Introducción

La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta distintas

variantes. En toda separación cromatográfica hay dos fases (sólida, líquida o gas) una móvil y otra
estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto íntimo. La muestra se
introduce en la fase móvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la
móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las
fases, con lo que se produce la separación. Si un componente está la mayor parte del tiempo en la fase
móvil el producto se mueve rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase
estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho más lenta.

Teoría
Cromatografía
La cromatografía engloba a un conjunto de técnicas basadas en la separación de los componentes de
una mezcla y su posterior detección.Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas
hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a
través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.Los componentes
de la mezcla interaccionan con distinta forma con la fase estacionaria y con la fase móvil. De este modo,
los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Después de
haber pasado los componentes por la fase estacionaria y haberse separado pasan por un detector que
genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de compuesto.
Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según cómo esté dispuesta la fase estacionaria:
 Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel. Las
principales técnicas son:
o Cromatografía en papel
o Cromatografía en capa fina
 Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido
empleado como fase móvil se distinguen:
o Cromatografía de líquidos
o Cromatografía de gases
o Cromatografía de fluidos supercríticos

La cromatografía de gases es útil para gases o para compuestos relativamente volátiles, lo que incluye a
numerosos compuestos orgánicos.Dentro de la cromatografía líquida destaca la cromatografía líquida de
alta resolución (HPLC, del inglés High Perfomance Liquid Chromatography), que es la técnica
cromatográfica más empleada en la actualidad.

Cromatografía en papel

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis
cualitativos ya que pese a no ser una técnica muy potente no requiere de ningún tipo de equipamiento.La
fase estacionaria esta constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en
un extremo colcando pequeñas gotas de la solución y evaporando el solvente. Luego el disolvente
empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel
verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase móvil en el
fondo tal como muestra la figura.Luego de unos minutos cuando el solvente deja de ascender o ha
llegado al extremo se retira el papel y seca. Si el solvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen
color propio se verán las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color
propio el papel se somete a procesos de revelado.

Cromatografía en capa fina

La cromatografía en capa fina, o más comúnmente TLC (thin layer chromatography, en inglés), es una
técnica cromatográfica utilizada, entre otros posibles usos, para separar los componentes puros que
forman parte de una mezcla.Esta separación se consigue mediante la diferencia entre las fuerzas de
adhesión de las moléculas de los componentes a una fase móvil (normalmente, un disolvente) y a una
fase estacionaria (la llamada capa fina, que puede ser papel o gel de sílice). Esta diferencia se
traduce en un mayor o menor desplazamiento o movilidad de cada componente
individual, lo cual permite su separación e identificación.

Cromatografía en columna
Técnica Fase Fase
 móvil estacionaria
Cromatografía Sólido o
Gas
de gases líquido
Sólido o
Cromatografía
Líquido líquido
líquida
(polar) (menos
en fase inversa
polar)
Cromatografía Líquido Sólido o
líquida (menos líquido
en fase normal polar) (polar)
Cromatografía
líquida Líquido
Sólido
de intercambio (polar)
iónico
Cromatografía
líquida Líquido Sólido
de exclusión
Cromatografía
líquida Líquido Sólido
de adsorción
Cromatografía
de
Líquido Sólido
fluidos
supercríticos

Cromatografía de líquidos

La Cromatografía de líquidos es una técnica ampliamente utilizada que permite separar físicamente y
cuantificar los distintos componentes de una solución. En toda cromatografía existe un contacto entre dos
fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria, y una móvil (fase móvil) que fluye permanente
durante el análisis, y que en este caso es un líquido. Las sustancias que permanecen más tiempo, libres
en la fase móvil, avanzan más rápidamente con el fluir de la misma y las que quedan más unidas a la fase
estacionaria o retenidas avanzan menos y por tanto tardarán más en salir o fluir. Éste es el principio
fundamental de la cromatografía.

Métodos de cromatografía líquida

Mecanismo
Método Abreviatura
predominante

Líquido,
Adsorción sobre
sólido o de LSC
la superficie
adsorción

Reparto entre
fases líquidas,
Líquido LLC
una móvil y la
otra estacionaria.

Reparto y / o
Fase adsorción entre
BPC
enlazada las fases móvil y
enlazada.
 Separación de
Pares de pares de iones
IPC
iones entre las fases
móvil y enlazada.

Uso de la carga
por adsorción
sobre un sitio
Intercambio iónico fijo por
IEC
iónico medio de
intercambio de
cationes o de
aniones.

Aprovechamiento
del tamaño de las
Exclusión moléculas por su
EC
estérica difusión dentro de
poros de tamaño
adecuado.

Uso de la
estructura de
ligantes
inmovilizados
Afinidad --
para unir
bioselectivamente
la proteína
deseada.

Cromatografía de fluidos supercríticos

La cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) es una técnica híbrida entre la cromatografía de gases
(GC) y la HPLC, que combina lo mejor de ambas técnicas. Esta técnica es importante porque permite la
separación de mezclas en las que no es adecuada la aplicación de la GC ni de la HPLC. En concreto, se
aplica a compuestos no volátiles o térmicamente inestables que no pueden ser separados mendiante GC,
o aquellos que contienen grupos funcionales que imposibilitan su detección en HPLC.

Instrumentación

Debido a las características de la fase móvil (alta presión y temperatura) se emplean equipos parecidos a
los de HPLC, con varias diferencias:

 El empleo de un horno termostático para poder controlar con precisión la temperatura de la fase
móvil.
 El uso de un restrictor, empleado para poder mantener por una parte la presión en el interior de
la columna y por otra parte permitir la bajada de la presión a la salida para que el fluido
supercrítico (SF en adelante) pase al estado gaseoso y pueda ser detectado adecuadamente el
analito.

Básicamente, un restrictor es un tubo capilar de unos 2 a 10 cm de longitud y un diámetro interno menor

al de la columna (típicamente 1/10 del diámetro), donde a la salida el SF expande y pasa al estado
gaseoso y se puede mantener simultáneamente la presión en el interior de la columna.

A diferencia de la cromatografía de gases, en la SFC no se aumenta la velocidad de elución modificando

la temperatura, sino la presión del SF. El aumento de presión, al aumentar la densidad, permite una mayor
interacción analito-fase móvil y disminuye los tiempos de elución. Se suele emplear en las eluciones una
primera etapa isobárica para luego aumentar la presión lineal o asintóticamente hasta el final de la
elución.

Fases estacionarias

Se pueden emplear, al igual que en la GC, las columnas capilares o de relleno, prefiriéndose las primeras.
Las dimensiones son parecidas en longitud, de 10 a 20 m, y el diámetro interno es bastante menor, de
0,05 a 0,10 mm. La película interna es de siloxano entrelazado y polimerizado. Si se emplean columnas
de relleno, su diámetro interno varía entre 0,5 y 4,6 mm, y el grosor de la partícula de relleno es de 3 a 10
μm. En este caso, el recubrimiento es parecido al empleando en HPLC de reparto.

Fases móviles

La fase móvil estrella en la SFC es el dióxido de carbono, por sus excelentes propiedades:

 Apolar, disuelve una gran variedad de moléculas orgánicas.

 Transparente a la radiación ultravioleta
 Inodoro
 No tóxico
 Fácil de obtener
 Barato
 No inflamable

El CO2 tiene la ventaja de que se puede obtener fácilmente como fluido supercrítico. Su temperatura
crítica es de 31ºC y la presión crítica de 72,9 atm, condiciones realmente asequibles y por debajo del
rango de condiciones usuales en la HPLC.

Otras fases móviles también probadas y empleadas son el etano, pentano, dietiléter, amoníaco,
tetrahidrofurano, diclorofluorometano y óxido nitroso.

Detectores

Se puede emplear el detector de ionización de llama (también usado en GC), por sus características de
universalidad (permite detectar casi cualquier compuesto orgánico), alta sensibilidad y bajo
mantenimiento. El espectrómetro de masas también tiene utilidad, al tener una salida en fase gas, y
detectores espectrofotométricos como el de infrarrojos, ultravioleta, el de emisión por fluorescencia, el
termoiónico y el fotométrico de llama.

Aplicaciones

La SFC se aplica a una gran variedad de compuestos, entre los que podemos citar drogas, alimentos,
herbicidas, tensioactivos, polímeros, explosivos, polímeros y aditivos para éstos, impelentes, explosivos o
combustibles fósiles.

Bibliografía

http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa

"http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_papel"
"http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina"

http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_de_l%C3%ADquidos

http://www.ugr.es/~quiored/lab/oper_bas/crom.htm

http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/cromatografia.htm

http://www.unav.es/ciencias/estudios/doctorado/programas/cromatoabsorcion.html