativa (Q-
FISH) en núcleos en interfase, tanto en cortes de tejidos (Telomapping) como en
células de la sangre o cualquier otro tipo de célula capaz de crecer o de pegarse a
una placa de cultivo (HT Q-FISH).
La técnica de Q-FISH es una hibridación “in situ” en la que los telómeros se
marcan con una sonda telomérica fluorescente. Cada sonda telomérica reconoce
un número fijo de repeticiones teloméricas. Por ende, la intensidad de la
fluorescencia que emite cada telómero es directamente proporcional a la
longitud del mismo. Los valores de fluorescencia telomérica se pueden
transformar en valores de longitud telomérica para cada señal telomérica
individual, de tal modo que es posible medir la longitud telomérica media así
como el porcentaje de telómeros cortos de una población celular.
¿Qué es el TAT? La Tecnología de Análisis de Telómeros TAT de Life Length
comprende dos protocolos validados que permiten la determinación de la
longitud de los telómeros a nivel individual, tanto de muestras celulares (HT Q-
FISH) como de tejidos (Telomapping).
La tecnología de Life Length es la única tecnología de análisis de telómeros a
gran escala que permite la cuantificación de la abundancia de telómeros
críticamente cortos. Es la única compañía en el mundo que puede ofrecer a cada
persona una estimación de su edad biológica, basada en el porcentaje de
telómeros excesivamente cortos medidos en sangre como indicador para el
organismo global.
 ¿Qué es el HT Q-FISH? La técnica HT Q-FISH se utiliza principalmente para
cuantificar la longitud del telómero de células mononucleares (PBMC) o células
blancas (WBC) de sangre periférica, pero puede usarse con cualquier tipo de
célula que pueda ser adherida a una placa de cultivo (fibroblastos,
queratinocitos, hepatocitos, neuronas, etc.).
Las otras técnicas de alta capacidad que permiten determinar la longitud de los
telómeros, como PCR (reacción en cadena de la polimerasa) o métodos basados
en citometría de flujo (flow citometry), solamente pueden determinar la longitud
telomérica media de una muestra (ni siquiera célula a célula), siendo incapaz de
medir la abundancia de telómeros cortos, los cuales se han identificado como
causantes de enfermedad.

6. De acuerdo con el artículo es útil la PCR como método para detectar el

tamaño de los telomeros?
7. Cual fue la conclusión a la que se llegó en la investigación?

Bibliografía

1. Karp, G. (2014). Biología celular y molecular. 7th ed. [Madrid]: McGraw-Hill.

2. Jonathan K., Vidya S., Margaret A, Amy E., Susan E, Clifford M., et al. PNAS
PLUS. Diagnostic utility of telomere length testing in a hospital-based setting.
2017. 1-8.

3. JosepArgemi. MediciòndelaLongitudTelometica. LABCO[Internet].2013.[citado

01 Nov 2018];28(1);1-7. Disponible en:
https://www.mundolab.com/media/PDF/telomeros.pdf