FACULTAD DE INGENIERIA ARQUIETECTURA Y

URBANISMO
Escuela Profesional de Ingeniería Agroindustrial y
Comercio Exterior

AUTOR:
Aspillaga Arrascue Morellya
Montoya Paiva Aaron
Nizama Rosalia
PROFESOR: Carlos Alberto Salier Guerrero
ASIGNATURA: Microbiología
CICLO: IV
AULA – SECCION: I-302
TURNO: Mañana.
I. INTRODUCCION:

Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado

diversos métodos que permiten cultivarlos bajo condicione artificiales, en
los que es posible cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar
un solo tipo de microorganismo. Una de las técnicas más usadas en el
laboratorio de microbiología consiste en transferir una muestra
microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo
que permite obtener cultivos microbianos. A l efectuar este
procedimiento, es necesario considerar que en el área de trabajo,
existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario
tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen los
cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto
nutricional, sino también las condiciones ambientales de su hábitat
natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH y
concentración de sales y durante la incubación condiciones tales como
la temperatura, aireación, la luminosidad. La aplicación de estos
procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos
mixtos, así como su aislamiento y la obtención de cultivos puros,
facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación y control
de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de
microorganismo y propósito específico del estudio.

Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el

desarrollo de éste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio
controladas. La población de microorganismos desarrollada en un medio
se denomina cultivo. Cuando éste contiene una sola especie de
microorganismo, se denomina cultivo puro o axénico, cuando contiene
más de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto.

.Un cultivo tipo contiene una especie conocida de microorganismos y es

conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y estudios.
Un cultivo axénico consiste en una sola especie microbiana, proveniente
de una sola célula. Los cultivos axénicosson muy raros en la naturaleza.
En los medios naturales -por ejemplo, en el suelo, agua, o en el cuerpo
 humano-existen cultivos mixtos. En un cultivo mixto, viven muchas y
diferentes especies de forma conjunta.
Un cultivo axénico se obtiene artificialmente en el laboratorio. A la hora
de obtener un cultivo axénico se han de tomar precauciones especiales,
ya que los microorganismos están por todas partes, en la naturaleza, en
el laboratorio y en los instrumentos y recipientes usados en los
experimentos. Estos microorganismos no deseados o contaminantes
deben ser eliminados de un cultivo para que éste pueda ser axénico. El
segundo paso para obtener un cultivo axénico es inocular o introducir,
una sola célula de un microorganismo en un medio sólido o líquido,
esterilizado previamente. De esta manera, aislamos un solo
microorganismo del resto y se podrá multiplicar en condiciones
favorables. Un clon está constituido por una población de células
descendientes de un solo microorganismo. Una colonia es un clon lo
suficientemente grande como para ser visible sobre la superficie de un
medio sólido. Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto
tiempo en el mismo tubo o matraz, debe ser transferido a un medio de
cultivo nuevo, de otra manera el crecimiento y sobrevivencia no pueden
continuar. En esta transferencia se deben considerar dos aspectos
básicos referentes a: no introducir microorganismos indeseables
(contaminantes) y concentración o carga microbiana de la muestra
(inóculo) a sembrar.

II. OBJETIVO

 Conocer los métodos y a aislar bacterias por siembra en estrías en el laboratorio de

microbiología.
 Reconocer la utilidad de las diferentes técnicas de siembra en el trabajo de
microorganismos.
 Como caracterizar bacterias por sus colonias
 Definir experimentalmente un cultivo puro de bacteria
III. MATERIALES:

IV. MARCO TEORICO

4.1. Poblaciones Mixtas

Aislamiento de colonias discretas de un cultivo mixto: Las

técnicas usadas para aislar colonias discretas requieren que el
número de organismos en el inóculo sea reducido, de modo que,
luego de la inoculación, las células individuales estén lo
suficientemente lejanas unas de otras en la superficie del agar y
se efectúa, de dicha manera, la separación de las diferentes
especies presentes. Uno de las técnicas usadas para lograr la
dilución deseada se conoce como Método de Rayado de Placas o
siembra por estrías. En este método se “unta” una cantidad del
cultivo en la superficie de un plato de agar. Vamos a describir el
método de 4 cuadrantes para el rayado: a. Coloque un asa de
cultivo en el agar. Flamee el asa (inoculador) y enfríelo tocando
una porción no usada del agar cercano a la periferia del mismo, y
páselo varias veces a lo largo del área o cuadrante 1. b. Flamee
el asa de nuevo y enfríela, gire el plato de Petri 90⁰. Toque con el
asa una esquina del cultivo en el área 1 y arrástrelo varias veces
a través del área 2. El asa no debe entrar de nuevo al área 1. c.
Flamee el asa de nuevo y enfríela, gire el plato de Petri 90⁰.
Repita el paso b en el Área 3. d. Sin flamear de nuevo, repita el
paso c, comenzando en una esquina del Área 3 y arrastrándola al
Área 4. No deje que el asa toque las áreas 1 a 3.
4.2. Cultivo puro

 Técnica de siembra por estrías en placa

 Técnica por difusión en placa
 Técnica del enriquecimiento del cultivo
 Técnica de las diluciones en serie
 Aislamiento de una sola bacteria
 Técnicas de aislamiento:

4.3. Tipos de Siembra

 En medio líquido con asa: Transferir asépticamente, con el asa

de siembra, una pequeña muestra de los microorganismos,
desde el tubo que contiene el material problema al tubo con
medio de cultivo estéril. Sumergir el asa en el líquido y agitar para
desprender y diluir la muestra. Incubar el tubo recién sembrado
en estufa, durante 24-48 horas a la temperatura óptima de
crecimiento

 En medio líquido con pipeta: Introducir asépticamente la pipeta

Pasteur o la pipeta graduada en el medio líquido que contiene los
microorganismos y, aspirando de forma adecuada, sacar una
cantidad establecida de material que se transfiere al tubo con
 medio de cultivo estéril. Incubar en estufa durante 24-48 horas a
la temperatura más adecuada.

 En medio sólido (agar inclinado): Con el asa de siembra estéril

tomar los microorganismos de la muestra e inocular el tubo
realizando un movimiento de zig-zag en la superficie. El proceso
se inicia en el fondo y se va avanzando hacia arriba por el área
inclinada. Incubar en estufa durante 28-48 horas a la temperatura
más adecuada.

 En medio semisólido: La siembra en este tipo de medio, que

contiene una proporción menor de agar que los medios sólidos y
que se envasa en tubos, se lleva a cabo con un hilo de siembra
esterilizado, con el cual se toma la muestra. El medio queda
inoculado al introducir el hilo en profundidad hasta el fondo del
tubo, retirándolo posteriormente por la misma trayectoria utilizada
al realizarla picadura. Una siembra con asa o con un cierto
movimiento de vaivén podría originar un patrón de crecimiento
 que se interpretaría erróneamente como movilidad bacteriana.
Incubar durante 24-48 horas a la temperatura óptima de
crecimiento.

4.4. Vertido en placa y extensión en placa:

4.5. Aislamiento de anaerobiosis:

 Estrictos (2): crecen en atmósferas con una tensión de oxígeno

inferior al 0,5%. Mueren en presencia de cantidades mayores
 Aerotolerantes (5): pueden sobrevivir en presencia de oxígeno
(hasta un 8%), pero son incapaces de utilizarlo para su
metabolismo.
 La tolerancia viene determinada por la presencia de enzimas:
superoxido dismutasa (SOD), catalasa y peroxidasa que catalizan
la conversión de radicales superóxido a peróxido de hidrógeno,
menos tóxico, y a oxígeno molecular
Examen microscópico

- Tinción de gram: muchas infecciones anaerobias pueden ser

polimicrobianas.

- Tinción y observación de esporas (puede indicar Clostridium).

- Observación de ramificaciones en los extremos de las células o filamentos

(puede indicar Actynomices).

- Observación células fusiformes (puede indicar Fusobacterium).

 V. RESULTADOS:

PRACTICA DE METODO DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

METODO DE
ESTRIA

EXPOSICIÓN
AL MEDIO
AMBIENTE

HISOPADO
DE MANO SIN
LAVAR

HISOPADO
DE MANO
LAVADA CON
DETERGENTE

VI. CONCLUSIONES:

- Se llegó al cabo de reconocer los modos de preparar un cultivo.

- Se logró Conocer a que denominamos medio de cultivo en el laboratorio de
microbiología.
- También aprendimos a reconocer
la utilidad de los diferentes medios de
cultivo en el trabajo de microrganismos.
- Así mismo aprendimos a
reconocer la existencia de diferentes
tipos de medio.

VII. ANEXOS
 VIII. BIBLIOGR
AFÍA

Microbiología General, Tema

2.- Cultivo de
microorganismos.
http://www.unavarra.es/gen
mic/microgral/Tema%2002.%
20Cultivo%20de%20 microoorganismos.pdf Fecha de consulta: 22-04-2010

CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS http://www.monografias.com/trabajos-

pdf4/cultivo-y-aislamiento-bacterias/cultivo-y-aislamiento-bacterias.pdf