MACROMOLECULAS I.

Pedro L. Beltrán, María J. De Arcos, Álvaro J. Palacio, Carlos F. Rubio.

Estudiantes IV semestre Universidad del Atlántico.
pedroluisbeltran22@gmail.com, palacioalvaro@gmail.com, majodearcoz@gmail.com

Resumen: en esta experiencia de laboratorio se empleó la técnica de cromatografía en capa

fina para separar y diferenciar dos monosacáridos, puntualmente, la glucosa y la fructosa.
Para ello se requirió de una placa cromatográfica donde se marcaron tres puntos, los dos
primeros correspondientes a cada azúcar y el tercero fue una mezcla entre la glucosa y la
fructosa. Con la exposición de la placa a los rayos de luz ultravioleta se pudo determinar los
factores de retención para cada compuesto y su posterior análisis.

Palabras claves: azucares, cromatografía, macromoléculas, factor de retención.

Abstract: in this lab chromatography technique he was used to separate thin layer and
differentiate two monosaccharides, promptly, glucose and fructose. To do so it required a
chromatographic plate where three points are scored, the first two for each sugar and the third
was a mixture of glucose and fructose. With the exposure of the plate to ultraviolet light rays
could be determined retention factors for each compound and subsequent analysis.

1. Introducción elementos carbono, hidrogeno, oxigeno y

Las estructuras bioquimicas y los procesos
de las celulas vivas implican un alto grado
de organización de tales sistemas
complejos, pero que es muy inferior al de los
organismos vivos. Las grande moleculas (a
menudo llamadas macromoleculas) como
las que se encentran en las proteinas
pueden prepararse bioquimicamente
uniendo sinteticamente un gran numero de
moleculas de tamaño ordinario.
Su biosintesis y reacciones dependen en
parte de las enzimas (que tambien son
grandes moleculas), que catalizan de forma
muy especifica las reacciones de las
macromoleculas. La mayoria de las
macromoleculas organicas estan
compuestas principalmente por lo
nitrogeno.
En general para este experimento se
utilizaron macromoleculas como la fructosa,
sacarosa, glucosa, lactosa y maltosa que
pueden ser determinadas por la tecnica de
cromatografia en capa fina.
La cromatografia en capa fina (Thin layer
chromatography, TLC) continua siendo la
tecnica de analisis de mezclas mas versatil,
facil de emplear y economica de uso en el
laboratorio. Se han encontrado gran
numero de aplicaciones con tratamientos
sencillos de la muestra analizada, como en
analisis y producion de farmacos, industria
quimica, toxicologia ambiental, quimica de
alimentos, analisis de aguas, cosmetica,
fitoquimica, entre otras.
La TLC, hace parte de una gran familia de
tecnicas cromatograficas entre las que se
encuentran la cromatografia en columna
(CC), la de gases (GC) y la cromatografia
liquida de alta presion (HPLC) como las
mas populares. Las tecnicas
cromatograficas constituyen una
herramienta fundamental en los laboratorios
analiticos y de investigacion por lo que su
conocimiento es trascendental relevancia.
Entre otras cosas la TLC permite determinar
el grado de pureza de un compuesto,
comparar muestras y realizar el
seguimiento de una reaccion.
La muestra a analizar se deposita cerca de
un extremo de una lámina de plástico o
aluminio que previamente ha sido
recubierta de una fina capa de adsorbente
(fase estacionaria). Entonces, la lámina se
coloca en una cubeta cerrada que contiene
uno o varios disolventes mezclados
(eluyente o fase móvil). A medida que la
mezcla de disolventes asciende por
capilaridad a través del adsorbente, se
produce un reparto diferencial de los
productos presentes en la muestra entre el
disolvente y el adsorbente.
La relación entre las distancias recorridas
por el soluto y por el eluyente desde el
origen de la placa se conoce como Rf, y
tiene un valor constante para cada
compuesto en unas condiciones
cromatográficas determinadas (adsorbente,
disolvente, tamaño de la cubeta,
temperatura, etc.).
La mayor parte de las placas de
cromatografía llevan un indicador
fluorescente que permite la visualización de
los compuestos activos a la luz ultravioleta.
El indicador absorbe la luz UV y emite luz
visible. La presencia de un compuesto
activo en el UV evita que el indicador
absorba la luz en la zona en la que se
encuentra el producto, y el resultado es la
visualización de una mancha en la placa
que indica la presencia de un compuesto.
2. Objetivos
 Emplear la técnica de cromatografía
de capa fina para separar e
identificar monosacáridos de uso
común como la fructosa y la glucosa.
 Aplicar de manera correcta la técnica
de cromatografía de capa fina.
 Calcular y emplear los factores de
retención (Rf) para diferenciar cada
una de las azucares empleadas.
3. Metodología y procedimiento.
Para la siguiente práctica enfocada en la
separación de monosacáridos por
cromatografía de capa fina fue necesario el
uso de una placa cromatográfica, a la cual
se le dibujaron 3 puntos con lápiz que
señalizaban en lugar en que las diferentes
muestras se iban agregar y observar su
comportamiento durante la fase móvil.
Los monosacáridos utilizados para esta
práctica fueron la glucosa y sacarosa
además de un mix de estos dos, las tres
sustancias anteriormente mencionadas se
diluyeron en agua y por medio de un capilar
se agregaron en los puntos señalizados en
la placa, el orden de agregación fue
fructosa, glucosa y por último el mix de
estas dos.
 que la placa estuvo totalmente seca al
utilizar los rayos UVE.

Imagen 1. Estructuras orgánicas de la glucosa y

fructosa.

Para la preparación de la fase móvil fue

necesario el uso de acetonitrilo y agua en
una proporción de (85:12 v/v), esta se
agregó a un beaker de 20 mL, se tapó con
un vidrio reloj y se dejó en reposo por 30min
aproximadamente, esto para que el beaker Imagen 3. Marcas reveladas de cromatografía en
se saturara con la mezcla de solventes. presencia de luz ultravioleta.

las machas se dibujaron a una distancia fija

dese el origen que concuerdan con cada
una de las muestras aplicadas, la primera
de glucosa, la segunda de fructuosa y la
tercera corresponde a la fusión de estas dos
azucares. Así mismo, estas manchas se
señalaron con un lápiz, tal como se muestra
a continuación:

Imagen 2. Técnica de cromatografía en capa fina.

La placa se coloca dentro del beaker y se

retira antes que la solución llegue al
extremo del papel. La placa de
cromatografía al ser hidrofílica forma una
película delgada de agua que la recubre y
deja deslizar la fase orgánica (acetonitrilo).
Los azucares son retenidos por la fase
acuosa adherida al papel y arrastrados por
la fase orgánica móvil. Cada azúcar avanza Imagen 4. Placa cromatográfica empleada en la
en una longitud proporcional al experiencia de laboratorio.
desplazamiento de la fase orgánica, los
Por último, se realiza la determinación de
desplazamientos se pudieron observar por
los factores de retención para cada una de
medio del uso de rayos UVE, cabe resaltar
las azucares empleadas. La fórmula
utilizada para determinar el Rf (relación de - Aplicación insuficiente de la glucosa
frentes) se muestra a continuación. y la fructosa en el punto de referencia
con el capilar.
Distancia recorrida por el azúcar
Rf =
Distancia recorrida por el disolvente - Humedad en el beaker cuando se
introdujo la placa cromatográfica.
Las longitudes obtenidas se encuentran en
la siguiente tabla. - Errores humanos y aleatorios al
momento de sacar la placa
Fructosa Glucosa Mix cromatográfica del beaker e impedir
Longitud que la fase móvil excediera el frente
recorrida por 4,0 cm 4,4 cm 4,4 cm del disolvente.
el azúcar
Longitud 4. Conclusiones.
recorrida por 4,6 cm 4,9 cm 4,8 cm
el disolvente
Factor de En la siguiente práctica de laboratorio se
retención 0,87 0,89 0,92 tuvo como finalidad la separación e
(Rf) identificación de monosacáridos por
cromatografía de capa fina, en esta se pudo
Tabla 1. Longitudes y Rf obtenidos en la técnica de
cromatografía para cada azúcar.
establecer la importancia de este tipo de
técnicas en la rama alimenticia además de
Los Rf obtenidos se pueden comparar con afianzar y adquirir destrezas en el uso de
los Rf reportados en la literatura y así materiales para este tipo de prácticas y
encontrar un porcentaje de desviación. fortalecer los conocimientos teórico-
prácticos en esta área de la química
orgánica.

Tabla 2. Factores de retención teóricos para
diferentes azucares.
Al estimar los porcentajes de desviación
para los factores de retención encontrados
experimentalmente con los reportados en la
tabla 2, se obtiene un valor del 89,1% para
la fructosa y 90,1% para la glucosa. Estos
altos valores permiten concluir que la
eficiencia del laboratorio no fue buena y se
puede atribuir a errores sistemáticos a la
hora de realizar la cromatografía; entre ellos
se encuentran:
7. Referencias
1. Universidad del Atlántico. Química
orgánica experimental II manual de
laboratorio. Departamento de Química,
Barranquilla, 2001.
2. Durst Dupon H., Gokel Gill W. Química
orgánica experimental. Primera edición,
Reverté, España, 2007, pp. 476 – 489.
3. L. G. Wade, Jr. Química orgánica
volumen 2. Séptima edición, Pearson,
Mexico, 2012, pp. 807 – 833.