Desarrollo de la pudrición de la fruta por Phytophthora causada por Phytophthpora

capsici en frutas de sandia resistentes y susceptibles en diferentes edades

RESUMEN
La sandía es un cultivo importante que se cultiva en 44 estados de los Estados Unidos. La
pudrición de la fruta por Phytophthora causada por Phytophthora capsici es una enfermedad
grave en el sureste de los Estados Unidos donde se producen más del 50% de las sandías. La
enfermedad ha provocado graves pérdidas para los productores de sandías, especialmente en
Georgia, Carolina del Sur y Carolina del Norte durante los últimos años.

Se han desarrollado varios tipos de germoplasma de sandía resistente a la pudrición para usar
en programas de mejoramiento.

Para evaluar el desarrollo de la pudrición de la fruta por Phytophthora en frutas de diferentes

edades, se sembraron plantas de líneas fructíferas y líneas susceptibles a intervalos semanales
durante cinco semanas consecutivas en experimentos realizados durante tres años

Las flores se inspeccionaban de forma rutinaria y se polinizaban a mano para asegurar que
tuvieran diferentes edades en la fruta. En el caché, diferentes frutas envejecidas se cosecharon
el mismo día y se inocularon con un tapón de agar de 5 mm de una colonia de P. capsici en
crecimiento activo. Las frutas inoculadas se mantuvieron en una habitación con condiciones
propicias para el desarrollo de la enfermedad (>95% humedad relativa; 26+-2 °C). Después de 5
días, el diámetro de la lesión y la intensidad de la esporulación se recondonaron para la fruta de
la cachonda. El diámetro de la lesión y la intensidad de la esporulación fueron significativamente
mayores en el fruto de líneas susceptibles en comparación con las líneas de resistencia y
resistencia. La edad de la fruta no tuvo efecto en ninguna medida en líneas susceptibles (Sugar
Baby) o resistentes (PI560020 y PI 595203). Nuestros resultados mostraron que la resistencia a
la pudrición de la fruta por Phytophthora en la sandía no se correlacionó con la edad de la fruta.

La sandía es un cultivo vegetal importante que se cultiva en 44 estados de los EE. UU. En 51,597
ha, con una producción total de aproximadamente 2 millones de habitantes. toneladas de león
(USDA ERS 2012). La podredumbre de Phytophthora de la sandía causada por Phytophthora
capsici se informó por primera vez en los EE. UU. En la década de 1940 en Colorado (Wiant y
Tucker, 1940). Sin embargo, la enfermedad ahora prevalece en la mayoría de las áreas de cultivo
de sandía, y en particular en el este de los Estados Unidos, donde se produce alrededor del 53%
(27,599 ha) de la cosecha de sandía estadounidense (Gevens et al. 2008; Hausbeck y Linderman
2016; Kousik et al. 2011, 2014a, 2016; McGrath 2017; USDA ERS 2012). La pudrición de la fruta
por Phytophthora en las sandías puede ser un problema previo o posterior a la cosecha. Si la
enfermedad ocurre temprano durante la formación de la fruta, podría resultar en una pérdida
total de rendimiento. Por ejemplo, entre 2003 y 2008 y nuevamente en 2013, muchos
productores de sandía en Georgia, Carolina del Sur y Carolina del Norte no cosecharon el cultivo
debido a la grave pudrición de la fruta antes de la cosecha. En otros casos, las frutas se pudrieron
después de la cosecha durante y después del envío, lo que resultó en el rechazo de las cargas y
la pérdida de ingresos (Kousik et al. 2011, 2014a, 2016). Debido a estas situaciones, la National
Watermelon Association (NWA) mencionó la podredumbre de la fruta Phytophthora como su
principal prioridad de investigación en 2006 (Morrissey 2006) y nuevamente desde 2013 hasta
2015 (Kousik et al.2014a, 2016).
Se ha informado que P. capsici causa enfermedades en plantas que pertenecen a 23 familias
diferentes y es particularmente grave y devastador para los cultivos de hortalizas en las familias
Solanaceae, Cucurbitaceae y Fabaceae (Erwin y Ribeiro 1996; Granke et al. 2012; Hausbeck y
Lamour 2004 ; Hausbeck y Quesada Ocampo 2017; McGrath 2017; Sanogo y Ji 2012). Se sabe
que el patógeno causa una variedad de síntomas que incluyen podredumbre de la corona, tizón
foliar y podredumbre de la fruta (Granke et al, 2012 Hausbeck y Lamour 2004; Keinath 2007;
Kousik et al.2011).

En campos de cucurbitáceas severamente infestados, se sabe que P. capsici causa pérdida

completa y cese de la producción (Babadoost 2004; Babadoost y Zitter 2009; Hausbeck y Lamour
2004; Kreutzer et al. 1940). Se han desarrollado varias estrategias para el manejo de P. capsici y
debido a que ninguna estrategia única puede proporcionar un nivel de control comercialmente
aceptable, a menudo se usan en combinación.

Las prácticas más comunes son la rotación de cultivos, la solarización del suelo, la aplicación de
fungicidas y las prácticas que aseguran suelos bien drenados para prevenir el crecimiento de
patógenos y eliminar el agua estancada para reducir la dispersión de salpicaduras (Babadoost
2004; Granke et al. 2012; Hausbeck y Lamour 2004; Kousik et al. 2011, 2014a; McGrath 2017;
Sanogo y Ji 2012). Se han identificado varios fungicidas comerciales que son efectivos en el
manejo de la podredumbre de la sandía en Phytophthora (Kousik et al. 2011, 2014a, 2017). Sin
embargo, también se han documentado aislamientos de P. capsici insensibles a los fungicidas,
particularmente mefenoxam y cyazofamid (Granke et al. 2012; Hausbeck y Lamour 2004;
Jackson et al. 2012; Keinath 2007; Kousik and Keinath 2008). Además, la aplicación de fungicidas
no es muy efectiva cuando la presión de la enfermedad es alta (Granke et al. 2012; Kousik et al.
2011, 2014a; McGrath 1994). Se necesitan estrategias alternativas para el manejo de la
pudrición de la fruta por Phytophthora, como la resistencia del huésped, pero aún no están
disponibles en las variedades comerciales de sandía.

La resistencia de la planta huésped es la piedra angular de un programa de manejo integrado de

enfermedades (MIP), y los cultivares de sandía con resistencia a P. capsici serían muy útiles para
el manejo de la pudrición de la fruta por Phytophthora. Ha sido extremadamente difícil
identificar y desarrollar resistencia a la pudrición de la fruta por Phytophthora en cucurbitáceas.
Gevens et al. (2006) identificaron variedades de pepino que limitan el desarrollo de P. capsici;
sin embargo, ninguna de las variedades probadas tuvo una resistencia completa a la
podredumbre de la fruta. Más importante aún, la resistencia en el pepino se relacionó con la
etapa de desarrollo de la fruta, aumentando con la edad y el tamaño de la fruta (Ando et al.
2009, 2015; Gevens et al. 2006). Ando et al. (2009) también observaron que la fruta de sandía
del cultivar Crimson Sweet era susceptible en todas las etapas de crecimiento. Sin embargo, no
evaluaron ninguna línea de sandía resistente ya que aún no se identificaron. Para la sandía,
Kousik et al. (2012) identificaron varias introducciones de plantas de sandía (IP) con altos niveles
de resistencia a la pudrición de la fruta Phytophthora y desarrollaron líneas de germoplasma
para usar en programas de mejoramiento (Kousik et al. 2014b). En esos estudios, todas las
evaluaciones se realizaron en frutas maduras (Kousik et al. 2012) porque se piensa que las frutas
maduras de sandía son las más susceptibles a la pudrición de las frutas. El objetivo de este
estudio fue determinar si la resistencia a la pudrición de la fruta por Phytophthora varía en frutas
de diferentes edades.
MATERIALES Y METODOS

Semillas: Las semillas originales de los IP de sandía de EE. UU. Que pertenecen a la colección
central se obtuvieron de la Unidad de Conservación de Recursos Genéticos de las Plantas
(PGRCU), Griffin, GA (https://npgsweb.arsgrin.gov/gringlobal/crop.aspx?id=151). En el presente
estudio, evaluamos el fruto de líneas de germoplasma derivadas de PI 560020, PI 595203 y PI
306782 que se encontraron resistentes en el estudio anterior (Kousik et al. 2012). Además,
incluimos una línea altamente susceptible PI536464 y la variedad de sandía comercial Sugar
Baby como controles susceptibles. Se compraron semillas para Sugar Baby de Willhite Seeds
(Poolville, TX).

Patógeno. El aislamiento de P. capsici RCZ-11 se utilizó como fuente de inóculo y fue

proporcionado por el Dr. A. P. Keinath, de la Universidad de Clemson. El aislado se recolectó en
2003 de plantas de calabacín (Cucurbita pepo) en Carolina del Sur y pertenece al tipo A2 de
apareamiento. Es muy agresivo en la fruta de sandía y causa podredumbre severa (Kousik et al.
2012, 2014 a, b). El aislamiento se almacenó a largo plazo en semillas de cáñamo autoclavadas
colocadas en agua estéril como se describió anteriormente (Jackson et al.2012; Lamour y
Hausbeck 2002). El aislado se cultivó y se mantuvo en zumo de agar V8 modificado con
antibióticos (PARP) según lo descrito por otros (Jackson et al. 2012; Keinath 2007; Quesada-
Ocampo et al. 2009) y se inoculó en sandía o pepino y se aisló durante 2 semanas. Un mes antes
de los estudios realizados cada año para mantener su virulencia.

Plantación y cosecha en campo. El estudio se realizó a lo largo de tres veranos (2011, 2012 y
2013) en la Granja de Laboratorios Vegetales de los EE. UU. En Charleston, SC. Los estudios se
realizaron en campos sin antecedentes de P. capsici. El suelo era arena fina franca de Yonges en
los campos donde se cultivaban las plantas de sandía. En 2011, se evaluaron tres líneas de
germoplasma resistente derivadas de PI (PI 560020, PI 595203 y PI 306782) y dos controles
susceptibles (Sugar Baby y PI 536464). En 2012 y 2013, solo dos de los IP resistentes (PI 560020
y PI 595203) y el cheque Sugar Baby fueron evaluados. Esto se hizo principalmente para
acomodar más frutos de cada línea en las pruebas. Las plantas de cada una de las líneas se
sembraron en bandejas Jiffy de 50 celdas (Jiffy Products of America, Norwalk, OH) llenas de
Metro Mix (Sun Gro Horticulture, Bellevue, WA) y se dejaron germinar y crecer en un
invernadero durante 4 semanas. Para cosechar frutas de diferentes edades, los trasplantes de
sandía se cultivaron sembrando una vez por semana durante un total de cinco semanas
consecutivas en cada uno de los tres años. Las plantas de cuatro semanas de edad se
trasplantaron cada semana durante un total de cinco semanas consecutivas en lechos elevados
de 96 cm de ancho y 20 cm de altura cubiertos con mantillo de plástico blanco. El trasplante se
inició el 14 de julio de 2011, el 12 de julio de 2012 y el 23 de junio de 2013. En 2011, se sembraron
dos grupos de cinco plantas de cada línea o control de germoplasma cada semana durante 5
semanas para un total de 50 plantas por cada germoplasma línea. En 2012 y 2013, se sembraron
dos series de 10 plantas cada una para cada línea de germoplasma cada semana durante 5
semanas, para un total de 100 plantas para cada línea. Las plantas se espaciaron a 46 cm en filas.
La distancia entre cada parcela fue de 4,6 m. Las prácticas estándar de riego de sandía y manejo
de malezas fueron seguido (Kemble 2010). Después de acostarse pero antes de plantar, los
medianos de la fila se rociaron con Roundup Pro (1.17 litros / ha) y Strategy (2.24 litros / ha)
para el manejo de malezas. Las malezas entre lechos se controlaron durante la temporada con
aplicaciones puntuales de Roundup y cultivo manual. Las plantas se rociaron dos veces con
Oberon 2SC (490 ml / ha) para el manejo de las moscas blancas y con Cabrio EG (1.12 kg / ha)
para el manejo de la antracnosis durante cada temporada. Las flores femeninas se polinizaron a
mano y cada fruta en desarrollo se marcó mediante el monitoreo de las parcelas con regularidad.
Flores femeninas eran

Se poliniza una vez cada 4 días en cada año. Cuando la mayoría de las frutas de la primera y
aproximadamente la mitad de la segunda siembra estaban maduras, se cosechó toda la fruta de
todas las parcelas. Esto dio fruto de diferentes edades para el estudio. Todas las frutas
cosechadas se evaluaron para determinar la resistencia a la pudrición de la fruta por
Phytophthora como se describe a continuación.

Evaluación de la pudrición de la fruta. Las frutas de sandía de diferentes tamaños y edades se

etiquetaron en consecuencia y se mantuvieron en una cámara de humedad (4 × 3 × 3,7 m,
longitud × ancho × altura) con estantes de alambre como se describió anteriormente (Kousik et
al. 2012, 2014a, b ). Las frutas marcadas se colocaron en un diseño completamente al azar en
los estantes de alambre dentro de la cámara húmeda. Las frutas se desinfectaron en la superficie
con una solución de lejía Clorox al 10% (hipoclorito de sodio al 0,6%) antes de la inoculación
(Gevens et al. 2006; Kousik et al. 2014a, b). Cada fruta se inoculó colocando un tapón de agar
V8 de 5 mm de un aislado de P. capsici de 4 días de edad que crecía activamente en el centro de
la fruta como se describió anteriormente (Ando et al. 2009; Gevens et al. 2006 ; Kousik et
al.2012, 2014a, b; Krasnow et al. 2014; Krasnow and Hausbeck 2016). El tapón de agar se colocó
delicadamente sin dañar la fruta de modo que el lado del micelio tocó la fruta. Después de la
inoculación, la humedad relativa alta (> 95%) se mantuvo en la habitación usando un
humidificador y la temperatura se mantuvo a 26 ± 2 ° C. La sala se iluminó continuamente con
luces fluorescentes para mejorar la esporulación. Cinco días después de la inoculación, se midió
el diámetro de la lesión y el diámetro del área con crecimiento y esporulación del patógeno
visible (diámetro del crecimiento del patógeno) en cada fruta. La intensidad de la esporulación
dentro de la lesión se registró en una escala de 0 a 5, donde 0 = no esporulación visible y 5 =
esporangios abundantes, muy densos y que cubren la mayor parte (> 85%) del área de la lesión
como se describió anteriormente (Kousik et al. 2012, 2014a, b).

Análisis estadístico. Los datos de cada año se analizaron por separado utilizando el
procedimiento PROC GLIMMIX del software SAS (versión 9.4, Cary, NC) y los medios se
separaron mediante la opción lsmeans (P = 0.05). Los coeficientes de correlación de Pearson
entre la edad de la fruta en días y el diámetro de la lesión, el diámetro de crecimiento del
patógeno y la intensidad de la esporulación se determinaron mediante el procedimiento PROC
CORR de SAS. Dado que la polinización manual de las flores femeninas se realizó una vez cada 4
días, las frutas se agruparon en grupos de 4 días de edad y se determinó la edad media y el
tamaño medio de la lesión de pudrición de la fruta y el error estándar para cada grupo de edad.

RESULTADO

La pudrición de la fruta por Phytophthora se desarrolló muy rápidamente en los controles

susceptibles (Sugar Baby y PI 536464). A los 5 días de la inoculación, se observó pudrición severa
en frutos susceptibles de todas las edades (Fig. 1). La esporulación fue muy intensa en el fruto
de PI 536464 en todas las edades del fruto (Fig. 1) y se observaron resultados similares para
"Sugar Baby". El fruto de PI 536464 fue altamente susceptible y en algunos casos se colapsó
completamente debido a la pudrición del fruto. En 2011, la fruta de todos los IP resistentes, es
decir, PI 560020, PI 595203 y PI 306782, tuvo lesiones significativamente más pequeñas (media
<1 cm) en comparación con las frutas de PI 536464 y Sugar Baby que tenían lesiones de
aproximadamente 10 cm. de diámetro (Tabla 1 y Fig. 2). De manera similar, la esporulación fue
muy intensa en los frutos de los cultivares susceptibles en todas las edades y cubrió más del 85%
del área de la lesión en la mayoría de los frutos 5 días después de la inoculación. En 2012, se
encontró nuevamente que las frutas de Sugar Baby eran susceptibles en todas las edades con
un diámetro medio de lesión de 8 cm en comparación con <1 cm para las dos líneas de
germoplasma resistente (PI 560020 y PI 595203). De manera similar, en 2013, los frutos de Sugar
Baby fueron altamente susceptibles a P. capsici con una esporulación intensa visible en la
superficie podrida en comparación con las dos líneas resistentes (Tabla 1). Las pequeñas lesiones
que se formaron en las líneas resistentes fueron generalmente de color negro y el tejido
permaneció duro. No se observó podredumbre interna de la carne por las líneas resistentes. Sin
embargo, el tejido en los controles susceptibles era muy suave y se colapsaba fácilmente con
una presión suave debido a la grave pudrición interna.

La fruta de PI 536464 y Sugar Baby fue susceptible a P. capsici en todas las edades y se observó
una correlación positiva significativa entre la edad de la fruta y el diámetro de la lesión como se
esperaba porque el tamaño de la fruta también estaba relacionado con la edad de la fruta (Tabla
2). De manera similar, el crecimiento de patógenos se correlacionó significativamente con la
edad para los dos controles susceptibles. Las lesiones fueron generalmente más grandes en los
frutos grandes. No hubo correlación entre la intensidad de la esporulación y la edad de la fruta
de los controles susceptibles de Sugar Baby y PI 536464. Para la mayoría de las frutas
susceptibles, la intensidad de la esporulación se calificó con un 5 en la escala de 0 a 5, ya que las
lesiones estaban muy cubiertas con esporangios de P, capsici (Fig. 1). Los resultados fueron
similares en 2012 en el examen de susceptibilidad de Sugar Baby. Sin embargo, en 2013 no se
observó correlación entre la edad de la fruta y el desarrollo de la lesión. Los resultados para el
crecimiento del patógeno visible (diámetro del crecimiento del patógeno) en la superficie de la
fruta siguieron el mismo patrón que el diámetro de la lesión y la intensidad de la esporulación.

El fruto de las líneas resistentes pareció ser resistente en todas las edades, sin lesiones a lesiones
muy pequeñas que se formaron cerca o debajo del tapón de agar que se utilizó como inóculo
(Tabla 1 y Fig. 2). No hubo una correlación significativa entre la edad de la fruta y el desarrollo
de la pudrición de la fruta por Phytophthora (diámetro de la lesión, crecimiento del patógeno
visible e intensidad de esporulación) para las líneas de germoplasma derivadas de PI 306782, PI
560020 y PI 595203 en 2011. En 2012, un nivel bajo de significativo se observó una correlación
(r = 0,26) entre la edad y el diámetro de la lesión para PI 560020. Esto podría deberse a que se
evaluaron grandes cantidades de fruta durante esta temporada y se observaron pequeñas
lesiones oscuras junto al tapón de agar en algunas frutas. Sin embargo, no hubo correlación
entre la intensidad de la esporulación, el crecimiento del patógeno y la edad de la fruta. De
manera similar, en 2013, se observó una ligera correlación entre el diámetro de la lesión y la
edad de la fruta para PI 595203; sin embargo, no hubo correlación entre la intensidad de la
esporulación o el crecimiento del patógeno y la edad de la fruta. También se observaron lesiones
oscuras junto al tapón de agar en algunos frutos de PI 595203.
 FIGURA 1: Esporulación intensa y
crecimiento micelial por la
pudrición de la fruta que causa el
patógeno Phytophthora capsici en
fruta de la variedad sensible PI
536464 de diferentes edades (top

fila de frutas) en comparación con

ninguna esporulación en frutas de
PI 560020 (fila inferior) en un
experimento en 2011. La figura
indica que las frutas susceptibles
son susceptibles a P. capsici en
todas las edades de desarrollo. En
contraste, las frutas resistentes
son resistentes a todas las edades.

TABLA 1: Diámetro medio de la lesión, diámetro del crecimiento del patógeno e intensidad de
esporulación de la podredumbre de la fruta Phytophthora en frutas resistentes y susceptibles
de sandía de diferentes edades durante tres años, 2011-2013

V: Las medias seguidas por la misma letra en una columna para cada año no son
significativamente diferentes (P = 0.05).

w: N indica el número de frutos según la base de la línea de germoplasma. La media se calculó

en frutos de todas las edades que van desde 5 a 45 días después de la polinización.

x: el diámetro de la lesión se midió en dos direcciones perpendiculares en cada fruto y la media

de los dos se utilizó en el análisis.

y: El diámetro del crecimiento del patógeno se midió como el crecimiento del patógeno visible
a simple vista y la esporulación en la superficie de la fruta.

z: la intensidad de la esporulación se midió en una escala de 0 a 5 con 0 = no se observó

esporulación y 5 => 85% de la lesión cubierta con abundante esporangia de Phytophthora
capsici.
FIGURA2: Desarrollo de la lesión (diámetro de la lesión) en el fruto de sandía de las líneas de
germoplasma resistentes a la pudrición del fruto de Phytophthora PI 560020, PI 595203 y un
cultivar susceptible Sugar Baby de diferentes edades en estudios realizados en 2011 (A), 2012
(B) y 2013 (C) . El diámetro de la lesión se registró 5 días después de la inoculación. Los frutos se
agruparon en grupos de edad de 4 días a medida que las flores femeninas se polinizaban una
vez cada 4 días en cada año. Cada punto en el gráfico representa el diámetro medio de la lesión
de pudrición de la fruta y las barras representan el error estándar para la media en cada grupo
de edad.

DISCUSION

El fruto de las líneas de germoplasma resistente fue resistente en todas las edades con muy poca
o ninguna lesión, crecimiento de patógenos o esporulación observada en la mayoría de las
frutas. En contraste, el fruto de los controles susceptibles tenía lesiones grandes con un extenso
crecimiento de patógenos y abundantes esporangios en la superficie del fruto. Las líneas de
germoplasma resistentes a la pudrición de la fruta son todas de sandía tipo egusi con pulpa
blanca y azúcares bajos (Kousik et al. 2012, 2014b). La resistencia de estas líneas se está
introduciendo actualmente en cultivares de sandía de alta calidad para desarrollar líneas y
cultivares resistentes para su uso por los productores y la industria de semillas. Los resultados
del presente estudio sugieren que una vez que se desarrollen los cultivares resistentes a la
pudrición de la fruta, es probable que expresen resistencia en todas las edades. Esto podría
conducir a una reducción en el número de aplicaciones de fungicidas necesarias para controlar
la pudrición de la fruta, pero esto tendrá que evaluarse antes de la liberación de tales cultivares
resistentes.

A pesar de que las frutas son igualmente susceptibles en todas las edades, hubo una correlación
positiva entre el diámetro de la lesión y la edad de la fruta. Esto fue más probable porque el
patógeno tenía mayor área para colonizar a medida que

El tamaño de la fruta aumentó con la edad. De manera similar, la intensidad de la esporulación

en la fruta de las líneas susceptibles fue generalmente alta (con una calificación> 4.5 en escala
de 0 a 5) y cubrió> 85% del área de la lesión independientemente de la edad de la fruta, lo que
confirma aún más su susceptibilidad en todas las edades. Se observó una ligera correlación
positiva (r <0.26) entre el diámetro de la lesión y la edad de la fruta para las líneas de
germoplasma derivadas de PI 560020 en 2012 y PI 595203 en 2013. Esto podría deberse a las
pequeñas lesiones oscuras que se observaron junto a ese tapón de agar que fue utilizado como
inocuo

Lum y el gran tamaño de muestra. En estos casos, la corteza externa de la fruta tenía una lesión
negra oscura y el tejido de la fruta todavía era duro. La lesión no se diseminó dentro de la fruta
en las líneas resistentes y los síntomas parecían similares a una reacción hipersensible como se
describió anteriormente (Kousik et al. 2014b). Se están realizando más estudios para determinar
la naturaleza real de esta reacción. En contraste, en los controles susceptibles, en las frutas más
pequeñas, todo el interior de las frutas más pequeñas se pudrió, y en las frutas más grandes, la
podredumbre se extendió hasta la mitad de la fruta por debajo del punto de inoculación.
Además, observamos una mayor colonización de la fruta susceptible por P. capsici lejos del
tapón de agar en comparación con la fruta resistente usando cebadores específicos y qPCR en
tiempo real (Kousik et al., Resultados no publicados) y esto fue muy similar a nuestra qPCR
resultados descritos anteriormente (Kousik et al. 2012).

En general, la pudrición severa de la fruta se nota típicamente en los campos comerciales a

medida que las frutas comienzan a madurar. En muchos casos, esto también coincide con
fuertes lluvias en el sudeste. Debido a esto, se ha sugerido

que la fruta puede ser más susceptible debido al aumento de azúcares a medida que la fruta
madura. Sin embargo, en el presente estudio, la fruta de Sugar Baby y PI 536464 fueron
susceptibles incluso durante las primeras etapas de desarrollo, cuando los azúcares tienden a
ser muy bajos en comparación con la fruta madura.

La fruta madura de PI resistente tiene bajo contenido de azúcar (brix # 2)

(Kousik et al. 2014b) en comparación con los controles susceptibles (brix $ 9.5). En nuestros
estudios recientes para determinar la genética de la resistencia, observamos varias frutas
resistentes con mayor contenido de azúcar (brix $ 8) acercándose a la de una sandía comercial
en una población segregante F2, en comparación con los niveles más bajos en el progenitor
resistente (Kousik et al. ., resultados no publicados), lo que sugiere que la respuesta de
resistencia o susceptibilidad no es una función del contenido de azúcar.
Con pepinos, se observó que la infección generalmente ocurría en el extremo de la flor del fruto
en experimentos de campo y laboratorio (Ando et al. 2009; Gevens et al. 2006). Sin embargo,
no observamos ninguna diferencia en el nivel de infección cuando la fruta de sandía se inoculó
en el pedúnculo, el medio o el extremo de la flor con respecto al diámetro de la lesión o la
intensidad de la esporulación en accesiones resistentes o susceptibles (Kousik et al., Inédito).
Por lo tanto, como en nuestros otros estudios (Kousik et al. 2012, 2014a, b), inoculamos en el
medio de la fruta (Fig. 1).

Esto es beneficioso, porque fue más fácil medir los parámetros de la enfermedad en el medio
de la fruta y el tapón de agar no se desliza y se cae de la fruta a pesar de la superficie resbaladiza
debido a la alta humedad relativa en la habitación necesaria para realizar estos estudios. Las
inoculaciones con zoosporas pueden considerarse más naturales a diferencia del uso de un
tapón de agar.

Recientemente se desarrolló y lanzó una línea de cría de pepino resistente a la pudrición de la

fruta Phytophthora utilizando el procedimiento de inoculación de zoosporas (Grumet y Colle
2017). Hemos intentado un procedimiento similar de inoculación de zoosporas colocando una
gota en la superficie de una fruta de sandía. Sin embargo, a diferencia de la fruta del pepino, la
gota de agua se desliza rápidamente de la fruta de la sandía debido a su superficie más esférica.
Recientemente hemos desarrollado un procedimiento de inoculación de zoosporas y la fruta
madura de las líneas resistentes utilizadas en este estudio también fue resistente a las
inoculaciones de zoosporas (Kousik et al., Inédito). Porque el tapón de agar en

La técnica de oculación ha sido utilizada de manera extensa y efectiva por muchos

investigadores para analizar la pudrición de la fruta (Ando et al. 2009; Enzenbacher y Hausbeck
2012; Gevens et al. 2006; Krasnow et al. 2014; Krasnow y Hausbeck 2016; Meyer y Hausbeck
2013), nosotros también usamos tapones de agar V8 de colonias de P. capsici en crecimiento
activo, para inocular la fruta en estos estudios en lugar de zoosporas.

Se ha informado de resistencia relacionada con la edad a P. capsici en pepino, calabaza, calabaza

de invierno, calabaza de bellota y frutos de calabaza (Ando et al. 2009; Gevens et al. 2006; Meyer
y Hausbeck 2013; Krasnow y Hausbeck 2016; Krasnow et al.2014). De manera similar, se ha
observado resistencia relacionada con la edad en algunos genotipos en la pudrición de la corona
de pimientos causada por P. capsici (Hwang et al. 1996; Kim et al. 1989). Más recientemente, se
identificaron nuevas accesiones de pepino con resistencia a P. capsici en la etapa de fruta joven
en base a un cribado a gran escala de más de 1,200 accesiones (Colle et al.2014) y se lanzó una
línea de cría de pepino (Grumet y Colle 2017). En wa termelon, observamos que los frutos de
líneas resistentes eran resistentes a todas las edades y los frutos susceptibles eran susceptibles
independientemente de la edad. Del mismo modo, en el estudio de Ando et al. (2009), la fruta
de sandía del cultivar Crimson Sweet fue susceptible a todas las edades con una ligera
disminución en el tamaño de la lesión a medida que aumentaba el tamaño de la fruta; Sin
embargo, esta diferencia no fue estadísticamente significativa. En el mismo estudio, el melón,
el calabacín y la fruta de calabaza de verano evaluados fueron susceptibles en todas las edades,
de forma similar a lo que se observó en el control de sandía susceptible Sugar Baby. Por el
contrario, el nivel de infección por P. capsici en el pepino disminuyó drásticamente al aumentar
el tamaño del fruto (Ando et al. 2009). Usando el análisis transcriptómico, Ando et al. (2015)
demostraron que los genes relacionados con la defensa expresados en la cáscara eran
responsables de la resistencia relacionada con la edad en el pepino. Los estudios para
determinar si genes similares relacionados con la defensa están desempeñando un papel en la
corteza o la fruta de la sandía a diferentes edades de fruta pueden proporcionar información
adicional sobre por qué la fruta de sandía de estas líneas resistentes muestra resistencia en
todas las edades.

Los resultados de este estudio también tienen implicaciones en el uso de fungicidas en

variedades susceptibles de sandía. En estudios anteriores, los fungicidas se aplicaron
generalmente cuando la mayoría de las frutas tenían un diámetro de 7 a 10 cm (Kousik et al.
2011, 2014a, 2017). Sin embargo, según los resultados de este estudio, es posible que los
aerosoles de fungicidas tengan que iniciarse antes en campos con antecedentes de P. capsici,
particularmente cuando prevalecen las condiciones climáticas.

Las opciones favorecen la infección por P. capsici durante las fases tempranas del desarrollo del
fruto. Tales situaciones pueden resultar en una o dos aplicaciones de fungicidas adicionales. En
el estudio de Ando et al. (2009), la fruta de sandía del cultivar Crimson Sweet fue susceptible en
todas las etapas de desarrollo, similar a Sugar Baby y PI 536464 en nuestro estudio, y los autores
llegaron a una conclusión similar sobre cuándo comenzar a aplicar fungicidas para controlar la
pudrición de la fruta. Los resultados también sugieren que una vez que se desarrollen las
variedades de sandía resistentes a la pudrición de la fruta de las líneas descritas en este estudio,
la fruta probablemente será resistente a todas las edades. Sin embargo, sería prudente utilizar
un enfoque integrado para manejar la pudrición de la fruta de la sandía Phytophthora cuando
las variedades resistentes estén disponibles para minimizar la presión de selección sobre el
patógeno para superar la resistencia genética o desarrollar resistencia a los fungicidas.

Tabla2: Correlaciones entre la edad de la fruta (días) y el diámetro de la fruta y las mediciones
de pudrición de la fruta de Phytophthora (diámetro de la lesión, diámetro del crecimiento del
patógeno e intensidad de la esporulación) en fruta de sandía resistente y susceptible de
diferentes edades durante tres años, 2011 a 2013

y: No se observó crecimiento de patógenos ni esporulación en PI 595203 en 2011 y, por lo tanto,

no se informaron correlaciones. z: indica una correlación significativa en P = 0.05 y ** en P =
0.01.