Ciclo

de replicación

Teórico Nº1
•  ¿Qué es un virus?
•  ¿El tamaño es la principal caracterís>ca que
define un virus?
•  ¿Porqué un virus es un parasito intracelular
obligado?
•  ¿Todos los virus enferman a su hospedador?
•  ¿Los virus son microorganismo vivos?
•  ¿Que otras aplicaciones >enen los virus?
¿Qué es un virus?

Descubrimiento de los
virus: TMV
planta filtrado de hojas
planta sana
enferma enfermas
M a y e r , I v a n o f s k y , y
Beijerinck (1886-1903):
organismos más pequeños
que bacterias -agentes
definidos por el tamaño de
poro de los filtros de
Chamberland- que no
p u e d e n v e r s e e n e l
microscopio de campo
claro, y pueden mul>plicar
solamente en células vivas
o tejidos
planta de tabaco triturado de filtración del
enferma hojas enfermas extracto de hojas
 ¿Qué es un virus?
Definición
“Viruses are en>>es whose genomes are elements of
nucleic acid that replicate inside living cells using the
cellular synthe>c machinery and causing the synthesis of
specialized elements that can transfer the viral genome to
other cells.”
S. E. Luria, J. E. Darnell, D. Bal>more, and A. Campbell (1978)

microgreas electrónicas
de TMV

Estructura cristalográfica de TMV

TMV está formado por una cedena
de RNA envuelta por una cubierta
proteica compuesta por 2130 copias
de una proteína de envoltura
pequeña.
cristales de TMV
 Los primeros virus animales
•  1898 - Loeffler y Frosch aislaron el virus de
ahosa
•  1901 - Walter Reed descubrió el virus de la
fiebre amarilla y confirmó la hipótesis de
Carlos Juan Finlay acerca de la transmisión a
través de mosquitos vectores
•  1911 – Peyton Rous descubrió que los virus
pueden causar cancer
 Caracterización de parlculas virales
mediante microscopía electrónica

virus del mosaico

del tabaco virus de la estoma>>s rotavirus
bacteriófago T4 helicoidal no vesicular icosaédrico
no envuelto complejo envuelto envuelto no envuelto
Virus con simetría helicoidal

16 1/3 copias de la proteína

de cápside por vuelta de
hélice
 Virus con simetría icosahédrica

(A) Los virus icosahédricos más simples con>enen 3 subunidades por cara y en total 60
subunidades de cápside. (B) Las cápsides icosahédricas se ensamblan a par>r de
pentámeros de subunidades individuales que forman los vér>ces del icosahedro. (C y
D) En icosahedros más grandes, cada una de las caras triangulares se divide en
triangúlos más pequeños. Las subunidades en los vér>ces están organizadas en
pentámeros, y las demás subunidades están organizadas en hexámeros (hexones). (E)
Las interacciones entre subunidades en pentámeros y hexones adyacentes son
equivalentes (por ejemplo, las interacciones cabeza-cabeza son muy similares en toda
la cápside, independientemente de que ocurran entre pentámeros y hexones o entre
hexones y hexones).
¿El tamaño es la principal caracterís>ca
que define un virus?
Diámetro de 750 nm ≠ virus
como “agentes filtrables”

Genoma de DNA de 1.2
millones de bases que codifica
para 979 proteínas
-  aminoacil tRNA sintetasas,
reparación del DNA y
homólogos de genes
celulares que no se
encuentran en otros
genomas virales
-  proteínas sin similitud con
proteínas de otros genomas

Un grupo de genes en común
entre Mimivirus y Megavirus
(otro virus gigante
evolu>vamente distante)
sugiere que ambos virus
provienen de un ancestro
celular común y evolucionaron
perdiendo genes
 ¿Porqué un virus es un parasito
intracelular obligado?
La caracterís>ca que define a los virus es que dependenden
estrictamente de un hospedador vivo para replicar

virus unión y entrada célula infectada

traducción

El ciclo viral ocurre en dos etapas: replicacion

1.  etapa extracelular = virión

2.  etapa de mul>plicación en un célula
ensamblado
infectada = genoma viral
salida
 ¿Todos los virus enferman a su hospedador?
La pandemia de influenza
en 1918 provocó más
muertes que la 1ª Guerra
Mundial

La historia natural de la
viruela >ene más de 2000
años y se declaró erradicada
en 1977

El HIV infectó más de 70
millones de personas desde
el comienzo de la epidemia
y se es>ma que ~0,8% de la
población adulta (15-49
años) vive con HIV
 ¿Todos los virus enferman a su hospedador?

Los virus están en todas partes!

•  Los virus son las en>dades más abundantes en la biosfera
–  La biomasa de virus que infectan bacterias en nuestro planeta es mil
veces más grande que la de todos los elefantes en la Tierra
–  Los virus comprenden el 94% de las parlculas que con>enen ácidos
nucleicos en los océanos y son 15 veces más abundantes que Bacteria
y Archaea
–  El número de células en una persona promedio (~1013 células) es 10
veces más chico que el número de bacterias y 100 veces más chico
que el número de parlculas de virus
•  Los virus infectan todos los seres vivos incluyendo insectos,
plantas, bacterias y hasta otros virus

mamavirus El virus Sputnik infecta las
virus satélite Sputnik
fábricas virales y secuestra la
maquinaria de mimivirus en
el citoplasma de las amebas
infectadas para replicar.

Las células co-infectadas con
Sputnik producen menos
mimivirus y parlculas
defec>vas que hacen que el
virus sea menos infec>vo.
 ¿Porqué enfermamos?

Concentración de
parlculas virales
infec>vas

Interacción con células
suscep.bles y permisivas
en el si>o de invasión

Efecto de la mul>plicación
viral en la célula
hospedadora

Respuesta an>viral y
propagación del virus
 ¿Los virus son microorganismo vivos?
life. noun 1 c : an organismic state
characterized by capacity for
metabolism, growth, reac>on to
s>muli, and reproduc>on
"Life." Merriam-Webster.com. Merriam-
Webster, n.d. Web

“Los virus son en>dades
estrictamente intracelulares y
potencialmente patógenas con una
fase infecciosa, y (1) poseen un solo
>po de ácido nucleico, (2) se
mul>plican en la forma de su material
gené>co, (3) no son capaces de
crecer y dividirse por fisión binaria,
(4) no poseen sistemas que generan
energía.” Lwoff (1957)
 ¿Que otras aplicaciones >enen los virus?
•  Virus en estudios de biología celular y molecular
•  Virus en terapia génica y su aplicación a la medicina humana y veterinaria
(terapia del cáncer).
•  Terapia con bacteriofagos para control de bacterias patogénicas
•  Nanotecnología (para introducir pequeñas secuencias genómicas
modificadas al genoma de la célula hospedadora)
•  Virus como armas biológicas o bioterrorismo
•  Virus en agricultura (modificaciones genomicas mediante vectores virales
y la obtencion de plantas y animales transgénicos más produc>vos).
•  Virus o subunidades como Vacunas
•  Vacunas o subunidades como vacunas para prevenir el cáncer (virus de
hepa>>s B y papillomavirus para prevenir el cancer de higado y de cuello
uterino, respec>vamente).
•  Virus como control biológico de pestes en la agricultura
 Taxonomía
La clasificación de los virus emplea cuatro caracterís>cas:
1. el ácido nucleico en la parlcula viral (DNA o RNA)
2. simetría de la cubierta proteica (cápside)
3. presencia o ausencia de membrana lipídica (envoltura)
4. dimensiones de la parlcula y la cápside
 Taxonomía
La clasificación de los virus reconoce SIETE órdenes

1.  Caudovirales: bacteriófagos de dsDNA (3 familias)
2.  Herpesvirales: virus grandes de eucariotas de dsDNA (3 familias)
3.  Ligamenvirales: virus de arqueas de dsDNA lineal (2 familias)
4.  Mononegavirales: virus de plantas y animales de ssRNA no segmentado y de
polaridad nega>va (5 familias)
5.  Nidovirales: virus de vertebrados de ssRNA de polaridad positva (4 familias)
6.  Picornavirales: virus pequeños de plantas, insectos y animales de ssRNA de
polaridad posi>va (5 familias)
7.  Tymovirales: virus de plantas de ssRNA monopar>to (4 familias)

82 familias no asignadas a ningún orden: Arenaviridae, Baculoviridae,

Flaviviridae, Mimiviridae, Poxviridae, Retroviridae
virus de RNA
virus de DNA
Los virus presentan una increíble diversidad de
tamaños y formas

h|p://viralzone.expasy.org/
Morfología y
evolución de los
viriones
Un conjunto común de formas
simples dan lugar a una mul>tud
de estructuras complejas

•  Los diseños compar>dos por
los virus que infectan los tres
dominios celulares son
simples
•  Formas avanzadas derivan de
versiones más simples
•  Las formas filamentosas se
ex>enden hacia Bacteria y
Archaea
•  Formas esféricas se ex>enden
hacia Bacteria y Eukarya
•  La unidad de formas esféricas
y de cabeza-cola están
también apoyadas por
similitudes estructurales
Nasir et al. (2015) Ann. N.Y. Acad. Sci. 1341: 61-74

 El sistema de Bal>more
•  Los virus se agrupan por el >po de genoma
•  Todos los virus convergen en la síntesis de un mRNA que es decodificado por la maquinaria
del huésped

Fields virology/Knipe, Howley. – 6th ed

 Relaciones entre el >po de replicon viral y
el rango de huésped
Nasir et al. (2014) Frontiers Microbiology 5: 194
Los virus de RNA están ausentes en
arquea y son raros en bacterias
Los vertebrados hospedan
numerosos virus de RNA y retrovirus
Los virus de dsDNA son raros en
plantas y los virus de dsDNA son
abundantes en hongos
Los retrovirus están integrados en el
genoma de eucariotas mul>celulares
y están completamente ausentes en
los genomas microbianos
No hay virus capaces de cruzar las
barreras entre dominios
 Ciclo de replicación
La replicación viral puede describirse en el contexto de tres
propiedades fundamentales:

1.  Todos los genomas virales están empaquetados en
parlculas que median la transmisión entre hospedadores
2.  El genoma con>ene la información para iniciar y
completar un ciclo infec>vo en una célula suscepKble y
permisiva. El ciclo infec>vo incluye adsorción y entrada,
decodificación de la información del genoma, replicación
del genoma, y ensamblado y liberación de la progenie
viral
3.  La infección viral de un hospedador se establece de
manera tal de asegurar la propagación en la población
Rutas de síntesis de mRNA de virus RNA

Fields virology/Knipe, Howley. – 6th ed

 El genoma +ssRNA de picornavirus
virus no envuelto esférico de 30nm

la cápside icosaédrica rodea el
genoma de RNA

ssRNA(+) 7,1-8,9kb

un único ORF codifica
una poliproteína

extremo 5´ unido a la
proteína viral VPg

IRES y cola de poli(A)
 El genoma +ssRNA de flavivirus

virus envuelto esférico de ~50nm

proteínas de envoltura en un arreglo con
simetría >po icosaédrica

ssRNA(+) 10-11kb

un único ORF codifica una
poliproteína que es
procesado por proteasas
celulares y virales

5’cap y 3’ estrucutrado
 Replicación de picornavirus y flavivirus
El genoma de RNA es infec>vo y sirve de mRNA para la traducción de las proteínas
virales y de molde para la síntesis de RNA an>genómico

Fields virology/Knipe, Howley. – 6th ed

 El genoma -ssRNA de orthomixovirus
virus envuelto esférico de 80-120 nm
de diámetro

HA y NA forman espículas insertadas en
la membrana

M2, M1 y NEP

8 segmentos de ssRNA(-) asociados a
NP y al complejo de la transcriptasa
viral

8 segmentos de ssRNA(-) de entre

890 y 2340 nt codifican para 11
proteínas
-  splicing alterna.vo de los
mRNAs de MP y NS
-  leaky scanning del mRNA de
PB1
 El genoma –ssRNA de filovirus
virus envuelto filamentoso de 970 nm de largo

GP y proteína de matriz

nucleocápside cilíndrica

polimerasa L unida al genoma de ssRNA(-)

ssRNA(-) de 18-19 kb codifica para 7 proteínas

RdRp viral
-  transcribe cada uno de los genes
-  capping y poliadenilación de mRNA
Replicación de virus -ssRNA

Fields virology/Knipe, Howley. – 6th ed

 Retrovirus
virus envuelto esférico de 80-100 nm

dos copias de ssRNA(+) asociadas a la RT

viral

proteínas estructurales y enzimas

ssRNA(+) de 9,75kb con cap y

poli(A)

provirus
-  DNA integrado
-  molde para la transcripción de
mRNA genómico
-  splicing incompleto y
completo
Replicación de retrovirus

Fields virology/Knipe, Howley. – 6th ed

Rutas de síntesis de mRNA de virus DNA

Fields virology/Knipe, Howley. – 6th ed

El genoma dsDNA circular de papillomavirus
virus pequeño, no envuelto,
icosaédrico de 60 nm

cápside y dsDNA asociado a histonas
celulares

dsDNA circular de 8kb

proteínas tempranas (no estrucutrales regulatorias, E1-E7)
y tardías (estrucutrales, L1 y L2) se expresan mediante
splicing alterna>vo
Replicación de papilomavirus

Fields virology/Knipe, Howley. – 6th ed

 animales de
laboratorio
Hospedadores para
el cul>vo de virus

huevos
embrionados

células en cul>vo
lineas y cul>vos primarios
 Animales de laboratorio

•  Huésped natural o animales

de laboratorio como
conejos, ratones, ratas y
hamsters

•  La infección experimental
de animales de laboratorio
es esencial para estudiar la
patogénesis de las
infecciones virales
Huevos embrionados

•  En el huevo embrionado una

variedad de tejidos diferenciados
puede servir de sustratos para el
crecimiento de virus como
orthomyxovirus, paramyxovirus,
rhabdovirus, togavirus,
herpesvirus, y poxvirus

•  Es el método más comunmente

u>lizado para crecer el virus
influenza en el laboratorio y para
la producción de vacunas

 Infección de líneas celulares
Efecto citopá>co
no inf virus sarampión
•  cambios morfológicos inducidos

A549
por la infección que se reconocen
en el microscopio óp>co: sincicios,
placas de lisis, etc.
•  cuerpos de inclusión

Hemadsorción
BSC40
•  adsorción específica de glóbulos rojos
a células infectadas > medida
indirecta de la sínteis de proteínas
virales
no inf vaccinia

Fields virology/Knipe, Howley. – 6th ed

no todos los virus crecen en líneas celulares…

El crecimiento de papillomavirus en cul>vo requiere del acoplamiento de la regulación de la

expresión de genes virales con el estado de diferenciación de la célula blanco, que está asociado
a la arquitectura 3D de la epidermis que se pierde en células en cul>vo. La replicación del
plásmido ocurre en células del epitelio escamoso basal. En quera>nocitos diferenciados (donde
no hay síntesis de DNA celular) hay replicación vegeta>va y síntesis de DNA viral con producción
ac>va de viriones.

Moody (2010) Nature Reviews Cancer

no todos los virus crecen en líneas celulares…

•  El crecimiento de HCV en cul>vo

se desarrolló a par>r del
descubrimiento de una cepa
altamente infec>va (JFH-1)

•  El genoma de la cepa JFH-1 o

quimeras de las genes no
estructurales de JFH-1 y genes
estructurales de otros genomas
replican eficientemente en
células Huh-7 y producen
progenie viral infecciosa tanto en
céluals en cul>vo como en
modelos animales
 Ensayos cuan>ta>vos

Ensayos Ensayos
Nsicos biológicos
cuan>ficación del
medición de la
número total de
infec>vidad
parlculas virales

hemaglu>nación,
dilución límite,
recuento de parlculas
ensayos de formación
por EM, mediciones de
de placas, formación
DO, métodos
de focos
inmunológicos
 Ensayo de formación de placas
•  Se basa en la capacidad de
una parlcula viral
individual de propagar la
infección de la célula
infectada inicialmente a
las células vecinas
formando un área de
efecto citopá>co visible
macroscópicamente en
una monocapa de células

•  El número de unidades
infecciosas en un pocillo
es directamente
proporcional a la dilución
del virus
 Eficiencia de plaqueo
La relación entre parlculas y
unidades formadoras de
placas (UFP) es alta para la
mayoría de los virus animales

-  presencia de parlculas no
infec>vas (genomas con
mutaciones letales o
dañados durante la
preparación del stock)
-  no todos los virus en un
stock logran completar un
ciclo de replicación
 Hemaglu>nación
Detecta la síntesis de
proteínas virales en células
infectadas mediante la
adsorción de eritrocitos a su
superficie

Se visualiza como áreas que
se >ñen de color rojo luego
de la exposición de células
infectadas a preparaciones
de eritrocitos

Detección de la infección con
virus que no >enen efecto
citopá>co
 Comparación de la eficiencia de ensayos
cuan>ta>vos

no se puede asumir una correlación entre ensayos

- ¿qué propiedad se mide? número de parlculas ≠ infec>vidad
- ¿cuál es la sensibilidad del ensayo? recuento directo de parlculas ≠
hemaglu>nación
 ¿Qué otras u>lidades >ene el ensayo de
formación de placas de lisis?
Análisis de virus mutantes
Efecto de mutaciones que interfieren en la
replicación del virus del dengue

Análisis de compuestos
anKvirales
Inhibición de la propagación
del virus vaccinia
 Mul>plicidad de infección (moi)
•  Mide la can>dad promedio de virus que se agrega por célula en una
infección
•  Se expresa usando una medida cuan>ta>va del ltulo viral

Si se infecta un culKvo de células

a una moi = 1 ¿cada una de las
células recibe un virus?

El número de virus que recibe cada
célula a una determinada moi sigue
una distribución de Poisson
Con una moi = 3 se infectan el 99% de
las células en cul>vo
 Curva de crecimiento en un paso

•  curso temporal de la replicación viral

•  rendimiento de virus por célula en una única ronda de infección

•  á moi à un ciclo de replicación

•  â moi à múl>ples rondas de replicación
 Ciné>cas de replicación de virus de DNA y RNA

Las curvas de virus de DNA muestran fases

largas de latencia y síntesis

Para virus de RNA el ciclo se completa en
<12hs

Para virus que maduran por brotación a
nivel de la membrana plasmá>ca no se
detecta virus intracelular infeccioso
Propiedades esenciales de los virus
①  Los virus son más pequeños que bacterias y pasan a través de
filtros que no permiten el pasaje de bacterias
②  los virus sólo pueden replicar dentro de células hospedadoras
③  los virus pueden estar compuestos sólo de proteínas y ácidos
nucleicos
④  el ácido nucleico que compone muchos virus es RNA
⑤  el ácido nucleico de los virus con>ene toda su información
gené>ca
⑥  durante una etapa de su replicación los virus pueden exis>r sólo
como su ácido nucleico
⑦  los virus dependen del metabolismo de la célula hospedadora que
provee la energía y los materiales necesarios para su replicación