CROMATOGRAFÌA DE CAPA FINA

Autores: García Jesús1, Issa Camila1, Sánchez Anyis1

11-Universidad de Córdoba
Facultad de Ingenierías
Montería
Colombia
Correo: jesu-garcia@hotmail.com

RESUMEN

En el estudio de los compuestos orgánicos y los diferentes métodos para separarlos se tiene
en cuenta factores como la solubilidad y la polaridad de estos, y se estima con certeza qué
método se ha de utilizar. En esta práctica de laboratorio se separan los pigmentos de una
planta (espinaca) para así utilizarlos en el método de cromatografía de capa fina, dado a que
está se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas, y para lograr esto se siguen 4
procedimientos los cuales son: extracción de la espinaca, aplicación de la muestra,
cromatografía y revelado de la placa, en este último una mancha café aparecerá demostrando
así la presencia de un compuesto orgánico en la placa producto de un complejo formado entre
el yodo gaseoso y el compuesto.

PALABRAS CLAVES

Extracción, Polaridad, Cromatografía, Compuesto Orgánico, Pigmento, Separación.

INTRODUCCIÒN
La cromatografía es un método físico de
separación en el que los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una
de las cuales está en reposo (fase
estacionaria o lecho estacionario) mientras
que la otra (fase móvil) se mueve en una
dirección definida y es característico de todo
sistema químico que, si tiene la posibilidad
de existir en dos o más estados o entornos
dando suficiente tiempo al sistema llegará
invariable al equilibrio [1]. Esto significa que
todas las fuerzas que operan en el sistema
de cualquier modo posible, llegarán
eventualmente al equilibrio. El proceso
cromatográfico se da como resultado de la
mayor o menor capacidad para ser retenidos
los diferentes componentes de una muestra
por la fase estacionaria, es decir, se basa en
los repetidos procesos de interacción durante
el movimiento de los componentes de una
mezcla arrastrados por la fase móvil a lo
largo de la fase estacionaria (elusión),
produciéndose la separación debido a las
diferencias en las constantes de distribución
de los componentes de la mezcla entre la
fase estacionaria y la móvil [2]. Desde el
punto de vista de la caracterización de los
materiales, conocer la composición de los
mismos es imprescindible puesto que las
propiedades de los materiales dependen
fundamentalmente, por un lado, de los
componentes que lo forman y, por otro, de la
proporción existente entre ellos. Otra de las
aplicaciones importantes en cromatografía
es realizar el seguimiento de una síntesis
que podría ir asociada a la preparación de
un material (una polimerización por
ejemplo). A medida que se produce la
reacción en el matraz de reacción
tendremos productos y reactivos, cuya
proporción irá variando en función de la
conversión. Es importante notar que, en
general, las técnicas de separación sólo
sirven para eso, separar, y que no nos dan
ninguna otra información acerca de la
naturaleza de los componentes separados,
de ahí que en la mayoría de los casos
estas técnicas o métodos de separación
vayan acompañados de otros métodos de
análisis (composicional y/o de grupos) con
el fin de identificar y en algunos casos
cuantificar los componentes de la muestra
separados. Como su nombre indica las
técnicas de separación sirven para separar
componentes de una muestra [3]. Existen
cuatro clases importantes de cromatografía
la cuales son cromatografía de columna,
cromatografía de capa delgada,
cromatografía de papel y cromatografía de
gases. La cromatografía de capa fina o
delgada es un procedimiento que se utiliza
para separar moléculas relativamente
pequeñas [4].

Figura 1. Análisis por desarrollo. Esquema de sistema
para hacer cromatografía en capa delgada
METODOLOGÌA
En esta práctica de laboratorio se siguieron
los siguientes procedimientos.
1. Extracción de pigmentos:
En un mortero se maceró aproximadamente
unos 25 gramos de espinaca con 20 ml de
metanol (Ver figura 2.1), de cloroformo (Ver
figura 2.2) y de éter etílico (Ver figura 2.3)
respectivamente. En las siguientes figuras se
muestran cada uno de los procedimientos.
Figura 2.1. Diagrama de flujo del
procedimiento (espinaca con metanol).
Figura 2.2. Diagrama de flujo del
procedimiento (espinaca con cloroformo).
Figura 2.3. Diagrama de flujo del
procedimiento (espinaca con éter etílico).
2. Aplicación de la muestra:
Se toma como ejemplo de sustancias a
separar por cromatografía los pigmentos
presentes en las plantas. Estos pigmentos
son los carotenos y la clorofila. Se
Introduce la punta de un capilar en la
solución de los pigmentos. Luego que la
solución ascendió en el capilar se retira.
Se toca momentáneamente y con suavidad
con la punta del capilar se llena un punto
en la placa (aproximadamente en el centro
y a 1,5 cm del borde inferior). Luego se
debe lograr una manchita circular de unos
3 a 5 mm de diámetro. Se debe tener
mucho cuidado en no perforar la superficie
del absorbente al momento de hacer la
aplicación, por lo que el toque punto de la
aplicación se hace muy suavemente y por
último se deja que el solvente se
evaporara de la placa para que está
quedara lista para hacer cromatografía.
3. Cromatografía:
En varios beakers se agregaron 2ml de
ciertos compuestos orgánicos hasta y se
tapó con un vidrio de reloj. Luego con
mucho cuidado se introdujo la placa
verticalmente por su parte superior
(mancha hacia abajo) en el recipiente
volviendo a taparlo.
4. Revelado de la placa:
Para poder ver la posición de manchas
incoloras en la placa se introduce ésta en
un recipiente cerrado con yodo (I2) en el
fondo y ahí se deja un tiempo. Como las
manchas no son muy estables al sacar la
placa del recipiente se debe demarcar con
un lápiz.
RESULTADOS
Con el propósito de obtener los pigmentos
de la hoja de espinaca, esta se maceró en
un motero con metanol (un compuesto
polar), lo que dio como resultado un líquido
de color café que fue filtrado en un beaker
(ver figura 3.)

Figura 3. Filtrado que se obtuvo de macerar la espinaca
con metanol.
Luego, a la espinaca macerada se le agregan
20ml de cloroformo, un compuesto
medianamente polar y se obtiene un
precipitado verde que se muestra en la figura
4.
Figura 4. Filtrado que se obtuvo al macerar la espinaca
con cloroformo.
Posteriormente a la espinaca macerada se le
adicionan 20ml de éter etílico, un compuesto
menos polar que el cloroformo, se obtuvo un
filtrado de color marrón. (Ver figura 5.)
Figura 5. Filtrado obtenido al macerar la espinaca con
éter etílico.
Así, a cada una de las muestras se le
realiza el procedimiento de cromatografía
de capa fina:
1) para la muestra con cloroformo, se toma
el capilar y se extrae un poco de este
filtrado para luego sobreponerse a la placa
(fase estacionaria) por encima del punto de
siembra, posteriormente se sumerge esta
placa en 2ml de éter etílico (fase móvil), y
se aprecia que la mancha verde que se
encontraba en el punto de siembra de la
placa va subiendo a medida que pasa el
tiempo, y otra pequeña mancha de color
amarillo va quedando detrás de esta, en la
figura 6. se muestra la variación del
desplazamiento a medida que pasa el
tiempo.
Figura 6. Resultado final de la variación del
desplazamiento de las manchas cuando se
sometieron a éter etílico.
Entonces, se cambia la fase móvil, es decir,
ahora se mezclan 1ml de cloroformo y 1ml
de éter de petróleo en un beaker, se
prepara otra placa y se sumerge en el
beaker, se aprecia que la mancha
comienza a subir, pero en este caso, la
mancha de color verde se queda en el
punto de siembra, y se separa de la
mancha amarilla, la cual sube; luego de un
tiempo, en el punto de siembra queda una
mancha amarillo verdoso, mas arriba una
mancha verde y mas próximo al frente del
solvente una mancha amarilla. En la figura
7. se alcanza a ver un poco la mancha
amarillo verdoso y la mancha amarilla.

Figura 7. Resultado final de la variación del
desplazamiento de las manchas cuando se sometieron a
una mezcla de cloroformo y éter de petróleo.
2) para la muestra con metanol, se toma el
capilar y se extrae un poco de este filtrado
para luego sobreponerse a la placa (fase
estacionaria) por encima del punto de
siembra, posteriormente se sumerge esta
placa en 2ml de acetato etílico (fase móvil), al
principio se aprecia que una muy diminuta
mancha amarillo verdoso va subiendo por la
placa, luego se aprecian unas muy pequeñas
coloraciones rosas entre el amarillo y el
verde (ver figura 8.)
Figura 8. Resultado final de la placa que se sometió a
acetato etílico.
Luego se cambia la fase móvil, y ahora se
agregan 2ml de cloroformo y se introduce
otra placa en el beaker, se aprecia finalmente
que en el centro de la placa resulta pequeña
mancha amarilla seguida de otra mancha
verde (ver figura 9.)
Figura 9. Resultado final de la variación del
desplazamiento de las manchas cuando se
sometieron a cloroformo.
3) para la muestra con éter etílico, se toma
el capilar y se extrae un poco de este
filtrado para luego sobreponerse a la placa
(fase estacionaria) por encima del punto de
siembra, posteriormente se sumerge esta
placa en 2ml de éter etílico (fase móvil), se
nota que aproximadamente en el centro de
la placa queda una macha amarilla seguida
de una mancha verde, y esta seguida de
otra mancha amarilla que va disminuyendo
su intensidad hasta llegar al punto de
siembra (ver figura 10.)
Figura 10. Resultado final de la placa que se sometió
a eter etílico.
Posteriormente, cada una de las placas
fueron sometida a un recipiente con Yodo,
se aprecia que tanto el lugar que fue
recubierto por cada una de las fases
móviles, como el lugar donde se
encontraban las manchas, reaccionaron
con el yodo, pero con la diferencia que en
el lugar en donde se encontraban las
manchas reaccionaron de una forma mas
fuerte, debido a que el color resultante en
estas es un amarillo mas oscuro, con esto se
confirma la presencia del compuesto en cada
una de las placas; en la figura … se pueden
ver cada una de las placas, de izquierda a
derecha en la parte 1 se muestran las dos
placas de la prueba con metanol, la parte 2
muestra las dos placas de la prueba con
cloroformo, y la parte 3 muestra las placas de
la prueba con éter etílico.

Figura… placas luego de haber sido sometidas a yodo.

ANÀLISIS Y DISCUSIÒN

El macerar la espinaca con cada uno de los

compuestos orgánicos, se realizó con el fin
de obtener los pigmentos de esta, para así
tener un punto de referencia al momento de
exponer la placa al otro compuesto orgánico
con el que se iba a practicar, la reacción de la
espinaca con compuestos como el metanol,
el cloroformo y el éter etílico
genera………………….. luego, cuando se
efectúa la muestra con
cloroformo.çççççççççççççççççççççççççççççç
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CONCLUSIÒN

REFERENCIAS BIBLIOGRÀFICAS

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