GUÍA DE PRÁCTICAS

TEMA: Determinación del contenido de proteína método KJENDAHL

Práctica Nº: 5

1. OBJETIVO: Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser

transformado a través de un factor en proteína.

2. INTRODUCCIÓN:
La proteína ocupa el lugar determinante en la alimentación de los animales domésticos. La
proteína del forraje contribuye a la formación de las albúminas del cuerpo del ternero en
crecimiento para la formación de las albúminas en la leche de los animales en lactancia.

En zootecnia se denomina proteína húmeda a la suma de uniones nitrogenadas no albuminosos

(amidas), que están representadas principalmente por aminoácidos como la úrea y los alcaloides
El contenido de proteína en los forrajes se determina según la cantidad de nitrógeno total (Método
Kjedahl.

Fundamento
El método se basa en la destrucción de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado,
formándose sulfato de amonio que en exceso de hidróxido de sodio libera amoníaco, el que se
destila recibiéndolo en: ácido bórico formándose borato de amonio el que se valora con ácido
sulfúrico.
a) El sulfato de amonio en medio ácido es resistente y su destrucción con desprendimiento de
amoniaco sucede solamente en medio básico.
b) El amoniaco que se desprende se calcula mediante la absorción de este con una solución de
ácido sulfúrico de baja concentración.
3.
REACTIVOS :
EQUIPOS , MATERIALES
 Balanza analítica  Ácido sulfúrico concentrado
 Equipo Kjedahl  Ácido sulfúrico 0.1 N
 Tubo de digestión de proteína.  Hidróxido de sodio 40%
 Equipo de titulación  Sales catalizadora de proteína
 Pipetas 10 ml y 1 ml
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 Peras de succión  Solución Indicadora de proteína (rojo de

 Gradilla para tubos de proteína metilo- verde- bromo cresol)
 Agua destilada

4. CONDICIONES DE SEGURIDAD: cumplir con las normas de seguridad para laboratorio, y las
normas de seguridad que se deban tomar para las diferentes prácticas

5. MÉTODO: TÉCNICA DE ANALISIS:

Parte I Digestión de la muestra

1. En la balanza analítica, pesar en un tubo de proteína cerca de 0.5 gr, de forraje seco,
molido y desengrasado
2. Colocar en el tubo de proteina la muestra pesada y 1.5 gramos de catalizador (mezcla de sales:
sulfato de potasio, oxido de mercurio y sulfato de cobre)
3. Agregar 1mL de agua destilada y 15 mL de H2SO4 concentrado
4. Proceder al calentamiento colocando los tubos en la unidad de calentamiento del equipo Kjendahl
para la digestión programada a una temperatura de 420ªC durante 60 minutos, transcurrido el
tiempo dejar enfriar a temperatura ambiente, retirar los tubos y colocarlos en la gradilla respectiva

Parte II Destilación del amoniaco

1. Colocar el tubo de proteina con la muestra digerida (sulfato de amonio) en la unidad destilación
Kjendahl
2. Presionar el botón (start) para iniciar el paso del vapor por el sistema el mismo equipo agregara
automáticamente agua destilada y 20 mL de hidróxido de sodio 40%
3. Se recoge el destilado (120 a 150 mL) en un matraz el mismo que contiene 10 mL de ácido
bórico al 2% más 0.5 mL de indicador de proteina formando una solución de borato de amonio
4. El destila de borato de amonio se titula con ácido sulfúrico 01 N la titulación indica que parte
del amoniaco queda absorbido en el ácido sulfúrico.
5. Calcular el porcentaje del contenido de proteina bruta en relación con el peso de forraje seco,
por la fórmula:
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𝑚𝐿 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 𝑑𝑒 𝐻2𝑆𝑂4 ∗ 𝑁 𝑑𝑒𝑙 𝐻2𝑆𝑂4 ∗ 1.4

𝑁𝑖𝑡𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑜 (%) =
Donde: 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

N=Normalidad de ácido sulfúrico (0.1N).

1.4 = Equivalente- gr del Nitrógeno
El contenido de proteina se determina multiplicando el porcentaje de nitrógeno por el
coeficiente 6.25

El coeficiente (6.25) es: la proteina en el forraje tiene un promedio 16% de Nitrógeno

consecuentemente el 1% de Nitrógeno forma 100/16 = 6.25 ( Siendo el coeficiente de conversión
del Nitrógeno en la proteina)

𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 (%) = %𝑁𝑖𝑡𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑜 ∗ 6.25

EQUIPO DE PROTEINA
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TEMA: Procedimiento para determinar materia grasa o extracto etéreo

Método Soxhlet

Práctica Nº: 3

1. Objetivo: Determinar la concentración de la materia grasa cruda o extracto etéreo libre.

2. Introducción:

La grasa es un componente que nunca debe faltar en las raciones de los animales es la principal
fuente energía. Esto condiciona la capacidad de captar mucho oxígeno para la combustión y
emanar gran cantidad de energía calórica

Por ausencia de grasa se produce avitaminosis en los animales afecta la reproducción, el exceso
de grasa en las raciones afecta a la digestión y absorción de grasa

a. Fundamento

Una cantidad previamente homogeneizada y seca, medida o pesada del alimento se somete a una
extracción con éter de petróleo o hexano. Posteriormente, se realiza la extracción total de la
materia grasa libre por Soxhlet. Este método muy aplicado para análisis masivos y permite al
mismo tiempo determinar la grasa en algunas muestras

3.
REACTIVOS :
EQUIPOS , MATERIALES
 Balanza analítica  Hexano o éter de petróleo
 Desecador
 Estufa
 Dedales de extracción
 Papel filtro para hacer los dedales
 Probetas de 100 ml
 Espátulas metálicas
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 Algodón
 Equipo de soxlet

4.

5. CONDICIONES DE SEGURIDAD: cumplir con las normas de seguridad para laboratorio, y las
normas de seguridad que se deban tomar para las diferentes prácticas

6. MÉTODO: TÉCNICA DE ANALISIS:

1- Preparación de la muestra: En muestras con mucha humedad homogeneizar y secar a 102.5 ºC en

estufa de aire considerando el tipo de muestra.
2- Moler y pasar por tamiz de malla de 1 mm
3- Pesar en duplicado 2 a 5 gramos de muestra preparada en el dedal de extracción o papel filtro
previamente pesado y tapado con algodón.
4- Poner el matraz de extracción en el sistema Soxhlet el dedal en el tubo de extracción y adicionar
el solvente al matraz.
5- Extraer la muestra con el solvente por 6 a 8 horas a una velocidad de condensación de 3-6
gotas/seg.
6- Una vez terminada la extracción retirar el dedal eliminar el exceso de solvente en la campana
hasta que no se detecte olor a éter o hexano
7- Secar el dedal en estufa a 102.5 + 2°C por 2 horas, enfriar en desecados y pesar.
8- Calcular el porcentaje de contenido de grasa en relación con el peso de forraje seco, por la
fórmula:
(𝑚2 − 𝑚1) − (𝑚3 − 𝑚1) ∗ 100
𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎 (%) =
(𝑚2 − 𝑚1)

Donde:

m1=Peso del dedal tarado vacío en gr.

m2=Peso del dedal con la muestra seca en gr.
m3=Peso del dedal con la muestra desengrasada en gr.

7. BIBLIOGRAFÍA: consultada Formato APA

 Official Methods of Analysis. A.O.A.C. 15 U.S.A. (2000). 4.2.-

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8. Equipo Soxlet