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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MODALIDAD: INVESTIGACIÓN.
TEMA:
AUTORES:
TUTOR:
CO -TUTORA:
GUAYAQUIL – ECUADOR
2018
iii
iv
v
vi
INFORME ANTIPLAGIO DEL SISTEMA URKUND
vii
viii
ix
x
xi
xii
AGRADECIMIENTO
xiii
xiv
a nuestros tutores ya que, más que tutores son amigos, los cuales nos
ayudaron a hacer esta tesis de maravilla, y sacar buena calificación.
xv
ÍNDICE GENERAL
RESUMEN...................................................................................................... xxiii
INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 1
EL PROBLEMA. ................................................................................................. 4
Justificación. ................................................................................................... 4
Objetivos. ........................................................................................................ 4
Hipótesis ......................................................................................................... 5
xvi
I.2.5. La toxina Shiga. ............................................................................... 13
I.3. Tratamiento............................................................................................. 24
Glosario ............................................................................................................ 31
xvii
II.6. Materiales y Equipos. ............................................................................ 34
DISCUSIÓN...................................................................................................... 42
Conclusión .................................................................................................... 43
Recomendaciones ........................................................................................ 44
BIBLIOGRAFÍA................................................................................................. 45
ANEXOS. .......................................................................................................... 52
xviii
ÍNDICE DE GRÁFICOS
Ilustración 1.Daño renal provocado por las toxinas Stx1 y Stx2 administradas
a la misma dosis en primates no humanos ......................................................... 14
xix
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 5. Proteínas efectoras vía sistema de secreción tipo III no LEE. ......... 18
Tabla 11. Condición higiénica de los locales clasificados por categorías según
la escala de Likert ................................................................................................. 41
xx
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo 16. Croquis de los sitos referenciales de venta de carne bovina molida
del mercado Caraguay.......................................................................................... 73
Anexo 19. Incubación de placas con agar biliado rojo neutro cristal violeta. . 74
Anexo 20. Incubación de colonias características en tubos con agar TSI ..... 75
xxi
Anexo 21.Tubo con agar TSI recientemente sembrados ................................ 75
Anexo 23. Tubos con agar tripticasa soya a las 24 de incubación ................. 76
Anexo 24. Kit BBL Crystal para la identificación del serotipo O157:H7 .......... 77
Anexo 25. Paneles de BBL Crystal después del periodo de incubación ........ 77
Anexo 27. Nivel de confianza y validez del biotipo para Escherichia coli según
el programa de análisis BBL Crystal. ................................................................... 78
xxii
RESUMEN
Palabras claves: Escherichia coli, toxina Shiga, carne bovina molida, Sistema
de Identificación BBL Crystal.
xxiii
ABSTRACT
Keywords: Escherichia coli, Shiga toxin, grounded beef meat, I.D System BBL
Crystal.
xxiv
INTRODUCCIÓN
E. coli O157:H7 fue reconocido por primera vez en 1982 en Estados Unidos,
como causante de un brote alimentario en hamburguesas, produciendo diarrea
sanguinolenta severa; desde entonces, la mayoría de las infecciones reportadas
provienen de comer carne molida poco cocida. El índice de prevalencia de este
microorganismo en países como Francia y Estados Unidos es menor del 1%, en
comparación con otros países como Egipto, Estambul y México que sobrepasa el
2% (Tanaro et al, 2016).
1
Otra patología que afecta al 5 % de los infectados, es el Síndrome Urémico
Hemolítico (SUH), un tipo de insuficiencia renal que en el 4% de los casos
detectados ha ocasionado la muerte, mientras que aquellos que logran
recuperarse experimentan fallas renales, complicaciones neurológicas y otras
secuelas por mucho tiempo (Michanie, 2013). Bravo et al (2013), menciona que
este microorganismo forma parte de la flora intestinal del ganado bovino, siendo
éste su principal reservorio, encontrándose en mayor frecuencia en terneros que
en ganado adulto.
2
calidad microbiológica de la carne molida que se expende en el mercado
Caraguay de la Ciudad de Guayaquil, uno de los principales mercados del sur de
la ciudad.
3
EL PROBLEMA.
Justificación.
Objetivos.
Objetivo general.
Objetivos específicos.
4
Hipótesis
Variable de estudio.
Indicador: Presencia
5
CAPÍTULO I.
REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
I.1. Carne.
6
I.1.1. Composición química de la carne.
I.1.2. Consumo.
1 Australia 93
2 Estados Unidos 91.1
3 Israel 86
4 Argentina 84.7
5 Uruguay 82.9
7
Los principales contaminantes de la carne son los agentes microbiológicos, ya
que además de provocar su degradación, ocasionan enfermedades a quienes la
consumen, pudiendo destacarse entre ellos los siguientes patógenos:
Salmonella spp, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Streptococcus,
Clostridium perfringens Clostridium botulinum, Escherichia coli O157:H7,
Campylobacter spp, Listeria spp (Romeu, 2012).
I.2.Escherichia coli.
Escherichia coli se describió por primera vez en 1885 por el pediatra alemán
Theodore Escherich. Fue nombrada inicialmente como “Bacterium coli
commune”, pero en 1919 fue renombrada con el nombre actual en honor a su
descubridor (Romeu, 2012).
Phylum Proteobacteria.
Clase Gammaproteobacteria.
Orden Enterobacteriales.
Familia Enterobacteriaceae.
Género Escherichia.
Especie Escherichia coli (Romeu, 2012).
8
I.2.1. Características generales del grupo coli.
9
Tabla 2. Características de los grupos de Escherichia coli causantes de diarrea
(Rodríguez, 2002).
Factores de
Grupo Síntomas clínicos Epidemiología
patogenicidad
Niños menores de
ST y LT,
ECET Diarrea aguda acuosa dos años y diarrea
CFA
del viajero
Niños y adultos que la STX,
SUH, diarrea sangre,
adquieren por comer A/E,
ECEH dolor abdominal, fiebre,
carne cruda o mal Intimina,
vómito
cocida
Diarrea con moco y
sangre o diarrea acuosa, Niños menores de seis Invasividad
ECEI
también se presenta meses Plásmido de 140MDa
cuadro disentérico
Diarrea aguda, Niños menores de A/E, BFP
ECEP dolor abdominal, seis meses hasta dos Plásmido EAF de 50-
vómito, fiebre baja años 70MDa
Fimbria AAFI y II
Diarrea líquida, verde EASTI
Recién nacidos y
con moco, sin sangre, Proteínas Pet y Pic
ECEA niños menores de
diarrea persistente OMP
dos años
hasta 20 días Plásmido de 60 MDa
Citotoxina
Diarrea acuosa sin Fimbria F1845
ECAD Niños de 1 a 5 años
sangre OMP
LT= toxina termolábil CFA= factor de colonización antigénico
EAF= factor de adherencia de EPEC STX= toxina shiga
ST= toxina termo estable BFP= pili con forma rizada
OMP= proteína de membrana exteARN EAST= toxina ST de cepas enteroagresivas
10
responde a etiologías no infecciosas (Departamento de Salud de la Florida,
2017). Existe un tipo de insuficiencia renal llamada síndrome urémico hemolítico
(SUH) la cual suele comenzar a medida que la diarrea está mejorando.
Aproximadamente el 2-7% de las infecciones por E. coli O157: H7, desarrollan
SUH
11
Tabla 3. Serotipos y serogrupos más comunes de E. coli no O157:H7
(Rodríguez, 2002)
12
I.2.3. Período de incubación.
La incubación puede variar entre doce y sesenta horas (López & Guevara,
2004). La transmisión de animales a humanos puede darse durante visitas a los
parques, zoológicos y las granjas (Martínez, 2015), mientras que entre humanos
ocurre frecuentemente en el hogar, centros de atención infantil y asilos a través
del consumo de alimentos contaminados (Washington State Department of
Health, 2009).
Escherichia coli O157:H7 es capaz de producir toxinas shiga como las Stx1 y
la Stx2. Los genes de ambas toxinas se encuentran localizados en la secuencia
de bacteriófagos atemperados, y aunque son estructural y funcionalmente
similares (Stx1) a las producidas por la Shigella dysenteriae tipo I, su homología
aminoacídica (Stx2) con este patógeno es del 58%. Las toxinas Shiga son un
tipo de Holo toxinas de tipo AB5, formada por seis subunidades proteicas; una
de tipo A y cinco de tipo B. La subunidad A (32 kDa) está encargada de la parte
catalítica de la toxina, mientras la subunidad B es el responsable de la unión con
las células eucariotas mediante la interacción con su receptor de membrana
específico: la globotriaosilceramida > Gb3 < (Martínez, 2015).
13
La conformación espacial y la tasa de disociación entre la toxina y los
glicolípidos es diferente entre las dos shiga toxinas (Martínez, 2015). Según
Vivanco la Stx2 es 1000 veces más tóxica que la Stx1, capaz de producir mayor
mortalidad y daño hepático a dosis menores que la provocada por la Stx1 (2011)
(Ilustración 1).
Ilustración 1.Daño renal provocado por las toxinas Stx1 y Stx2 administradas a la
misma dosis en primates no humanos (Martínez, 2015).
14
Si un individuo ingiere alimentos contaminados, la toxina shiga de este
patógeno entra en contacto con las células endoteliales, actuando sobre los
glóbulos blancos de la submucosa, generando una respuesta inflamatoria y un
aumento de la expresión del receptor (Gb3). Una vez que la subunidad B se
encuentra unido al receptor de membrana, la subunidad A de la Stx se incorpora
a la célula por pinocitosis, en donde se reducirá a un fragmento denominado A1
(Vivanco, 2011).
15
posterior eliminación de las microvellosidades intestinales una vez que la
bacteria haya acumulado la actina polimerizada en el polo apical. Estos locus
están conformados por 5 operones, de las cuales el LEE1, LEE2 y LEE3
codifican para un sistema de secreción de tipo III “SST3” (Cabañas, 2014).
LEEse divide en tres partes: el sistema transportador de proteínas efectoras, las
proteínas que llevan a cabo las funciones de adhesión y las proteínas efectoras
(Martínez, 2015).
16
Tabla 4. Proteínas efectoras sintetizadas por el sistema de secreción tipo III
(Martínez, 2015).
17
Proteasas: Se han descritos distintos tipos de proteasas, tales como: la
catalasa/peroxidasa (KatP), la metaloproteasa (StcE) o la serin proteasa
(EspP), esta última promueve la hemorragia, ya que inhibe el factor de
coagulación V.
Tabla 5. Proteínas efectoras vía sistema de secreción tipo III no LEE (Martínez,
2015).
Proteína Función
EspJ Inhibir la fagocitosis por macrófagos.
EspK Mejorar la colonización intestinal.
Inducir la formación de fibras de estrés tras la infección de las
EspM células huésped y alterar la arquitectura de la monocapa
epitelial.
NleA Inhibir la secreción proteica de la célula.
NleB1
Suprimir el sistema inmune bloqueando la vía NF-kB.
NleB2
NleC, Suprimir el sistema inmune y la respuesta inflamatoria
NleD bloqueando las vías NF-kB y JNK.
NleE Inhibir la respuesta inmune vía NF-kB.
NleF Facilitar la colonización intestinal.
18
genéticos móviles, como son: plásmidos, transposones, islas de patogenicidad y
bacteriófagos (Martínez, 2015).
19
los receptores de membrana bacteriana, para penetrar su ácido nucleico al
interior de la célula, provocando el desarrollo intracelular de sus componentes
fágicos y la liberación de la progenie viral (Martínez, 2015).
20
Liberación de las partículas fágicas: Se produce la lisis y muerte celular,
en esta etapa los bacteriófagos utilizan diversas enzimas como las
lisozimas o lisinas para producir la ruptura de la membrana celular, de
modo que se liberan los nuevos viriones (Martínez, 2015).
21
I.2.10. Inducción del ciclo lítico.
La inducción del ciclo lítico puede darse dependiendo de las condiciones tanto
ambientales como intracelulares en la que se encuentre la célula diana. La vía
más frecuente está relacionada con factores que estimulan en el microorganismo
mecanismos de defensa capaz de promover la supervivencia celular en
condiciones de daño del ADN (Martínez, 2015).
La proteína RecA forma parte fundamental de esta vía, debido a que está
encargada de la recombinación homóloga, por lo tanto, cuando se encuentra
activa, ejerce la función de proteasa y cataliza la degradación del Cl cortando el
vínculo alanina-glicina de esta, generando que los niveles de Cro aumenten
proporcionalmente a medida que disminuye la presencia de Cl, dando inicio de
esta manera el ciclo lítico (Martínez, 2015). Estos factores son:
22
y los genes de lisis. Cuando el profago Stx induce su ciclo lítico, comienza la
transcripción de las proteínas de lisis y durante este proceso se produce la
expresión de los genes Stx, aumentando los niveles de toxina en el medio
intracelular (Martínez, 2015).
23
observado que, comparando la reducción de densidad poblacional en unidades
logarítmicas entre fagos Stx y cepas ECEH, las cepas ECEH disminuyen más
rápido su densidad poblacional e incluso hasta no detectarlos, a diferencia de los
fagos Stx que reducen lentamente su carga poblacional (Martínez, 2015).
I.3. Tratamiento.
I.4. Prevención.
24
Lavar las manos con agua y jabón luego del contacto con mascotas o
después de ir al baño.
Evitar el consumo de alimentos en lugares con animales que pueden
ser portadores (Antman et al, 2014).
I.5. Epidemiología.
En Asia hay pocos reportes de infecciones por ECEH O157, salvo en Japón a
partir del brote masivo con más de 10.000 afectados en 1996, posiblemente por
falta de sistemas de vigilancia. En Australia las infecciones por ECEH no-O157,
fundamentalmente O111: NM, son más frecuentes que las de O157. Respecto a
Latinoamérica, en Colombia se comunicó en forma preliminar que E. coli
O157:H7 fue el agente causal del 7,2% de los casos de diarrea y que el 6,5% del
ganado era portador de este patógeno. En Chile y Argentina, ECEH O157 y no-
O157 está asociado a casos de diarrea y SUH. Durante el año 2002, se informó
el primer caso que vincula a E. coli O157:H7 con episodios de diarrea
sanguinolenta o SUH en Uruguay. En Paraguay a partir del año 2001 se
comenzaron a notificar casos de diarrea asociados a E. coli O157:H7, después
de la implementación de un programa regional de control de las enfermedades
emergentes y reemergentes. Estos hallazgos demuestran la importancia de las
enfermedades asociadas a ECEH en la Latinoamérica. (Rivas et al, 2008).
25
Los países en los cuales hay mayor incidencia de infecciones por ECEH,
sobretodo O157:H7, son Nueva Zelanda, Argentina y EE.UU. Se cree que es
debido a los hábitos alimenticios, tales como el consumo de cantidades
abundantes de carne (Argentina) o el abuso de la comida “fast-food” (EEUU). Sin
embargo, en los últimos años están proliferando las infecciones asociadas al
consumo de vegetales (tabla 7). Casos como los sucedidos en Suecia en 2005 y
Canadá en 2006 se debieron a que las hortalizas (lechugas y espinacas) fueron
irrigadas con agua de un arroyo cercano contaminado con heces de ganado
provocando un brote alimenticio dando como resultado cinco muertos y 205
enfermos (FDA, 2017).
26
Tabla 6. Brotes asociados con Escherichia coli O157:H7 por el consumo de
alimentos contaminados en Estados Unidos (FDA, 2017).
Carne molida
8 26 2 5
de res
2009 Galletas
30 72 0 10
preenvasadas
9 Carne de res 23 0 2
5 Queso 38 0 1
2010
16 Carne de res 21 0 1
9 Lechuga 58 0 3
2011 4 Bolonia 14 0 0
3 Avellanas 8 0 0
Verduras de
hoja pre
2012 5 33 0 2
empaquetada
s
Ensalada
2013 4 33 0 2
fresca picada
Carne molida
2014 4 12 0 0
de res
2 Alfalfa 11 0 0
Carne de
2016 vaca, ternera
5 11 0 1
y productos de
bisonte
2017 12 Mantequilla 32 0 9
SHU= Síndrome Urémico Hemolítico
27
I.6. Sistema BBL Crystal de Identificación.
I.7.1. Reproducibilidad.
28
analizados por los métodos actuales de identificación de los laboratorios, el
sistema BBL Crystal ID comunicó correctamente el 96,7% (289), entre ellos 16
casos donde se comunicaron dos o tres organismos y se necesitó un análisis
suplementario para conseguir un resultado válido (BD, 2016).
El incubador donde están colocados los paneles debe estar humectado para
prevenir la evaporación del líquido de los pocillos durante la incubación. El nivel
recomendado de humedad es el 40 – 60%. Los paneles, después de la
inoculación, deben solamente incubarse mirando hacia abajo (las ventanas más
grandes hacia arriba; la etiqueta mirando hacia abajo) para maximizar la
efectividad de los sustratos. Las colonias deben tomarse de una placa de agar
sangre, tal como agar de soja Trypticase con hematíes de oveja al 5%. El uso de
una placa agar MacConkey es también aceptable. Los sistemas de identificación
BBL Crystal NO están indicados para utilizarlos directamente con las muestras
clínicas (BD, 2016).
29
I.8. Mercado Caraguay.
30
Glosario
Toxina: Toda sustancia tóxica de origen biológico que provoca una intoxicación
en un organismo. Generalmente, se refiere a aquellas sustancias procedentes de
microorganismos que desencadenan una respuesta inmunitaria (Doctissimo,
2017).
31
CAPÍTULO II.
MATERIALES Y MÉTODOS
II.2. Metodología.
32
Flujograma de proceso para el aislamiento e identificación de O157:H7
Homogenización de la
muestra
Siembra de colonias
caracteristicas en
agar bilis rojo cristal
violeta
Pruebas bioquímicas
Siembra de colonias
presuntivas E. coli en
agar soya tripticasa
Identificación
mediante el Sistema
BBL Crystal
Análisis de resultados
33
II.3. Tipo de investigación.
Mandil.
Micropipetas.
Mascarilla.
Tubos de ensayo.
Beaker.
Cajas petri.
Varilla de vidrio.
Algodón.
Probeta.
Guantes.
Espátula.
Cofia.
Fiola.
Espátula.
34
II.6.3. Equipos.
II.6.4. Reactivos
Agar Citrato
Simmons.
Medio utilizado para pruebas bioquímicas. BD
Agar Urea
Agar Motilidad
35
II.7. Procedimiento.
Utilizando una fuente de luz y por contraste se realizaron las lecturas de las
muestras incubadas, las cuales fueron registradas e interpretadas con el fin de
obtener el “número de perfil”. Este número luego fue ingresado en un programa
propio del sistema BBL Crystal, permitiendo la identificación de la cepa en
cuestión.
36
CAPITULO III.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Escherichia coli
Porcentaje Porcentaje
Frecuencia Porcentaje
válido acumulado
,0 19 19,0 19,0 19,0
Válido
1,0 81 81,0 81,0 100,0
Total 100 100,0 100,0
37
Tabla 8. Presencia de otros microorganismos en las muestras analizadas
N=100
Escherichia coli 81(81%)
Otros microorganismos 19(19%)
klebsiella pneumoniae 11(11%)
klebsiella oxytoca 1(1%)
Proteus mirabilis 5(5%)
Providencia morgani 2(2%)
38
Ilustración 7. Presencia del serotipo E. coli O157:H7 carne bovina molida.
90
81%
80
70
60
50
40
30
20
10
0%
0
Escherichia coli Escherichia coli O157:H7
39
Ilustración 8. Evaluación de la condición de expendio de la carne molida.
100 93%
90
80
70
60
50
40
30
20
7%
10
0
Refrigeracion (4°C) Temperatura ambiente
.
Locales N= 10
Refrigeración (4°C) 7%
Temperatura (28ºC) 93%
40
Tabla 11. Condición higiénica de los locales clasificados por categorías según la
escala de Likert (Anexo 2)
Nº positivos para
Categoría Nº de visitas
E. coli
Excelente 0 (0%) -
Muy bueno 31 (31%) 24 (7%)
Bueno 60 (60%) 50 (30%)
Regular 9 (9%) 7 (0.63%)
Malo 0 (0%) -
41
DISCUSIÓN
42
CAPITULO IV.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Conclusión
43
Recomendaciones
44
BIBLIOGRAFÍA
ANMAT. (2017). Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) Todo Lo Que Ud. Debe
Saber. Recuperado el 5 de noviembre de 2017 de
http://www.anmat.gov.ar/consumidores/suh.pdf
Antman, J., Geffner, L., Pianciola, L., Rivas, M. (2014). SÍNDROME URÉMICO
HEMOLÍTICO (SUH) EN ARGENTINA. Recuperado el 2 de enero del 2018
http://www.msal.gob.ar/images/stories/bes/graficos/0000000799cnt-2014-
08_Informe-SUH.pdf
45
http://www.repositorio.usac.edu.gt/1639/1/Tesis%20Med%20Vet%20Celso%20H
oracio%20Dabroy%20Palomo.pdf
Esquivel, P., Lifschitz, V., Lösch, L., Medina, M., Pato, A., Cacciamani, A., Merino,
L. (2010). Caracterización molecular de aislamientos de Escherichia coli
productores de diarrea en niños y adultos de la ciudad de Corrientes, Argentina.
Rev Panam Infectol. 12(3) ,17-21. Recuperado el 10 de enero del 2017 de:
http://www.revistaapi.com/wp-content/uploads/2014/03/API_03_10_C.pdf
Eymann, A., Coccia, P., Raddavero, C., Ferraris, V., Ramírez, J. (2016).
Prevalencia y evolución clínica del síndrome urémico hemolítico típico entre
hermanos. Recuperado el 22 de diciembre del 2017 de
http://www.sap.org.ar/docs/publicaciones/primero/2016/CB_Eymann_anticipo_31
-10-16.pdf
46
Fernández, R, Bentancor, L., Mejías, M., Panek, A., Cabrera, G., Exeni, R., &
Palermo, M. (2011). Actualización en el tratamiento del síndrome urémico
hemolítico endémico: Patogénesis y tratamiento de la complicación sistémica
más grave de las infecciones por Escherichia coli productor de toxina
Shiga. Medicina (Buenos Aires), 71(4), 383-389. Recuperado en 09 de enero de
2018, de http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0025-
76802011000600019&lng=es&tlng=es.
Fernández, R., Rodríguez, C., Rodríguez, A., Gómez, F. (2003). Escherichia coli
como causa de diarrea infantil. Rev Cubana Pediatría. 75(3). Recuperado el 10
de enero del 2017 de: http://bvs.sld.cu/revistas/ped/vol75_3_03/ped10303.htm
Forbes. (2015). Los países que consumen más carne al año. Recuperado el 3 de
septiembre del 2017 de: https://www.forbes.com.mx/los-paises-que-consumen-
mas-carne-al-ano/
Jure, M., Condori M., Pérez, P., Terrazzino, G., López, Campo, A., Zolezzi G.,
Chinen I., Rivas M., & Catillo M. (2015). Aislamiento y caracterización de
Escherichia coli O157 en productos cárnicos bovinos y medias reses en la
provincia de Tucumán, Rev Argent Microbiol, (47) 2,125-131.Recuperado el 16
de enero de 2017 de http://www.elsevier.es/es-revista-revista-argentina-
microbiologia-372-articulo-aislamiento-caracterizacion-escherichia-coli-o157-
S0325754115000486
López, A., Cepeda, A., Herrera, A., Martin de Santos, M. (2012). Informe del Comité
Científico de la Agencia Española de Seguridad Alimentaria y Nutrición (AESAN)
sobre medidas de prevención y recomendaciones aplicables para evitar posibles
infecciones alimentarias por cepas de Escherichia coli
47
verotoxigénicos/productores de toxinas Shiga/enterohemorrágicos
(VTEC/ECEH/EHEC). Revista del comité científico. 6(0), 71-99. Recuperado en 1
de enero de 2016, de:
http://www.aecosan.msssi.gob.es/AECOSAN/docs/documentos/seguridad_alime
ntaria/evaluacion_riesgos/informes_comite/ESCHERICIA_COLI2.pdf
Méndez, C., Vergaray, G., Morante, H., Flores, G., Gamboa, R. (2013). Aislamiento
y caracterización de Escherichia coli O157:H7 a partir de carne molida de bovino
en Lima-Perú. Revista Peruana de Biología, 20(2), 159-164. Recuperado el 01
de marzo del 2018, de
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1727-
99332013000200008&lng=es&tlng=es.
48
Pérez, J. (2015). En ocho provincias se concentra el mayor consumo de cárnicos.
Recuperado el 13 de diciembre del 2017 de:
http://www.revistalideres.ec/lideres/consumo-carnicos-ecuador.html.
Reyes, N. E., Talavera, Rojas, M., Varela, Guerrero, J. A., Barba, León, J.,
Gutiérrez, Castillo, A., Alonso, Fresán, U. (2013). Prevalencia y resistencia a
antibióticos de Escherichia coli O157: H7 aislada de canales de bovinos
sacrificados en rastros del altiplano central mexicano. Revista mexicana de
ciencias pecuarias. 4(2), 235-242. Recuperado el 9 de diciembre de 2016, de
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2007112421300020
0009&lng=es&tlng=es.
49
Recuperado el 15 de noviembre del 2017 de
http://tesis.repo.sld.cu/625/1/Beatriz_Romeu_Alvarez.pdf
Segundo, A,. Hernández, E,. López, O,. Torres, O. (2010). Los bacteriófagos como
una alteARNtiva en el tratamiento de enfermedades infecciosas bacterianas
(Fagoterapia). Recuperado el 20 de diciembre del 2017 de
http://www.redalyc.org/html/579/57916078003/
Tanaro, J.D., Piaggio M.C., Gasparovic, A.M., Badaracco V.A., Tesouro, R.,
Kesselman, D., Indart, N.S., De Gracia, L., Procura F., Vitón, M., Molina D., y
Rivas, M. (2016). Escherichia coli O157:H7 Productor de toxina Shiga aisladas
de muestras de agua relacionadas a establecimientos pecuarios de engorde a
corral. Ciencia, Docencia y Tecnología. 6(6)., 138-155. Recuperado en 9 de
diciembre de 2016, de
http://www.pcient.uner.edu.ar/index.php/Scdyt/article/view/269/264
Trueba, G., Garcés, V., Colman, R.,, Seymour, M., Vogler, A., Keim, P. (2013).
Escherichia coli O157:H7 in Ecuador: animal reservoirs, yet no human disease.
50
Recuperado el 13 de enero del 2017 de:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23473224
51
ANEXOS.
52
Anexo 1. Tabla de los resultados del análisis microbiológico para E. coli en el mercado Caraguay de la ciudad de Guayaquil.
TSI SIM
Pico/ Fondo Producción Movilidad Indol Producción UREA Bacteria
Muestras de de SH2
Citrato Identificada
Nº
Gas SH2 Simmons
1 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
2 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
3 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
4 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
5 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
6 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
7 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
8 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
9 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
10 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
53
11 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
12 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
13 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
14 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
15 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
16 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
17 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
18 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
19 Alcalino/Ácido + + + + - + + Proteus
mirabilis
20 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
21 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
22 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
23 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
54
24 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
25 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
26 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
27 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
28 Ácido/Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
29 Alcalino/Ácido + + + + - + + Proteus
mirabilis
30 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
31 Ácido/ Ácido + - + - + - + Klebsiella
pneumoniae
32 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
33 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
34 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
35 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
36 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
55
37 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
38 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
39 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
40 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
41 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
42 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
43 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
44 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
45 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
46 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
47 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
48 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
49 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
56
50 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
51 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
52 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
53 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
54 Alcalino/Ácido + + + + - + + Proteus
mirabilis
55 Alcalino/Ácido - - + + + - + Providencia
morgani
56 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
57 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
58 Alcalino/Ácido - - + + + - + Providencia
morgani
59 Alcalino/Ácido + + + + - + + Proteus
mirabilis
60 Ácido/ Ácido + - + - + - + Klebsiella
oxytoca
61 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
62 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
57
63 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
64 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
65 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
66 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
67 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
68 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
69 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
70 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
71 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
72 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
73 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
74 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
75 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
58
76 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
77 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
78 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
79 Alcalino/Ácido + + + + - + + Proteus
mirabilis
80 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
81 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
82 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
83 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
84 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
85 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
86 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
87 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
88 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
59
89 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
90 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
91 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
92 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
93 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
94 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
95 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
96 Ácido/ Ácido + - + - - - + Klebsiella
pneumoniae
97 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
98 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
99 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
100 Ácido/ Ácido + - - + + - - Escherichia
coli
60
Anexo 2. Lista de chequeo para la inspección de los sitios de venta.
61
Mercado: Caraguay
Local Nº 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Las instalaciones se encuentran en Si Si Si Si Si Si Si Si Si Si
buenas condiciones y limpias
Los operarios utilizan mandil No Si Si Si Si Si Si Si Si Si
visualmente limpio
Los materiales y equipos se No Si Si Si Si Si Si Si Si Si
encuentran visualmente limpios.
La carne molida se mantiene en Si No No No No No No No No No
refrigeración
El personal que manipula la carne No Si Si No No No No Si No No
molida utiliza guantes y/o
mascarilla
TOTAL 2 4 4 3 3 3 3 4 3 3
Escala Likert: Excelente = 5, Muy bueno = 4, Bueno = 3, Regular = 2, Malo = 1
62
Anexo 3. Tabla de resultados según el sistema BBL Crystal.
63
52 4464646171 0,9992 Escherichia coli
53 4464446171 0,9957 Escherichia coli
56 4464646171 0,9992 Escherichia coli
57 5424444171 0,9997 Escherichia coli
61 4464644171 0,9995 Escherichia coli
62 4464446171 0,9957 Escherichia coli
63 4464646171 0,9992 Escherichia coli
64 4464446171 0,9957 Escherichia coli
65 4464646171 0,9992 Escherichia coli
66 4464444171 0,9998 Escherichia coli
67 4664666571 0,9994 Escherichia coli
68 4664646161 0,9992 Escherichia coli
69 4424444171 0,9698 Escherichia coli
70 4464446171 0,9957 Escherichia coli
71 4464646171 0,9992 Escherichia coli
72 4464444171 0,9998 Escherichia coli
73 4464646171 0,9992 Escherichia coli
74 4464444171 0,9998 Escherichia coli
75 4464647171 0,9995 Escherichia coli
76 4464446171 0,9957 Escherichia coli
77 4424646171 0,9998 Escherichia coli
78 4464446171 0,9957 Escherichia coli
80 4464446171 0,9957 Escherichia coli
81 4464446171 0,9957 Escherichia coli
82 4464444171 0,9998 Escherichia coli
83 4464444171 0,9998 Escherichia coli
84 4464444171 0,9998 Escherichia coli
85 4464646171 0,9992 Escherichia coli
86 4464446171 0,9957 Escherichia coli
87 4424446171 0,9957 Escherichia coli
88 4464446171 0,9957 Escherichia coli
89 4464444171 0,9998 Escherichia coli
90 4464444171 0,9998 Escherichia coli
91 4464444171 0,9998 Escherichia coli
92 4464446171 0,9957 Escherichia coli
93 4464446171 0,9957 Escherichia coli
94 4464646171 0,9992 Escherichia coli
95 4464446171 0,9957 Escherichia coli
97 4464444171 0,9998 Escherichia coli
98 4664666571 0,9994 Escherichia coli
99 4464444171 0,9998 Escherichia coli
100 4464444171 0,9998 Escherichia coli
Promedio 0,9974
64
Anexo 4. Tabla bioquímica de identificación de microorganismo más comunes
(Carpio, 2017).
ONPG = o-Nitrofenil-β-D-Galactopiranósido
ODC = Ornitina decarboxilasa
LCD = lisina decarboxilasa
SH2 = Gas sulfhídrico
TDA/FDA: triptófano desaminasa / fenilalanina desaminasa
VP = Voges-Proskauer
+ = positivo
- = negativo
V = variable
65
Protocolo de trabajo para la preparación de medios de cultivo
66
Anexo 8. Preparación de agar SIM
67
Anexo 11. Preparación y siembra de la muestra.
Prueba de motilidad: -
1. Tomar una colonia aislada sospechosa de ser Escherichia coli con un asa
estéril.
2. Introducir sobre el centro del tubo con medio de movilidad y formar una
línea de inoculación, hasta una tercera parte del medio.
3. Incubar de 24-48 horas y observar si presenta enturbiamiento.
68
Producción de indol: Incorporar 2 gotas de reactivo de Kovacs por la pared
interna del tubo (la reacción es inmediata). La formación de un halo rosado es
indicativa de reacción positiva.
Prueba de citrato:
Prueba de Urea.
1. Sacar las tapas de la bolsa. Una vez sacadas de la bolsa, las tapas
cubiertas deben utilizarse en el plazo de 1 hora.
2. Tome un tubo de inóculo y etiquételo con el número de muestra.
3. Utilizando una técnica aséptica, con un asa de cultivo estéril, tome una
muestra de la cepa aislada en agar soya tripticasa.
4. Suspenda las colonias en un tubo de fluido de inóculo BD BBL Crystal
para organismos entéricos/heces.
5. Vuelva a taponar el tubo y agítelo en un Vortex durante aproximadamente
10–15 s.
6. Tome una base y marque el número de muestra en la pared lateral.
7. Vierta todo el contenido del fluido de inóculo en el área objetivo de la
base.
69
8. Sostenga la base con ambas manos y mueva el inóculo suavemente de
un lado para otro a lo largo de las pistas hasta que se hayan llenado
todos los pocillos. Haga retroceder cualquier líquido sobrante del área
objetivo y coloque la base en la parte superior de un banquillo.
9. Alinee la tapa de forma que el extremo marcado de la tapa esté en la
parte superior del área objetivo de la base.
10. Apriete hasta que perciba una ligera resistencia. Coloque el pulgar en el
borde de la tapa hacia la parte media del panel en cada lado y apriete
simultáneamente hasta que la tapa encaje en su lugar (tiene que
escuchar dos “clics”).
11. Coloque los paneles inoculados en las bandejas de incubación. El tiempo
de incubación para los paneles es de 18–20 h a 35–37 °C.
12. Después del período recomendado de incubación, saque los paneles de
la incubadora. Todos los paneles deben leerse hacia abajo (las ventanas
más grandes arriba; la etiqueta mirando hacia abajo) utilizando una
fuente de luz.
13. Consulte la tabla de resultados de las reacciones (Anexo 15).
14. Usar el cuaderno de informes BD BBL Crystal E/NF para registrar las
reacciones.
15. A cada resultado del análisis con un resultado positivo se le asigna un
valor de 4, 2, o 1, correspondiendo a la fila donde está ubicado el
análisis. Se asigna un valor de 0 (cero) a cualquier resultado negativo.
Después se suman los números (valores) resultantes de cada reacción
positiva en cada columna. Se genera un número de 10 dígitos; éste es el
número de perfil.
70
16. El número de perfil resultante y los resultados del análisis fuera de línea
(indol y oxidasa) deben introducirse en un computador en el que se haya
instalado el libro de códigos electrónico del sistema BD BBL Crystal ID,
para obtener la identificación
Sitios de
venta de
carne molida
71
Anexo 15. Tabla de resultados para la interpretación de las reacciones
bioquímicas (BD, 2016).
72
Anexo 16. Croquis de los sitos referenciales de venta de carne bovina molida
del mercado Caraguay SM =Sitio de Venta
73
Anexo 18. Homogenización de
la muestra en agua peptonada.
74
Anexo 20. Incubación de colonias características en tubos con agar TSI
75
Anexo 22. Tubo de agar TSI a las 24
horas de incubación.
76
Anexo 24. Kit BBL Crystal para la identificación del serotipo
O157:H7
77
Anexo 26. Panel de identificación BBL Crystal a las 24 horas de
incubación
Anexo 27. Nivel de confianza y validez del biotipo para Escherichia coli según
el programa de análisis BBL Crystal.
78
Anexo 28. Incorrecta manipulación de la carne molida en el mercado
Caraguay previo a la venta.
79
Anexo 30. Carne molida expuesta a la intemperie en el Mercado Caraguay
80